抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的嵌合抗原受体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种嵌合抗原受体，其包含编码来自靶向

【技术实现步骤摘要】
抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的嵌合抗原受体及其用途


[0001]本专利技术涉及一种新的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（
Glypican
‑3， GPC3
）的分离抗体
、
包含该抗体的嵌合抗原受体（
Chimeric Antigen Receptor, CAR
）
、
包含该嵌合抗原受体的细胞及其用途
。

技术介绍

[0002]肿瘤免疫细胞疗法尤其是嵌合抗原受体
T
细胞（
chimeric antigen receptor T cell, CAR
‑
T
）在治疗恶性血液肿瘤方面已取得令人瞩目的疗效，在多项针对
CD19
及
BCMA
阳性的恶性血液肿瘤的临床研究中取得了巨大突破，在肝癌等实体瘤的临床前和探索性临床研究中也显示出较好的前景，为癌症患者带来了新希望
。
全球已有7款针对恶性血液肿瘤的
CAR
‑
T
药物上市
。
[0003]CAR
‑
T
技术结合了抗体的特异性及
T
细胞的杀伤效应，从而形成了一种过继性免疫的有效途径，
CAR
通常由胞外抗原结合域
、
铰链区
、
跨膜区
、
共刺激信号域和胞内
CD3
ζ
信号域构成，
CAR
‑
Tr/>在实体瘤的治疗中通常面临疗效有限和脱靶效应等多重障碍
。
目前全球针对肝癌等恶性实体瘤的
CAR
‑
T
药物研发尚处于临床试验阶段，国内外尚无相关产品上市
。
[0004]GPC3
在肝细胞癌（
HCC
）中高表达 (
表达率约
74.8%)
，在肺鳞癌
、
卵黄囊瘤
、
黑色素瘤
、
骨肉瘤等多种恶性实体瘤中也高表达，且在健康人肝脏
、
肾脏
、
胃等正常组织均不表达（
Bi et al.,Oncotarget 8: 52866, 2017
；
Gao et al., Clin Cancer Res 20: 6418, 2014
）
。
靶向
GPC3
的单克隆抗体在临床试验中显示出很好的安全性（
Abou
‑
Alfa et al., J Hepatol 65:289, 2016
；
Zhu et al., Clin Cancer Res, 19: 920, 2013
）
。
全球公布的首个靶向
GPC3
的
CAR
‑
T
细胞治疗晚期肝癌患者的早期临床研究结果显示（
Shi et al., Clin Cancer Res 19: 3259, 2020
），
CAR
‑
T
疗法在肝细胞癌中具有较好的安全性，
13
名患者中观察到了2例部分应答，显示出一定的临床应用潜力，但在疗效上仍有很大提升空间，因此如何通过合理的药物设计提高
CAR
‑
T
治疗肝癌等实体瘤的疗效是需要解决的一个重要技术问题
。
[0005]与血液瘤治疗比较，
CAR
‑
T
在实体瘤患者体内接触靶抗原的几率低，且实体瘤微环境免疫抑制性强，
CAR
‑
T
在实体瘤患者体内的扩增达峰值远远低于在血液瘤患者中的表现，这是
CAR
‑
T
治疗实体瘤效果不佳的重要原因，因此实体瘤治疗需要
CAR
‑
T
具有更强的杀伤活性
、
体内扩增能力和持续性
。

技术实现思路

[0006]目前已知的靶向
GPC3
的
CAR
分子通常采用简单的二代
CAR
设计，其共刺激信号域和胞内
CD3
ζ
信号域都采用野生型分子
。
本申请专利技术人发现，这些分子设计可能会导致
CAR
‑
T
与靶分子结合时无法达到免疫突触形成的最佳结合状态，或者免疫突触形成后向胞内的信号传递过强或过弱，从而影响
CAR
‑
T
细胞在体内的存活
、
扩增及对肿瘤细胞杀伤性能的持续性及整个免疫系统功能的调节，最终体现为临床疗效和安全性的差异
。
[0007]胞内信号域是
CAR
‑
T
活化和发挥杀伤作用的基础元件，其结构设计对
CAR
‑
T
充分活化且持续生存至关重要
。
每个
CD3
ζ
信号域具有3个免疫受体酪氨酸激活基序（
ITAM
），可以进行活化信号的放大
。CD3
ζ
信号域的3个
ITAM
共有6个酪氨酸磷酸化位点，这6个酪氨酸位点发生磷酸化的次序及数目对
T
细胞是否能被激活起着关键作用，并对
T
细胞激活后的发育分化走向起着重要作用（
Kersh et al., Science 281: 572, 2018
）
。CD3
ζ
信号域中冗余的
ITAM
活化可以促使
T
细胞分化和耗竭
。
此外，在
CD3
ζ
信号域的活化过程中，其近膜区的空间构象也对免疫突触的形成起着重要作用（
Guy et al., Immunol Rev 232: 7, 2009
）
。
[0008]因此，本申请申请人曾对
CD3
ζ
信号域的近膜端和免疫受体酪氨酸激活基序的氨基酸进行突变，以改善
CD3
ζ
信号域的信号活化强度和持续性（参考专利
PCT/CN2021/076247
）
。
[0009]进一步地，本专利技术通过将
CAR
‑
T
细胞共表达共刺激配体
CD40L
，以识别杀伤
CD40
阳性的肿瘤细胞，并活化
CD40
阳性的抗原呈递细胞，最终获得疗效更优的
CAR
‑
T
细胞
。
[0010]因此，本专利技术提供一种靶向
GPC3...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
嵌合抗原受体，其包含编码来自靶向
GPC3
的
scFv、
铰链区
、
跨膜区
、CD3
ζ
信号域
、
共刺激信号域
、
以及
CD40L
蛋白的基因；其中，所述
scFv
具有
SEQ ID NO: 1
所示的氨基酸序列；所述共刺激信号域来自
CD28
；所述
CD40L
具有
SEQ ID NO
：5所示的氨基酸序列；所述
CD3
ζ
信号域是天然
CD3
ζ
信号域序列的如下变体之一：1）将天然
CD3
ζ
信号域序列中的近膜端氨基酸
V2
替代成
L、D9
替代成
E、Q15
替代成
K
；2）将天然
CD3
ζ
信号域序列中的酪氨酸磷酸化位点
Y90
替代成
F
；3）将天然
CD3
ζ
信号域序列中的近膜端氨基酸
V2
替代成
L、D9
替代成
E、Q15
替代成
K、
以及酪氨酸磷酸化位点
Y90
替代成
F
；所述天然
CD3
ζ
信号域序列是对应于
NP_000725.1
中所列氨基酸序列第
52
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：丁艳萍，刘栋群，何霆，鲁薪安，单月明，
申请(专利权)人：北京艺妙神州医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：