一种鉴别白英及其配方颗粒的引物探针组及实时荧光组成比例

本发明专利技术属于药材鉴定领域，具体涉及一种鉴别白英及其配方颗粒的引物探针组及实时荧光

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别白英及其配方颗粒的引物探针组及实时荧光PCR鉴别方法


[0001]本专利技术属于药材鉴定领域，具体涉及一种鉴别白英及其配方颗粒的引物探针组及实时荧光
PCR
鉴别方法
。

技术介绍

[0002]白英药用历史久远，是茄科植物白英
Solanum lyratumThunb.
的干燥全草，始载于
《
神农本草经
》
，被列为上品，味苦
、
辛，性微寒，具有清热利湿
、
解毒消肿等功效
。
用于风热感冒
、
咳嗽
、
黄疸型肝炎
、
胆囊炎等，现代药理作用表明，白英具有抗癌的作用
。
蜀羊泉是茄科植物青杞
Solanum Sptemlobum Bunge.
的全草，也是始载于
《
神农本草经
》
，列为中品
。
现代药学专著称白英为蜀羊泉或白毛藤，二者新鲜植物有明显区别，但市售的为晒干后全草切断的产品，各省中药材标准或中药饮片炮制规范中，仅从显微鉴别
、
薄层色谱鉴别进行检测，对于白英和蜀羊泉的混合样品无法鉴定准确基原
。2020
年版
《
中国药典
》
四部通则中药材
DNA
条形码分子鉴定法指导原则项下的核糖体
DNA
第二内部转录间隔区
TIS2
‑
>ITS3
或叶绿体
psbA
‑
trnH
为引物的
DNA
条形码技术可以从
DNA
层面鉴别白英
、
蜀羊泉药材，但对于混合样品则不适用
。
[0003]白英配方颗粒将白英的干燥全草经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成，现行质量标准的检测方法包括薄层色谱鉴别
、
特征图谱
、
含量测定等，因加工炮制后，
DNA
降解难以提取，目前缺乏从基因层面鉴定准确基原的方法
。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中存在的无法准确的鉴别真伪等问题，本专利技术提供了一种鉴别白英及其配方颗粒的引物探针组
。
[0005]本专利技术还提供了上述引物探针组用于实时鉴别白英及其配方颗粒的荧光
PCR
方法，填补了该领域的技术空白，规范了白英药材的市场秩序；本专利技术所提供的实时荧光
PCR
方法，与
DNA
条形码技术相比较准确度更高，更快捷，无需一代测序，节约试验成本，其对于混合样品能快速准确的鉴别白英或者含有白英的相关制剂
。
[0006]本专利技术为了实现上述目的所采用的技术方案为：本专利技术提供了一种鉴别白英及其配方颗粒的引物探针组，所述引物探针组为：
BQ
‑
01
‑
F1
：
5'
‑
CTTAAGCGCGAACAGGGTC
‑
3'
；
BQ
‑
01
‑
R
：
5'
‑
GCTCAACTCTCTCTGTTGTCGC
‑
3'
；
BQ
‑
01
‑
P
：
5'FAM
‑
TCTGGGAGTCCGAGCGCGCGAT
‑
3'BHQ1。
[0007]进一步的，所述引物探针组特异性识别的白英的基因序列为：
ACGACGGAGCCGCCCGATTCTAAGGCTGGGCTGTTCCCGGTTCGCTCGCCGTTAATAGGGGAATCCTTGTAAGTTTCTTTTCCTCCGCTTATTGATATGCTTAAACTCAGCGGGTAATCCCACCTGACCTGGAGTCGCGGTCAGAGCGCCTTAAGCGCGAACAGGGTCTGGGAGTCCGAGCGCGCGATGGGCTGTGGCCGCGACAACAGAGAGAGTTGAG
CTTTCAACCACCACTTGCCGCGACGTCCGTCGACGTGGACTCGCATTTAGKACGGCCGTGGGCTCGAGGCGCACGGGAGGCCAGTATCCGCACCATGACACCCTGCGGCTTGCGGGGGGCGACGTTACGCGTGACGCCCAGGCAGACGTGCCCTCGGCCTAATGGCTTCGGGCGCAACTTGCGTTCAAAGACTCGATGGTTCACAGGATTCTGCAATTCACA。
[0008]本专利技术还提供了一种含有上述鉴别白英及其配方颗粒中白英基原的引物探针组的检测试剂盒
。
[0009]本专利技术的另一目的为提供了一种上述鉴别白英及其配方颗粒的引物探针组用于实时鉴别白英及其配方颗粒的荧光
PCR
方法，包括以下步骤：（1）提取待测样品的模板
DNA
；（2）
PCR
反应体系配制：荧光
PCR
反应混合液，探针，上下游引物，供试品溶液，灭菌超纯水；（3）对照反应体系为用等体积对照药材溶液代替供试品溶液的反应体系；空白对照反应体系为用等体积灭菌超纯水代替供试品溶液的反应体系；供试品及对照均设二个重复，
CT
值取二个重复的平均值作为最终结果；（4）进行
PCR
反应，进行定性检测
。
[0010]进一步的，步骤（2）中，所述
PCR
反应体系具体为：总体积为
20
µ
L
，分别加入荧光
PCR
反应混合液（2×
）
10
µ
L
，探针（
0.5
µ
mol/L
）1µ
L
，上下游引物（1µ
mol/L
）各1µ
L
，供试品溶液
0.5
µ
L
，灭菌超纯水
6.5
µ
L。
[0011]本专利技术提供的鉴别方法，所述
PCR
反应的参数为：阶段1：
95℃
，3分钟；阶段2：
95℃
，
10
秒，
66℃
，
35
秒，
40
个循环
。
[0012]进一步的，步骤（3）中，所述对照反应体系为阳性对照和阴性对照；所述阳性对照为白英对照药材；所述阴性对照为蜀羊泉药材
。
[0013]进一步的，鉴别过程中的判定原则为：阳性对照有荧光对数增长，且相应
CT
值＜
30本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种鉴别白英及其配方颗粒的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组为：
BQ
‑
01
‑
F1
：
5'
‑
CTTAAGCGCGAACAGGGTC
‑
3'
；
BQ
‑
01
‑
R
：
5'
‑
GCTCAACTCTCTCTGTTGTCGC
‑
3'
；
BQ
‑
01
‑
P
：
5'FAM
‑
TCTGGGAGTCCGAGCGCGCGAT
‑
3'BHQ1。2.
根据权利要求1所述的鉴别白英及其配方颗粒的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组特异性识别的白英的基因序列为：
ACGACGGAGCCGCCCGATTCTAAGGCTGGGCTGTTCCCGGTTCGCTCGCCGTTAATAGGGGAATCCTTGTAAGTTTCTTTTCCTCCGCTTATTGATATGCTTAAACTCAGCGGGTAATCCCACCTGACCTGGAGTCGCGGTCAGAGCGCCTTAAGCGCGAACAGGGTCTGGGAGTCCGAGCGCGCGATGGGCTGTGGCCGCGACAACAGAGAGAGTTGAGCTTTCAACCACCACTTGCCGCGACGTCCGTCGACGTGGACTCGCATTTAGKACGGCCGTGGGCTCGAGGCGCACGGGAGGCCAGTATCCGCACCATGACACCCTGCGGCTTGCGGGGGGCGACGTTACGCGTGACGCCCAGGCAGACGTGCCCTCGGCCTAATGGCTTCGGGCGCAACTTGCGTTCAAAGACTCGATGGTTCACAGGATTCTGCAATTCACA。3.
一种含有如权利要求1或2所述的鉴别白英及其配方颗粒中白英基源的引物探针组的检测试剂盒
。4.
一种如权利要求1所述的鉴别白英及其配方颗粒的引物探针组用于实时鉴别白英及其配方颗粒的荧光
PCR
方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）提取待测样品的模板
DNA
；（2）
PCR
反应体系配制：荧光
PCR
反应混合液，探针，上下游引物，供...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪冰，解盈盈，林永强，王晓彤，周倩倩，薛菲，穆向荣，于雅萌，
申请(专利权)人：山东省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：