【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物检测，具体涉及一种浓香包包曲乳酸菌检测方法。
技术介绍
1、乳酸菌的检测，目前已有国家标准可以遵循，如gb4789.35～2016《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》。此标准中的检测方法与本专利技术最为接近，规定了含乳酸菌食品中乳酸菌(lacticacidbacteria)的检验方法。缺陷如下：
2、(1)此标准中的检测方法适用于含活性乳酸菌的食品中乳酸菌的检验，未注明适用于浓香包包曲中乳酸菌总数检测，浓香包包曲中乳酸菌总数检测目前未有统一标准。
3、(2)浓香包包曲中含有霉菌、酵母、芽孢杆菌、乳酸菌等多类微生物，相比于食品更为复杂。包包曲中乳酸菌类微生物总数的检测会受到其它微生物的影响，特别是受到芽孢杆菌的干扰。浓香包包曲中芽孢杆菌类微生物含量与乳酸菌类微生物含量数量相当，芽孢杆菌类微生物的生长速度快于乳酸菌类微生物，对营养的需求低于乳酸菌类微生物，导致平板上乳酸菌类被芽孢杆菌类所覆盖，无法计数或计数不准确，包包曲中乳酸菌总数的准确和快速检测是浓香白酒厂家需要攻克的技术难点之一。
4、(3)此标准中的改良mrs培养基成分可能造成皮肤刺激、眼刺激、眼损伤及可能引起呼吸道刺激，存在安全隐患。
5、(4)浓香白酒厂家包包曲产量大，检测需求量大，需要快速准确完成检测，此方法操作步骤较为繁琐，无法满足检测需求。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种浓香包包曲乳酸菌检测方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种浓香包包曲乳酸菌检测方法，具体步骤包括：
3、步骤一：添加抗生素与混酸；
4、稀释涂布平板法：将培养基灭菌后冷却至60-70℃时，在mrs培养基中按照每100ml培养基添加0.05ml两性霉素母液的比例加入两性霉素母液,同时添加体积分数0.1％乙酸:乳酸＝1:3的酸抑制芽孢杆菌生长；
5、步骤二：倒平板；
6、待培养基冷却至50℃时倒入平板中，每个平板中含培养基15-20ml；待平板凝固后，于无菌操作室中倒置放置2-3天，待平板干燥，无冷凝水、无污染后即可使用；
7、步骤三：编号；
8、s31：取盛有10ml已灭菌生理盐水的试管，排列于试管架上，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4；
9、s32：取干燥后的平板，用记号笔标明培养基名称与所需涂布梯度，每个梯度设置2个平行，在每个平板中倒入无菌玻璃珠4-6颗，将平板倒置备用；同时设置两个空白对照平板；
10、步骤四：菌悬液的制备；
11、s41：称取10g曲样至90ml生理盐水中，于30℃，180r/min摇床活化30min后取出，制成10-1菌悬液；
12、s42：以无菌枪头吸取1ml 10-1菌悬液至盛有9ml的生理盐水的试管中，在涡旋混匀器上混匀，制成10-2菌悬液；制备10倍递增系列稀释样品匀液；每递增稀释一次，换用1支1ml的无菌枪头；
13、步骤五：涂布；
14、根据对大曲样品中乳酸菌数的估计，选择2-3个适宜的稀释梯度，各取100ul菌悬液涂布于培养基上，每个稀释度做三个平行，于37℃，培养1-2天，计数；同时准备空白对照平板一起培养；
15、步骤六：菌落计数；
16、观察记录稀释倍数和相应的乳酸菌菌落数，以菌落形成单位cfu表示。
17、优选的，步骤一中，培养基灭菌处理需要保持在115℃，灭菌30min。
18、优选的，步骤一中，两性霉素母液的制备：称取0.2g两性霉素b于无菌离心管中，加入10ml二甲基亚砜，混匀后即为两性霉素母液。
19、优选的，步骤六中，菌落应采用两个平板的平均数乘以相应稀释倍数，即为每克或每毫升检样中所含乳酸菌数，计算公式如下：
20、菌落总数(大曲以cfu/g表示)＝同一稀释度两次重复的菌落平均数×稀释倍数。
21、优选的，同一稀释度的两个重复的平板菌落数不能相差悬殊；三个稀释度计算出的每克曲样中总菌数也不能相差悬殊；若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。
22、优选的，步骤一中，两性霉素母液可用2％的那他霉素替代。
23、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术的浓香包包曲乳酸菌检测方法，通过添加适量抗生素与混酸，抑制浓香包包曲样品菌液中芽孢杆菌类微生物的生长，在不影响乳酸菌类微生物生长的情况下，除去芽孢杆菌类微生物对乳酸菌总数检测的干扰，达到快速准确检测浓香包包曲中乳酸菌含量的效果；
24、本专利技术的检测方法操作简单，适用于浓香包包曲样品乳酸菌检测，检测快速且准确，不受芽孢杆菌类微生物影响；
25、本专利技术的检测方法采用涂布培养，乳酸菌长在培养基表面，有利于菌落的形态观察和分析，便于准确计数；
26、本专利技术的检测方法采用两性霉素b作为抗生素，用乙酸和乳酸调节培养基ph，降低了检测成本，排除了安全隐患。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种浓香包包曲乳酸菌检测方法，其特征在于：具体步骤包括：
2.根据权利要求1所述的一种浓香包包曲乳酸菌检测方法，其特征在于：步骤一中，培养基灭菌处理需要保持在115℃，灭菌30min。
3.根据权利要求1所述的一种浓香包包曲乳酸菌检测方法，其特征在于：步骤一中，两性霉素母液的制备：称取0.2g两性霉素B于无菌离心管中，加入10ml二甲基亚砜，混匀后即为两性霉素母液。
4.根据权利要求1所述的一种浓香包包曲乳酸菌检测方法，其特征在于：步骤六中，菌落应采用两个平板的平均数乘以相应稀释倍数，即为每克或每毫升检样中所含乳酸菌数，计算公式如下：
5.根据权利要求1所述的一种浓香包包曲乳酸菌检测方法，其特征在于：同一稀释度的两个重复的平板菌落数不能相差悬殊；三个稀释度计算出的每克曲样中总菌数也不能相差悬殊；若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。
6.根据权利要求1所述的一种浓香包包曲乳酸菌检测方法，其特征在于：步骤一中，两性霉素母液可用2％的那他霉素替代。
【技术特征摘要】
1.一种浓香包包曲乳酸菌检测方法，其特征在于：具体步骤包括：
2.根据权利要求1所述的一种浓香包包曲乳酸菌检测方法，其特征在于：步骤一中，培养基灭菌处理需要保持在115℃，灭菌30min。
3.根据权利要求1所述的一种浓香包包曲乳酸菌检测方法，其特征在于：步骤一中，两性霉素母液的制备：称取0.2g两性霉素b于无菌离心管中，加入10ml二甲基亚砜，混匀后即为两性霉素母液。
4.根据权利要求1所述的一种浓香包包曲乳酸菌检测方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：周伟，陈杰，文章，李维维，郭铮祥，王灵香，蒋佳静，徐青柳，万梦洁，程鑫凯，刘益男，刘怀臣，
申请(专利权)人：宜宾南溪酒业有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。