【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种构建体和方法，其用于改善病毒颗粒，尤其是表达用于疫苗的抗原的病毒颗粒，的生产。本专利技术特别涉及修饰抗原，其中已对抗原进行突变，以将抗原靶向质膜和/或减少膜融合/合胞体形成。例如，本专利技术涉及sars-cov-2刺突蛋白的修饰形式。本专利技术提供了编码这种修饰刺突蛋白的多核苷酸，以及包括所述多核苷酸的病毒颗粒和包括所述病毒颗粒的药物组合物/疫苗。本专利技术还涉及生产所述病毒颗粒和疫苗的方法。
技术介绍
1、自从2019年末首次出现病例以来，sars-cov-2(也称为covid-19或2019-ncov)已经是一个严重的全球健康问题。截至2021年3月，全世界有超过120,000,000例病例，并且超过2,700,000例死亡。接种sars-cov-2疫苗被认为是克服这一流行病的关键。
2、许多疫苗已经被批准，而其它疫苗正在开发，包含病毒载体疫苗、核酸疫苗(mrna和dna)、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、灭活疫苗和减毒疫苗。疫苗通常使用sars-cov-2刺突蛋白作为抗原。
3、提供不仅具有增强的免疫原性的疫苗、还有可以更有效地生产以满足世界范围需求的疫苗，仍然是有需要的。这不仅对于sars-cov-2，而且对于靶向其它病毒感染的疫苗也是如此。
技术实现思路
1、本专利技术提供了编码来自病毒的抗原的多核苷酸，其中所述抗原已被修饰(i)以将所述抗原靶向质膜和/或(ii)以减少膜融合和/或合胞体的形成。
2、本专利技术还提供了包括
3、本专利技术还提供了由本专利技术的多核苷酸编码的多肽和包括本专利技术的多核苷酸的病毒颗粒。
4、本专利技术还提供了包括所述病毒颗粒的疫苗。
5、最后，本专利技术提供了生产本专利技术的病毒颗粒的方法，所述方法包括在允许病毒产生的条件下培养包括本专利技术的载体的宿主细胞，并收获由宿主细胞产生的病毒。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种编码来自病毒的抗原的多核苷酸，其中所述抗原已被修饰(i)以将所述抗原靶向质膜和/或(ii)以减少膜融合和/或合胞体的形成。
2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述抗原是I类、II类或III类膜融合蛋白。
3.如权利要求1或2所述的多核苷酸，其中通过修饰抗原的胞质尾来增加对质膜的靶向，例如其中取代多元基序，可选地二元基序。
4.如权利要求3所述的多核苷酸，其中所述多元基序被丙氨酸取代。
5.如前述权利要求任一所述的多核苷酸，其中所述胞质尾被置换为来自传染性支气管炎病毒的、其中双赖氨酸基序被置换的胞质尾，例如其中所述双赖氨酸基序被丙氨酸置换，可选地其中：
6.如权利要求5所述的多核苷酸，其中修饰抗原的胞质尾包括以下序列：GCCGCCCGCFGIIPLMSKCGKKSSAATTFDNDVVTEQYRPAASV(SEQ ID NO:7)。
7.如前述权利要求任一所述的多核苷酸，其中减少膜融合和/或合胞体形成的修饰包括色氨酸残基的取代，可选地其中色氨酸残基在抗原的跨膜结构域中，例如在跨膜结构域的芳香族链段中。
8.如权利要求7所述的多核苷酸，其中色氨酸残基被丙氨酸取代。
9.如权利要求8所述的多核苷酸，其中基序WXWXXW(SEQ ID NO:11)被AXAXAXXA(SEQ IDNO:12)置换。
10.如前述权利要求任一所述的多核苷酸，其中所述抗原来自冠状病毒，例如其中所述抗原是SARS-CoV-2的刺突(S)蛋白。
11.如权利要求10所述的多核苷酸，其编码的SARS-CoV-2刺突蛋白包括序列KTYIKAPAYVALAIAFATIIFILGILWLFFMTGCCGCCCGCFGIIPLMSKCGKSSAATTFDNDVVTEQYRPAASV(SEQ IDNO:16)或YIKAPAYVALAIAFATIIFILGWLFFMTGCCGCCCGCFGIIPLMSKCGKSSAATTFDNDVVTEQYRPAASV(SEQ ID NO:42)，或包括
12.如权利要求11所述的多核苷酸，其中变体保留了AXAXXA(SEQ ID NO:12)基序以及-3和-4位的AA残基。
13.如前述权利要求任一所述的多核苷酸，其编码SARS-CoV-2刺突蛋白，所述SARS-CoV-2刺突蛋白包括：(a)下列序列，或编码与下列序列FVFLVLLPLVSSQCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFTISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDV...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种编码来自病毒的抗原的多核苷酸，其中所述抗原已被修饰(i)以将所述抗原靶向质膜和/或(ii)以减少膜融合和/或合胞体的形成。
2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述抗原是i类、ii类或iii类膜融合蛋白。
3.如权利要求1或2所述的多核苷酸，其中通过修饰抗原的胞质尾来增加对质膜的靶向，例如其中取代多元基序，可选地二元基序。
4.如权利要求3所述的多核苷酸，其中所述多元基序被丙氨酸取代。
5.如前述权利要求任一所述的多核苷酸，其中所述胞质尾被置换为来自传染性支气管炎病毒的、其中双赖氨酸基序被置换的胞质尾，例如其中所述双赖氨酸基序被丙氨酸置换，可选地其中：
6.如权利要求5所述的多核苷酸，其中修饰抗原的胞质尾包括以下序列：gccgcccgcfgiiplmskcgkkssaattfdndvvteqyrpaasv(seq id no:7)。
7.如前述权利要求任一所述的多核苷酸，其中减少膜融合和/或合胞体形成的修饰包括色氨酸残基的取代，可选地其中色氨酸残基在抗原的跨膜结构域中，例如在跨膜结构域的芳香族链段中。
8.如权利要求7所述的多核苷酸，其中色氨酸残基被丙氨酸取代。
9.如权利要求8所述的多核苷酸，其中基序wxwxxw(seq id no:11)被axaxaxxa(seq idno:12)置换。
10.如前述权利要求任一所述的多核苷酸，其中所述抗原来自冠状病毒，例如其中所述抗原是sars-cov-2的刺突(s)蛋白。
11.如权利要求10所述的多核苷酸，其编码的sars-cov-2刺突蛋白包括序列ktyikapayvalaiafatiifilgilwlffmtgccgcccgcfgiiplmskcgkssaattfdndvvteqyrpaasv(seq idno:16)或yikapayvalaiafatiifilgwlffmtgccgcccgcfgiiplmskcgkssaattfdndvvteqyrpaasv(seq id no:42)，或包括
12.如权利要求11所述的多核苷酸，其中变体保留了axaxxa(seq id no:12)基序以及-3和-4位的aa残基。
13.如前述权利要求任一所述的多核苷酸，其编码sars-cov-2刺突蛋白，所述sars-cov-2刺突蛋白包括：(a)下列序列，或编码与下列序列fvflvllplvssqcvnlttrtqlppaytnsftrgvyypdkvfrssvlhstqdlflpffsnvtwfhaihvsgtngtkrfdnpvlpfndgvyfasteksniirgwifgttldsktqsllivnnatnvvikvcefqfcndpflgvyyhknnkswmesefrvyssannctfeyvsqpflmdlegkqgnfknlrefvfknidgyfkiyskhtpinlvrdlpqgfsaleplvdlpiginitrfqtllalhrsyltpgdsssgwtagaaayyvgylqprtfllkynengtitdavdcaldplsetkctlksftvekgiyqtsnfrvqptesivrfpnitnlcpfgevfnatrfasvyawnrkrisncvadysvlynsasfstfkcygvsptklndlcftnvyadsfvirgdevrqiapgqtgkiadynyklpddftgcviawnsnnldskvggnynylyrlfrksnlkpferdisteiyqagstpcngvegfncyfplqsygfqptngvgyqpyrvvvlsfellhapatvcgpkkstnlvknkcvnfnfngltgtgvltesnkkflpfqqfgrdiadttdavrdpqtleilditpcsfggvsvitpgtntsnqva...
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