一类用于鉴别酪黄肠球菌的特异性分子序列及其用于快速检测酪黄肠球菌的方法技术

本发明专利技术公开了一类用于鉴别酪黄肠球菌的特异性分子序列及其用于快速检测酪黄肠球菌的方法，所述特异性分子序列的碱基序列如

【技术实现步骤摘要】
一类用于鉴别酪黄肠球菌的特异性分子序列及其用于快速检测酪黄肠球菌的方法


[0001]本专利技术属于微生物检验
，具体涉及一类用于鉴别酪黄肠球菌的特异性分子序列及其用于快速检测酪黄肠球菌的方法
。

技术介绍

[0002]酪黄肠球菌
(Enterococcus casseliflavus)
属于肠球菌属
(Enterococcus spp.)
，肠球菌属为革兰氏阳性球菌，外形呈圆形或卵圆形
、
单个或短链状分布，是人和动物肠道的正常菌群
。
作为人和动物肠道的正常菌群，一般情况下肠球菌不会引起疾病，但在机体免疫力下降时，它就会成为条件致病菌引起多种感染，如泌尿系统感染
、
伤口感染
、
脑膜炎
、
心内膜炎等，严重时可危及生命
(Maekawa,T.
；
Fukaya,R.
；
Takamatsu,S.
；
Itoyama,S.
；
Miyoshi,E.,Possible involvement of Enterococcus infection in the pathogenesis of chronic pancreatitis and cancer.Biochemical and Biophysical Research Communications 2018,506,962
‑
969)。
有研究表明，在
2011
‑
2014
年期间，肠球菌是造成院内感染的第二大病原菌，占到总人数的
14
％，其检出率仅次于大肠杆菌，超过铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌
(Lindsey M.W.
；
Amy K.W.
；
Brandi L.
；
Margaret A.D.
；
Jean P.
；
Alexander J.K.
；
Jonathan R.E.
；
Dawn M.S.,Antimicrobial
‑
resistant pathogens associated with healthcare
‑
associated infections:summary of data reported to the national healthcare safety network at the centers for disease control and prevention,2011
‑
2014.Infect Control Hosp Epidemiol 2016,37,1288
‑
1301.)。
肠球菌的广泛分布和较强的环境适应能力可能是其能造成临床感染的重要原因
。
[0003]酪黄肠球菌的检测方法主要有传统的生理生化反应
、API
生化鉴定条
、
微生物自动鉴定仪等，这些方法存在不同的优缺点，如：传统的生理生化反应结果相对准确，但其操作步骤相对繁琐，有时需要补加试验进行鉴别，耗时长；
API
生化鉴定条具有微量简易鉴测技术的优点，可鉴定几乎所有的细菌，其缺点是各系统差异较大，价格偏贵，同时检测结果的假阳性较多；微生物自动鉴定仪操作相对简便，但价格较昂贵
。
以
PCR
为主的分子生物学检测方法以其快速
、
准确
、
简便的特点逐渐成为取代传统检测方法最具潜力的检测技术之一，而靶标序列的特异性是
PCR
检测技术的关键
。
因此，系统性的挖掘特异性新靶标，建立准确
、
快速的
PCR
检测方法，对于酪黄肠球菌的临床检测及流行传播规律调查研究具有重要意义
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一类用于鉴别酪黄肠球菌的特异性分子序列及其用于快速检测酪黄肠球菌的方法，可具有检测时间短
、
检测成本低
、
操作简单
、
特异性强等优点，无需经过生化鉴定即可检测到酪黄肠球菌，更加具有实用性
。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]一类用于鉴别酪黄肠球菌的特异性分子序列，所述特异性分子序列的核苷酸碱基
[0022]本实施例提供用于鉴别酪黄肠球菌的特异性分子序列，所述特异性分子序列的核苷酸碱基序列如
SEQ ID No.1
‑
SEQ ID No.7
所示
。
[0023]本实施例2[0024]本实施例提供上述特异性分子序列用于快速检测酪黄肠球菌的方法，具体方法步骤如下：
[0025](1)
引物的设计：根据碱基序列
SEQ ID NO.1
‑
SEQ ID NO.7
中的任一个特异性分子序列来设计特异性扩增引物对，引物对序列如下表1：
[0026]表1酪黄肠球菌特异性
PCR
检测引物序列对
[0027][0028][0029](2)DNA
模板制备：将酪黄肠球菌菌株在
LB
液体培养基中增菌培养，使用商品化的细菌基因组
DNA
抽提试剂盒提取细菌基因组
DNA
，作为待检模板；采用
PCR
法扩增，
PCR
检测体系及扩增程序如下：
[0030]PCR
检测体系为
25
μ
L
，其中包括：2×
PCR Mix 12.5
μ
L、
模板
DNA 1
μ
L、10
μ
M
上下游引物各
1.0
μ
L
，灭菌双蒸水补足体积至
25
μ
L
；
[0031]PCR
扩增程序为：
95℃
预变性
5min
；
95℃
变性
30s
；
58℃
退火
30s
；
72℃
延伸
60s
，共进行
35
个循环；
72℃
延伸
10min。
[0032](3)PCR
方法检测结果的判定：凝胶电泳检测扩增产物，观察电泳结果扩增产物分
别在
395、685、775、1189、525、593、1143bp
位置是否存在单一扩增条带，如果存在，说明样品中含有酪黄肠球菌；如果没本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一类用于鉴别酪黄肠球菌的特异性分子序列，其特征在于：所述特异性分子序列的核苷酸碱基序列如
SEQ ID No.1
‑
SEQ ID No.7
所示
。2.
根据权利要求1所述的特异性分子序列用于快速检测酪黄肠球菌的方法，其特征在于，具体方法步骤如下：
(1)
根据碱基序列
SEQ ID NO.1
‑
SEQ ID NO.7
中的任一个特异性分子序列来设计特异性扩增引物对；
(2)
提取样品
DNA
，采用
PCR
法扩增；
(3)
凝胶电泳检测扩增产物，当电泳结果出现相应的单一扩增条带，则判断样品中含有目标菌，反之则判断样品中不含目标菌
。3.
根据权利要求2所述的特异性分子序列用于快速检测酪黄肠球菌的方法，其特征在于，步骤
(1)
中，碱基序列
SEQ ID NO.1
‑
SEQ ID NO.7
分别对应设计的特异性扩增引物对的碱基序列如
SEQ ID NO.1F
‑
SEQ ID NO.1R、SEQ ID NO.2F
‑
SEQ ID NO.2R、SEQ ID NO.3F
‑
SEQ ID NO.3R、SEQ ID NO.4F
‑
SEQ ID NO.4R、SEQ ID NO.5F
‑
SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：张贺伟，相欣然，尚玉婷，何莹龙，张利霞，梁立钦，茹鹏辉，
申请(专利权)人：洛阳惠德生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：