一种生物体共生菌的多重制造技术

本发明专利技术公开了一种生物体共生菌的多重

【技术实现步骤摘要】
一种生物体共生菌的多重PCR检测方法


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种生物体共生菌的多重
PCR
检测方法
。

技术介绍

[0002]不同种类的共生菌在自然界广泛存在，不可避免地要出现不同种的共生细菌存在于同一个体的情况
。
共生菌主要有
Wolbachia、Spiroplasma、Cardinium、Arsenophonus、Rickettsia
和
Flavo
‑
bacterium clade
等等
。
两种或多种共生菌感染同一宿主的现象称之为多重感染
。
了解不同共生菌在同种宿主里面的相互影响，对研究共生菌和宿主昆虫之间的关系有重要的意义
。
[0003]在很长时间以来，已经发现了超过一种共生菌同时存在于一个宿主体内共同生活的现象，这些共生菌有时候是在分开的细胞和器官中存在，但有时也会同时存在于一个细胞之中
。
此外，同种共生菌的不同株系感染同一个宿主的情况
(
即为超感染现象
)
也有发现
。
近年来，有许多研究报道共生菌的多重感染可以对宿主产生很多复杂的影响，比如说提供给宿主有限的营养物质
。
然而，迄今为止，对于多种共生菌在宿主中的竞争或者合作关系和机制以及共生菌多重感染对宿主表型的影响，我们仍然知之甚少
。
[0004]Wolbachia
，<br/>Cardinium
，
Spiroplasma
，
Rickettsia
是内共生菌的代表属，感染许多节肢动物物种
。
在分类学上，
Wolbachia pipients
隶属于细菌门
(Bacteriophyta)
，
a
变形菌纲
(alpha
‑
Proteobacteria)
，立克次氏体目
(Rickettsiales)
，无形体科
(Aanplasmataceae)
，
Rickettsia
属的一个种
。Wolbachia
通过对宿主进行多种生殖调控来增加自身在宿主种群中的传播
。
这些生殖调控主要包括胞质不亲和
(cytoplasmiincompatibility
，
CI)
，杀雄
(male
‑
killing)
，诱导孤雌生殖
(parthenogenesis inducing
，
PI)
和雌性化
(feminization)。
[0005]Cardinium
属于拟杆菌属，其在宿主中诱导生殖改变，例如
CI、
单性生殖和雌性化
。Cardinium
属于
Bacteroidetes
拟杆菌，
Sphingobacteria
鞘脂杆菌纲，
Sphingobacteriales
鞘脂杆菌目，
Flexibacteraceae
屈挠杆菌科，且在系统发育图中单独形成一个支系，和
Flavobacteria
纲的共生菌分支距离较远，与其亲缘关系最近的就是一种硬螂
(Ixodes scapularis)
中的共生菌
。
近年来已发现，
Cardinium
能够引起雌性化，诱导孤雌生殖，诱导胞质不亲和，影响宿主适合度和改变寄主的产卵行为
。
[0006]Spiroplasma
是一类广泛存在于节肢动物体内的母系遗传的革兰氏阳性共生菌，主要参与保护其宿主免受生物和非生物胁迫
。
在分类学上，
Spiroplasma
属于细菌域
(Baclena)、
厚壁菌门
(Firmicutes)、
柔膜菌纲
(Mollicutes)、
虫原体目
(Entomoplasmatales)、
螺原体科
(Spiroplasmataceae)、
螺原体属
(Spiroplasma)。Spiroplasma
最为显著的对宿主生殖的调控方式为杀雄
。
其杀雄作用已经在黑腹果蝇
Drosophila melanogaster、
异色瓢虫
Harmonia axyridis
以及金斑蝶
Danaus chrysippus
等昆虫中报导
。
除调控宿主的生殖方式，
Spiroplasma
还能为宿主提供保护作用，帮助宿主抵御天敌的攻击
。
[0007]Rickettsia
属于变形细菌纲
Proteobacteria
的
a
亚群立克次氏体科
Ricketisiaceae
的兼性真核细胞内共生菌，是昆虫次生共生菌的重要代表类群之一
。
早期关于
Rickettsia
研究主要集中在脊椎动物的
Ricettsia
群组，而关于节肢动物
Rickettsia
的研究，尤其是生物学特性方面的研究则相对较少
。
随着近年来对昆虫
Rickettsia
研究的进一步深入，发现其可通过诱导寄主昆虫雌性化
、
胞质不亲和杀雄等方式调控寄主昆虫的生殖行为，从而对不同寄主昆虫产生有利或有害的作用；
Ricketisia
还可增强寄主昆虫的药剂敏感性以及保护植物病毒在植物体内的传播
。
[0008]对节肢动物内共生菌感染情况估计，
Wolbachia
高达
24
％，
Cardinium
高达
13
％，
Spiroplasma
高达5‑
10
％，
Rickettsia
高达
52
％
。
由于其细胞内的生活方式
(
一些
Spiroplasma
物种除外
)
，这些细菌中的大多数不能在节肢动物宿主之外生长，并且对这四种内共生菌的检测依赖于分子方法
。
[0009]随着研究的深入，越来越多的研究者在不同昆虫物种中同时检测到两种共生菌的存在，
Wolbachia
和
Cardinium
双重感染，或者是
Spiroplasma
和
Rickettsia
双重感本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种利用多重
PCR
检测生物体共生菌的引物组合，其特征在于，包括分别检测共生菌
Wolbachia、Cardinium、Spiroplasma
和
Rickettsia
的特异性引物对：检测共生菌
Wolbachia
的特异性引物对的核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
‑2所示；检测共生菌
Cardinium
的特异性引物对的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
‑4所示；检测共生菌
Spiroplasma
的特异性引物对的核苷酸序列如
SEQ ID NO.5
‑6所示；检测共生菌
Rickettsia
的特异性引物对的核苷酸序列如
SEQ ID NO.7
‑8所示
。2.
一种如权利要求1所述的引物组合在制备利用多重
PCR
检测生物体共生菌的试剂盒中的应用，其特征在于，所述共生菌包括
Wolbachia、Cardinium、Spiroplasma
和
Rickettsia
中的至少一种
。3.
一种利用多重
PCR
检测生物体共生菌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组合；所述共生菌包括
Wolbachia、Cardinium、Spiroplasma
和
Rickettsia
中的至少一种
。4.
根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒成分还包括2×
PCRMix
和
ddH2O。5.
一种如权利要求1所述的引物组合或权利要求3或4所述的试剂盒在利用多重
PCR
检测生物体共生菌中的应用，其特征在于，所述共生菌包括
Wolbachia、Cardinium、Spiroplasma
和
Rickettsia
中的至少一种
。6.
一种生物体共生菌的多...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵伊英，崔丹丹，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：