海水多毛类参与再生功能的重组蛋白原核表达纯化方法及应用技术

本发明专利技术公开海水多毛类参与再生功能的重组蛋白的原核表达纯化方法；本发明专利技术利用全基因合成基因序列并通过

【技术实现步骤摘要】
海水多毛类参与再生功能的重组蛋白原核表达纯化方法及应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，特别涉及海水多毛类参与再生功能的重组蛋白原核表达纯化方法及应用
。

技术介绍

[0002]环节动物门内具有不同的再生能力，包括具有全再生能力
(
头尾部均可再生
)
，部分再生能力
(
尾部再生
)
和不可再生三种类型的再生能力，使其成为研究再生过程中形态及分子机制的理想模型
。
其中，
Ophryotrocha xiamen
属于环节动物多毛纲
Polychaeta、
矶沙蚕目
Eunicida
，
Dorvilleinae
科的小型海洋底栖生物
。
由于
Ophryotrocha
属有生命周期短，体型小，易于实验室培养等特点，可作为环境监测
、
进化生物学等方面的良好模式物种
。
然而目前环节动物中关于再生的作用机制尚不清楚，参与本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
海水多毛类参与再生功能的重组蛋白的原核表达纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)
序列合成根据
OxLumbricin
核酸序列，在两端分别添加
NdeI
和
HindIII
核酸酶切位点及保护碱基，在
OxLumbricin
蛋白的
N
端添加6个组氨酸标签，进行人工合成
His
‑
OxLumbricin
序列；
(2)PCR
扩增将合成的
His
‑
OxLumbricin
基因序列连接于
pMD
‑
19T
克隆载体，适量稀释后，以其为模板
、
利用克隆载体通用引物和
Takara
高保真
ExTaq
酶进行
PCR
反应，所获
PCR
产物送公司测序，验证后的片段用于双酶切反应；
(3)PCR
扩增产物双酶切利用
NdeI
和
HindIII
，对经过步骤
(2)
的扩增产物进行双酶切，以获得
His
‑
OxLumbricin
基因序列中具有粘性末端的目的片段；
(4)pET
‑
30a(+)
质粒的提取及双酶切将含有原核表达载体
pET
‑
30a(+)
质粒的大肠杆菌接种于
LB
液体培养基中进行培养后，用质粒提取试剂盒提取质粒；利用
EcoRI
和
HindIII
，对提取的
pET
‑
30a(+)
质粒进行双酶切，以获得具有与
His
‑
OxLumbricin
基因序列中相同粘性末端的原核表达载体片段；
(5)
重组表达质粒
pET
‑
30a
‑
His
‑
OxLumbricin
的构建连接经过步骤
(3)
双酶切获得的
His
‑
OxLumbricin
基因目的片段与步骤
(4)
双酶切处理获得的原核表达载体片段：
(6)
重组表达质粒
pET
‑
30a
‑
His
‑
OxLumbricin
的转化构建的重组表达质粒转化入大肠杆菌
BL21(DE3)
中，转化后菌液接种于
LB
液体培养基中，振荡培养后涂至卡那霉素抗性平板上，进行抗性筛选；
(7)pET
‑
30a
‑
His
‑
OxLumbricin
重组蛋白的表达及鉴定挑选带有重组表达质粒的表达菌株
E.coliBL21(DE3)
，接种于含卡那霉素的
LB...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈软妮，陈建明，张钰霆，
申请(专利权)人：闽江学院，
类型：发明
国别省市：