一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法技术

本发明专利技术公开了一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，包括步骤：供试样品溶液制备；高效液相色谱检测；计算特征峰峰面积的比值；根据比值范围进行鉴别

【技术实现步骤摘要】
一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法


[0001]本专利技术属于天然植物提取物鉴别
，具体涉及一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法
。

技术介绍

[0002]水飞蓟为菊科植物水飞蓟（
Silybum marianum (L.) Gaertn.
）的干燥成熟果实，具有清热解毒
、
疏肝利胆的功效（中国药典
2020
版一部）
。
水飞蓟素主要由水飞蓟宾
A、
水飞蓟宾
B、
异水飞蓟宾
A、
异水飞蓟宾
B、
水飞蓟亭
、
水飞蓟宁等
6 种黄酮木脂素类物质组成，是水飞蓟及其提取物的有效成分
。
研究发现，水飞蓟素具有抗辐射
、
肝保护
、
抗衰老
、
延缓皮肤衰老等功效
。
水飞蓟提取物广泛应用于医药
、
保健食品
、
化妆品等行业
。
[0003]水飞蓟宾
A
和水飞蓟宾
B
合称水飞蓟宾，是水飞蓟提取物中含量最高的成分，也是肝保护活性最好的成分
。
异水飞蓟宾
A
和异水飞蓟宾
B
合称异水飞蓟宾，通常把水飞蓟宾和异水飞蓟宾合称为“双宾”。
我国已有多款以水飞蓟为主要原料的保健食品申报成功
。
这些水飞蓟提取物产品都以水飞蓟素
、
水飞蓟宾或者“双宾”作为其功效成分进行宣传
。
水飞蓟宾较好的护肝效果，目前市场大都以高含量的水飞蓟宾的提取物作为其产品优良的主要参考指标
。
而天然提取的水飞蓟宾成本较高，目前生物合成水飞蓟宾方法较为成熟，大大降低的水飞蓟宾的生产成本
。
[0004]目前针对水飞蓟提取物质量控制的标准主要有
《
欧洲药典
》、《
美国药典
》
和由中国医药保健食品进出口商会提出的团体标准
《
植物提取物 水飞蓟提取物（原料药级）
》
（
T/CCCMHPIE 1.21
‑
2016
），在这些标准中都是规定了6种水飞蓟素总和（或水飞蓟总黄酮）的含量范围，以及水飞蓟宾
A
和水飞蓟宾
B 占水飞蓟素总量（或水飞蓟总黄酮）的占比范围
、
异水飞蓟宾
A
和异水飞蓟宾
B 占水飞蓟素总量（或水飞蓟总黄酮）的占比范围
、
水飞蓟亭和水飞蓟宁占水飞蓟素总量（或水飞蓟总黄酮）的占比范围
。
这些范围界定相对比较宽泛，例如水飞蓟提取物中水飞蓟素总量占提取物质量的
30
‑
65%
，水飞蓟宾
A
和水飞蓟宾
B
占水飞蓟素总量的
40
‑
65%
（相当于占水飞蓟提取物质量的
12%
‑
42.25%
）
。
由于水飞蓟宾是水飞蓟提取物的主要成分，从水飞蓟宾含量角度无法鉴别水飞蓟宾人为添加或者利用提取某种水飞蓟有效成分后的药渣来以次充好的问题，即目前还没有能够鉴别水飞蓟提取物中人为掺假的方法
。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，该方法采用高效液相法对水飞蓟提取物中的特征成分进行有效分离，并通过特征峰峰面积比值鉴别水飞蓟提取物中是否人为掺假，该方法专属性强，准确性高，方便快捷
。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案实现：一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，包括如下步骤：（1）供试品溶液的制备
将水飞蓟提取物样品加入甲醇，超声提取，离心，取上清液，过滤，得到供试品溶液；（2）高效液相色谱检测采用高效液相色谱对供试品溶液进行检测，测定水飞蓟提取物中特征峰峰面积；所述高效液相色谱的条件为：
C18
色谱柱，检测波长
288 nm
，流动相 A
：
1%
乙酸水，流动相 B
：
1%
乙酸甲醇，洗脱梯度如下表1所示：表1流动相梯度程序；
[0007]（3）计算特征峰峰面积的比值根据特征峰峰面积，计算特征峰峰面积的比值
W1
和
W2
，计算公式为：；；其中，
A1
为水飞蓟宾
A
的峰面积，
A2
为水飞蓟宾
B
的峰面积，
A3
为异水飞蓟宾
A
的峰面积，
A4
为异水飞蓟宾
B
的峰面积；（4）鉴别方法根据特征峰峰面积比值范围判断，若特征峰峰面积比值
W1
在
1.15
‑
1.35
之间且
W2
在
1.40
‑
1.80
之间，优选为特征峰峰面积比值
W1
在
1.21
‑
1.31
之间且
W2
在
1.45
‑
1.65
之间，判断为天然提取的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值
W1、W2
中至少一个未在上述范围内，则判断为人为掺假的水飞蓟提取物
。
[0008]本专利技术通过大量的分析和测试意外的发现，天然提取的水飞蓟提取物中的水飞蓟宾
B、
水飞蓟宾
A、
异水飞蓟宾
B
和异水飞蓟宾
A
的峰面积之间存在特定的比例关系，这种天然的比例关系与提取试剂无关，与产地来源也无关，基于这种天然特定的比例关系为鉴别水飞蓟提取物中有效成分的人为添加或者利用提取某种水飞蓟有效成分后的药渣来以次充好的问题提供了理论基础
。
[0009]作为优选，步骤（1）中，所述水飞蓟提取物包括水飞蓟乙醇提取物
、
水飞蓟乙酸乙酯提取物
、
水飞蓟丙酮提取物中的任意一种
。
[0010]作为优选，步骤（1）中，供试品溶液的制备具体为：精密称取
0.2 g
样品，加入
20
‑
25 mL
甲醇后涡旋5‑
10 min
，超声提取
20
‑
40 min
，在
8000
‑
15000 rpm
的转速下离心
10
‑
20 min
，取上层清液，过
0.45 μ
m
的滤膜，稀释
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）供试品溶液的制备将水飞蓟提取物样品加入甲醇，超声提取，离心，取上清液，过滤，得到供试品溶液；（2）高效液相色谱检测采用高效液相色谱对供试品溶液进行检测，测定水飞蓟提取物中特征峰峰面积；所述高效液相色谱的条件为：
C18
色谱柱，检测波长
288nm
，流动相
A
：
1%
乙酸水，流动相
B
：
1%
乙酸甲醇，洗脱梯度如下表所示：；（3）计算特征峰峰面积的比值根据特征峰峰面积，计算特征峰峰面积的比值
W1
和
W2
，计算公式为：；；其中，
A1
为水飞蓟宾
A
的峰面积，
A2
为水飞蓟宾
B
的峰面积，
A3
为异水飞蓟宾
A
的峰面积，
A4
为异水飞蓟宾
B
的峰面积；（4）鉴别方法根据特征峰峰面积比值范围判断，若特征峰峰面积比值
W1
在
1.15
‑
1.35
之间且
W2
在
1.40
‑
1.80
之间，判断为天然提取的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值
W1、W2
中至少一个未在上述范围内，则判断为人为掺假的水飞蓟提取物
。2.
根据权利要求1所述的水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，其特征在于，步骤（1）中，所述水飞蓟提取物包括水飞蓟乙醇提取物
、
水飞蓟乙酸乙酯提取物
、
水飞蓟丙酮提取物中的任意一种
。3.
根据权利要求1所述的水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，其特征在于，步骤（1）中，供试品溶液的制备具体为：精密称取
0.2g
样品，加入
20
‑
25mL
甲醇后涡旋5‑
10min
，超声提取
20
‑
40min
，在
8000
‑
15000rpm
的转速下离心
10
‑
20min
，取上层清液，过
0.45
μ
m
的滤膜，稀释
20
倍，移取
1mL
至液相进样瓶中
。4.
根据权利要求1所述的水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，其特征在于，步骤（2）中，所述
...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈威，赵溪，黄正华，罗诗慧，贺瑞坤，兰韬，
申请(专利权)人：中国标准化研究院，
类型：发明
国别省市：