一种微菌素MccH47和MccM表达优化工程菌的构建及抗菌应用制造技术

本发明专利技术公开了一种微菌素MccH47和MccM表达优化工程菌及其构建及抗菌应用。该工程菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2023417。该工程菌是通过pREDCas9大肠杆菌基因编辑技术，以EcN菌株为底盘菌，将组成型启动子219p、表达转录后修饰基因mchA序列整合至EcN基因组中得到的，具有无抗性标记基因、具有良好生长活性、遗传稳定性、高效表达MccH47和MccM的显著特点。相比野生型EcN和现有工程菌具有更强以及更广的抑菌效果，使其在微生态制剂方面具有潜在的应用价值。微生态制剂方面具有潜在的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种微菌素MccH47和MccM表达优化工程菌的构建及抗菌应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，特别涉及一种微菌素MccH47和MccM表达优化工程菌的构建及抗菌应用。

技术介绍

[0002]食源性胃肠道感染，尤其耐药菌引发的胃肠道细菌感染对人类健康造成了巨大的损失。据美国疾病控制与预防中心估计，每年有超过100万人感染多重耐药菌，导致超20000人死亡，带来约30亿经济损失。而且，由于抗生素使用不规范、不合理、超剂量、盲目联合用药等情况，引发了药物残留、耐药性传播、土壤、食品污染等诸多问题，引起了世界范围内的担忧，因此，寻找潜在替抗产品、治疗人类多重耐药(MDR)和广泛耐药(XDR)病原体的研究获得科研工作者的广泛关注。
[0003]大肠杆菌Nissle 1917(EcN)是德国医生Alfred Nissle于1917年从一名抗腹泻士兵粪便中分离出的一株益生菌，自发现以来一直用于治疗胃肠道疾病，它在各种肠道功能障碍中表现出了有益作用，比如婴幼儿急性腹泻、慢性便秘、肠易激综合征等。EcN具有可长期使用、安全性高、遗传易处理性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种微菌素MccH47表达优化工程菌的制备方法，包括如下步骤：(1)通过重叠PCR扩增分别得到含有SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：10所示序列的同源臂修复片段；(2)利用基因组编辑技术和基因敲除载体将步骤(1)中的同源臂修复片段整合至大肠杆菌Nissle 1917基因组中，即得微菌素MccH47表达优化工程菌。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述SEQ ID NO：3所示序列是基于上游同源臂Xup、下游同源臂Xdown和组成型启动子219p片段为模板，使用Xup
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F和Xdown
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R为引物，采用重叠PCR扩增得到；其中，所述上游同源臂Xup和下游同源臂Xdown是以大肠杆菌Nissle 1917基因组为模板进行PCR扩增得到；所述组成型启动子219p片段是以SEQ ID NO：8和9重叠扩增得到；所述Xup
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F和Xdown
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R分别如SEQ ID NO:4和7所示。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述SEQ ID NO：10所示序列是基于上游同源臂Bup、下游同源臂Bdown和表达转录后修饰基因mchA序列片段为模板，采用重叠PCR扩增得到；其中，所述上游同源臂Bup和下游同源臂Bdown是以大肠杆菌Nissle 1917基因组为模板进行PCR扩增得到；所述表达转录后修饰基因mchA序列片段是以含有SEQ ID NO:2所示序列的质粒载体为模板进行PCR扩增得到。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述整合的步骤为：(1)将基因敲除...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹伟胜，曾知为，代绘琳，李文静，周迪，冯赛祥，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：