【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物农业，具体涉及一种谷胱甘肽s-转移酶、编码基因及其应用。
技术介绍
1、木瓜是热带和亚热带国家广泛种植的水果，含有大量维生素a、b9、c和类胡萝卜素等营养物质，且具有很强的抗癌活性。然而，木瓜容易受到一系列坏死型真菌病原体的侵染，在果实表面产生黑斑，影响品质和价格。目前，对木瓜品质的把控很大程度上依赖于二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂如福美双。然而，这类杀菌剂大多对动物有毒，可导致细胞线粒体损伤、细胞凋亡、高血糖、神经变性和不孕症等。因此，针对采后果蔬中的农药残留问题，开发安全的生物降解方法是重要研究方向。
2、谷胱甘肽s-转移酶(gst)是生物体的重要解毒酶，广泛存在于动物、植物和微生物中。cn103170089a公开了一种谷胱甘肽-s转移酶(gst)蛋白在降解多种农药中的应用，通过从农药厂周边的土壤中分离出一株能够高效降解乙酰甲胺磷农药的细菌，并从该菌中克隆出一个gst基因，将纯化后的gst蛋白加入到含有还原型谷胱甘肽(gsh)和农药(可溶性差)的反应体系中，结果显示该蛋白可将农药降解为水溶性更强的产物便于生物体排出体外。但是这种方法需要额外添加gsh，此外，该蛋白催化的反应机制也不明确。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一是提供一种谷胱甘肽s-转移酶，其氨基酸序列如下：
2、madevvlldfwpspfgmririalaekgihyeykeenlrnksplllqmnpvhkkipvlihngkpicesliqiqyidevwsdkap
3、本专利技术的目的之二是提供编码上述谷胱甘肽s-转移酶的基因。
4、在本专利技术的一个实施例中，所述基因的核苷酸序列如下：
5、atggcggacgaggttgttctcttggatttctggccaagcccttttggaatgagaatcagaatcgctttagccgagaagggtattcactacgagtacaaggaagagaatctgagaaacaagagtcccttactcctgcagatgaacccggtacacaagaaaatcccggttctcatccacaatggtaaacccatctgtgagtctttgatccagattcagtacatagatgaggtatggagcgacaaggctcctctgcttccctctgatccttatcagagagctcaagccaggttctgggctgactatgttgacaagaagatgtatgaagctgggaggagagtttggacgactaaaggggaagaacaggagggggccaagaaagagttcatagaaatcttgaagactttggagggagaacttggggagaagccttattttggtggggaaagttttgggtatgtggatttgacttttatcccattctacacttggttcagtgtgtatgaaagttttgggaagatgagcatagaggcagaatgccccaagttgtttagttgggtgaaaaggtgtttggagaaggagagtgtttcaaaatctctgcctgatcaagataaggtatacggcttcgttttggaactcaggaaggctcttgggatttga(seq id no.2)。
6、本专利技术的目的之三是提供携带上述基因的重组载体。
7、在本专利技术的一个实施例中，所述重组载体为pet30a。
8、本专利技术的目的之四是提供含有上述基因的工程菌。
9、在本专利技术的一个实施例中，所述工程菌为大肠杆菌。
10、本专利技术的目的之五是提供上述谷胱甘肽s-转移酶、上述重组载体或上述工程菌在降解二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂中的应用。
11、进一步地，所述二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂选自福美双、二硫化四乙基秋兰姆、二硫化四异丙基秋兰姆、二硫化四丁基秋兰姆或二硫化四苄基秋兰姆。
12、本专利技术从木瓜中克隆出gst基因，命名为cpgst，并成功在大肠杆菌bl21(de3)中进行异源表达，获得的gst蛋白命名为cpgst。该cpgst无需额外添加gsh即可降解二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂，同时，本专利技术还通过分子对接模拟和点突变研究了cpgst降解这类杀菌剂的作用机制。
13、在本专利技术的一个实施例中，17.07u cpgst常温下可在20h内使得含有0.18mm二硫代氨基甲酸酯类农药的去除率达到100％。
14、专利技术人在前期工作中发现木瓜皮可加速福美双二硫键的断裂，推测木瓜中可能存在高效催化二硫键断裂的gst蛋白，于是对该基因进行克隆、表达、纯化及其应用研究。
15、本专利技术以木瓜的基因组为模板得到了谷胱甘肽s-转移酶基因(cpgst)，该基因表达产物可高效降解二硫代氨基甲酸酯类农药，特别是福美双和二硫化四苄基秋兰姆。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1. 一种谷胱甘肽S-转移酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.编码权利要求1所述的谷胱甘肽S-转移酶的基因。
3. 根据权利要求2所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.携带权利要求2所述基因的重组载体。
5.含有权利要求2所述基因的工程菌。
6.权利要求1所述的谷胱甘肽S-转移酶、权利要求4所述的重组载体或权利要求5所述的工程菌在降解二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂选自福美双、二硫化四乙基秋兰姆、二硫化四异丙基秋兰姆、二硫化四丁基秋兰姆或二硫化四苄基秋兰姆。
【技术特征摘要】
1. 一种谷胱甘肽s-转移酶，其氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.编码权利要求1所述的谷胱甘肽s-转移酶的基因。
3. 根据权利要求2所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no.2所示。
4.携带权利要求2所述基因的重组载体。
5.含有权利要求2所述基因的...
【专利技术属性】
技术研发人员：拉博德·佩德罗，王苏妍，王燕霞，丹妮拉·埃雷拉巴兰德拉诺，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。