一种左旋多巴生产菌株及其定向改造方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种左旋多巴生产菌株的定向改造方法及生产菌株与左旋多巴发酵方法，菌株是通过左旋多巴代谢合成途径改造得到的，左旋多巴生产菌株

【技术实现步骤摘要】
一种左旋多巴生产菌株及其定向改造方法与应用


[0001]本专利技术涉及发酵工程
，尤其是一种左旋多巴生产菌株及其定向改造方法与应用
。

技术介绍

[0002]左旋多巴
(Levodopa)
，化学名是3‑
羟基
‑
L
‑
酪氨酸，是一种白色或类白色结晶性粉末，属于苯丙氨酸类化合物，易溶于稀酸，微溶于水，不溶于乙醇
、
乙醚或氯仿，无臭，无味，在空气中变黑
。
是猫豆
、
黎豆的主要有效活性成分之一，也是目前治疗原发性震颤麻痹症及非药原性震颤麻痹综合症
(
帕金森氏病
)
最为常用
、
有效的药物
。
据统计，普通人群帕金森病的发病率为
0.1
％，
60
岁以上老人的发病率为1％，
80
岁以上的发病率为2％
。
随着人口老龄化速度的加快，对左旋多巴的需求将不断增加
。r/>[0003]目本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种左旋多巴生产菌株的定向改造方法，其特征在于：利用代谢工程手段改造野生型大肠杆菌
W3110
，对
csrA、tyrR、pykF、galP、glk、aroE、tyrA
fbr
、aroG
fbr
、tyrB
基因的表达强度进行调整，在
PETL01
质粒的基础上构建可以表达4‑
羟基苯乙酸
‑3‑
单加氧酶基因
hpaBC
的
PETL02
质粒，其中，在出发菌株
E.coli W3110
基因组上敲除
csrA
基因，使其不表达；继续敲除
tyrR
基因，使其不表达；继续敲除
pykF
基因，使其不表达；在基因组
ycdN
假基因位点使用
BBa_J23101
启动子控制
galP
基因过表达；在基因组
mbhA
假基因位点使用
BBa_J23101
启动子控制
glk
基因过表达；在基因组
ycgh
假基因位点使用
Ptrc
启动子控制
aroE
基因过表达；在基因组
yeeP
假基因位点使用
Ptrc
启动子控制
tyrA
fbr
基因过表达；在基因组
ygaY
假基因位点使用
Ptrc
启动子控制
aroG
fbr
基因过表达；在基因组
yeeL
假基因位点使用
Ptrc
启动子控制
tyrB
基因过表达；
PETL01
质粒导入
hpaBC
基因
。2.
根据权利要求1所述的左旋多巴生产菌株的定向改造方法，所述出发菌株为大肠杆菌
E.coli W3110
，保藏号
ATCC 273250
；
Ptrc
启动子具有序列表
SEQ ID NO.1
所示核苷酸序列；
BBa_J23101
启动子具有序列表
SEQ ID NO.2
所示核苷酸序列；
csrA
基因具有序列表
SEQ ID NO.3
所示核苷酸序列；
tyrR
基因具有序列表
SEQ ID NO.4
所示核苷酸序列；
pykF
基因具有序列表
SEQ ID NO.5
所示核苷酸序列；
galP
基因具有序列表
SEQ ID NO.6
所示核苷酸序列；
glk
基因具有序列表
SEQ ID NO.7
所示核苷酸序列；
aroE
基因具有序列表
SEQ ID NO.8
所示核苷酸序列；
tyrA
fbr
基因具有序列表
SEQ ID NO.9
所示核苷酸序列；
aroG
fbr
基因具有序列表
SEQ ID NO.10
所示核苷酸序列；
tyrB
基因具有序列表
SEQ ID NO.11
所示核苷酸序列；
hpaBC
基因具有序列表
SEQ ID NO.12
所示核苷酸序列；
PETL01
质粒具有序列表
SEQ ID NO.13
所示核苷酸序列
。3.
一种左旋多巴生产菌株，其特征在于：是由权利要求1或2所述方法获得的，其中：菌株
LDp01
，是在出发菌株
E.coli W3110
基因组上敲除
csrA
基因得到的；菌株
LDp02
，是以菌株
LDp01
为出发菌株，在其基因组上敲除
tyrR
基因得到的；菌株
LDp03
，是以菌株
LDp02
为出发菌株，在其基因组上敲除
pykF
基因得到的；菌株
LDp04
，是以菌株
LDp03
为出发菌株，在
ycdn
假基因位点使用
BBa_J23101
启动子控制
galP
基因过表达得到的；菌株
LDp05
，是以菌株
LDp04
为出发菌株，在
mbhA
假基因位点...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐庆阳，李旭，刘韪玮，马零，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：