一种制造技术

本发明专利技术提供了一种

【技术实现步骤摘要】
一种DesB30
‑
门冬胰岛素的检测方法


[0001]本专利技术涉及分析检测领域，更具体地涉及一种
DesB30
‑
门冬胰岛素的
HPLC
检测方法
。

技术介绍

[0002]糖尿病是全球范围内威胁人类健康的一大疾病
。
随着人民生活水平的提高
、
生活方式的改变以及老龄化进程的加快，糖尿病的患病率呈快速上升趋势
。
糖尿病的急
、
慢性并发症，尤其是慢性并发症累及多个器官，致残
、
致死率高，严重影响患者的身心健康，并给个人
、
家庭和社会带来沉重的负担
。
[0003]糖尿病患者一般都存在相对或绝对的胰岛素分泌不足，故胰岛素治疗一直被当作是治疗糖尿病并使血糖得到良好控制的重要手段
。
上世纪
70
年代，人们通过基因工程技术开发出了重组人胰岛素
。
后来，为了获得速效或长效等不同作用时间曲线的药物，人们又相继开发出了一系列的胰岛素类似物和衍生物
。
其中胰岛素类似物是指增加
、
删除或改变胰岛素序列中的一个或多个氨基酸后所得到的胰岛素类产品，胰岛素衍生物是指在胰岛素或胰岛素类似物的一个或多个位置上引入例如长链脂肪酸
、
聚乙二醇
、
烷基链等修饰基团后所得到的胰岛素类产品
。
[0004]其中胰岛素类似物/>(
门冬胰岛素
)
具有起效快的特点，更接近生理条件下基础胰岛素的分泌模式，是一种速效胰岛素
。
[0005]门冬胰岛素的制备一般采用基因工程技术制备前体，然后进行后续的溶解
、
复性
、
酶切
、
纯化
、
结晶
、
干燥，得到原料药
。
在门冬胰岛素的生产工艺过程中会有
DesB30
‑
门冬胰岛素中间体
(
结构如下式所示
)
，对整个生产工艺控制有着至关重要的作用：涉及到工艺产率和产量的计算
、
原料药中该中间体的残留检测
。
文献中未见到有关于
DesB30
‑
门冬胰岛素的检测方法，特建立此检测方法
。
[0006]
技术实现思路

[0007]本专利技术的目的就是提供一种能准确地检测
DesB30
‑
门冬胰岛素含量的方法
。
[0008]在本专利技术的第一方面，提供了一种
DesB30
‑
门冬胰岛素的检测方法，所述方法包括步骤：
[0009]将含
DesB30
‑
门冬胰岛素的待测样品溶液进行液相色谱分析，从而获得对应的色谱图，从而得到待测样品中
DesB30
‑
门冬胰岛素的含量；
[0010]其中，采用如下液相色谱条件进行检测：
[0011]色谱柱：
C8
烷基硅胶反相色谱柱；
[0012]流动相：包括流动相
A
和流动相
B
，
[0013]所述流动相
A
包括高氯酸盐缓冲液，所述流动相
B
为
C2
‑
C4
腈；所述流动相
A
和流动相
B
的体积比为
(500
‑
700):(300
‑
500)
，优选
700:300
；
[0014]洗脱方式：等度洗脱
。
[0015]在另一优选例中，所述的方法为定量
、
定性和
/
或杂质检测方法
。
[0016]在另一优选例中，所述的方法为体外和
/
或辅助性方法
。
[0017]在另一优选例中，所述的方法为非诊断性方法
。
[0018]在另一优选例中，所述含
DesB30
‑
门冬胰岛素的待测样品溶液为
DesB30
‑
门冬胰岛素溶液或含有
DesB30
‑
门冬胰岛素杂质的门冬胰岛素溶液
。
[0019]在另一优选例中，所述含有
DesB30
‑
门冬胰岛素杂质的门冬胰岛素溶液中，
DesB30
‑
门冬胰岛素的含量不超过2％，优选不超过1％
、0.5
％
、0.2
％
、0.1
％
、0.05
％
、0.01
％
。
[0020]在另一优选例中，所述流动相
A
中，所述高氯酸盐缓冲液包括磷酸盐
、
高氯酸盐
。
[0021]在另一优选例中，所述高氯酸盐选自下组：高氯酸钠
、
高氯酸钾，或其组合
。
[0022]在另一优选例中，所述磷酸盐选自下组：磷酸二氢钠
、
磷酸二氢钾，或其组合
。
[0023]在另一优选例中，所述流动相
A
中，所述高氯酸盐缓冲液的溶剂为水
。
[0024]在另一优选例中，所述流动相
A
中，所述高氯酸盐缓冲液包括
0.2
‑
0.8mo/L
磷酸盐
、0.1
‑
0.3mo/L
高氯酸盐，例如
0.3mo/L、0.4mo/L、0.5mo/L、0.6mo/L
磷酸盐，
0.12mo/L、0.16mo/L、0.2mo/L、0.25mo/L
高氯酸盐
。
[0025]在另一优选例中，所述流动相
A
中，所述高氯酸盐缓冲液的
pH
为
1.5
‑
4.5
，例如
2.0、2.5、3.0、3.5、4.0。
[0026]在另一优选例中，使用酸调节高氯酸盐缓冲液的
pH。
[0027]在另一优选例中，所述酸选自下组：盐酸
、
磷酸
、
硫酸，优选磷酸
。
[0028]在另一优选例中，所述反相色谱柱中的填料为
C8
烷基硅烷键合硅胶
。
[0029]在另一优选例中，所述色谱柱为月旭科技
LP
‑
C8
，规格为
4.6
×
250mm
，3‑5μ
m。
[0030]在另一优选例中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
DesB30
‑
门冬胰岛素的检测方法，其特征在于，所述方法包括步骤：将含
DesB30
‑
门冬胰岛素的待测样品溶液进行液相色谱分析，获得对应的色谱图，从而得到待测样品中
DesB30
‑
门冬胰岛素的含量；其中，采用如下液相色谱条件进行检测：色谱柱：
C8
烷基硅胶反相色谱柱；流动相：包括流动相
A
和流动相
B
，所述流动相
A
包括高氯酸盐缓冲液，所述流动相
B
为
C2
‑
C4
腈；所述流动相
A
和流动相
B
的体积比为
(500
‑
700):(300
‑
500)
；洗脱方式：等度洗脱
。2.
如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含
DesB30
‑
门冬胰岛素的待测样品溶液为
DesB30
‑
门冬胰岛素溶液或含有
DesB30
‑
门冬胰岛素杂质的门冬胰岛素溶液
。3.
如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相
A
中，所述高氯酸盐缓冲液包括磷酸盐
、
高氯酸盐
。4.
如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述流动相
A
中，所述高氯酸盐选自下组：高氯酸钠
、
高氯酸钾；所述磷酸盐选自下组：磷酸二氢钠
、
磷酸二氢钾
。5.
如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相
A
中，所述高氯酸盐缓冲液的
pH
为
1.5
‑
4.5。6.
如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高氯酸盐缓冲液包括
0.2
‑
0.8mo/L
磷酸盐
、0.1
‑
0.3mo/L
高氯酸盐
。7.
如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱分析过程中的流速为
0.8...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨接运，宋成宇，古鑫宇，
申请(专利权)人：宁波鲲鹏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：