抗非洲猪瘟病毒制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种抗非洲猪瘟病毒（

【技术实现步骤摘要】
抗非洲猪瘟病毒P72蛋白中和活性单克隆抗体5A8及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种抗非洲猪瘟病毒
(ASFV)P72
蛋白中和活性单克隆抗体
5A8
及其应用
。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟
(African swine fever,ASF)
是由非洲猪瘟病毒
(African swine fever virus,ASFV)
引起猪的一种急性
、
高度接触性传染病，其病程短
、
病死率可达
100
％
。ASFV
是一种很难清除的病毒，目前
ASF
的灭活苗
、
弱毒苗
、
亚单位苗和
DNA
疫苗都不足以保护猪免受
ASFV
的攻击
。
人们对有效保护猪群不受
ASFV
感染的免疫机制及其有效免疫组分知之甚少
。
因此，除了扩大对
ASFV
蛋白质组和单个蛋白质功能的理解外，还需在抗体和细胞介导的
ASFV
免疫反应之间找到适当的平衡，这些对于合理设计靶向疫苗具有非常重要的意义
。
[0003]ASFV
结构蛋白较多，其中
P72
是主要的结构蛋白之一，该蛋白序列较保守，由
B646L
基因编码，占病毒颗粒的
31
～r/>33
％，是结构蛋白中含量最多的
。P72
存在于病毒衣壳的表面，具有较好的免疫原性和抗原性，能够诱导机体产生中和抗体
。
中和抗体的作用机制主要是改变病毒表面的构型，阻止病毒吸附于易感细胞，使病毒不能穿入易感细胞内进行增殖
。
筛选针对
P72
蛋白的中和抗体，将增加我们对猪体液免疫应答的理解和认识，为设计
ASFV
新型疫苗和有效防控
ASF
提供理论基础
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供抗
ASFV P72
蛋白的中和活性单克隆抗体
(5A8)
及其应用
。
本专利技术以公开号为
CN112979765A
的专利技术专利中获得
P72
蛋白作为免疫源，免疫小鼠，通过细胞融合及亚细胞筛选技术获得具有中和活性的抗
P72
蛋白的单克隆抗体
5A8。
[0005]本专利技术第一方面，提供一种抗
ASFV P72
蛋白的单克隆抗体
5A8
，所述单克隆抗体其重链及轻链可变区
CDR1、CDR2
和
CDR3
的氨基酸序列如下：
[0006]重链
VH
的
CDR1
：
GYTFTDYN
；
[0007]重链
VH
的
CDR2
：
INPNNGGT
；
[0008]重链
VH
的
CDR3
：
ARRGLLRRHWYFDV。
[0009]轻链
VL
的
CDR1
：
QIVGTN
；
[0010]轻链
VL
的
CDR2
：
SAS
；
[0011]轻链
VL
的
CDR3
：
QQYNSYPLT。
[0012]单克隆抗体
5A8
的重链可变区的氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列分别如
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:2
所示
。
[0013]本专利技术第二方面提供一种编码所述的抗非洲猪瘟病毒
P72
蛋白的单克隆抗体
5A8
的基因，所述单克隆抗体
5A8
重链可变区的基因核苷酸序列分别如
SEQ ID NO:3
或
SEQ ID NO:4
所示
。
[0014]所述的单克隆抗体
5A8
重链恒定区为
IgG2b
型
。
[0015]所述的单克隆抗体
5A8
轻链恒定区为
Kappa
型
。
[0016]本专利技术第三方面提供了包含所述单克隆抗体
5A8
的重链可变区和轻链可变区基因的重组表达载体
。
[0017]本专利技术第四方面提供了包含上述重组表达载体的宿主细胞
。
[0018]所述单克隆抗体
5A8
具有如下功能中的至少一种：
[0019](1)
检测
ASFV
；
[0020](2)
检测
ASFV P72
蛋白
。
[0021]本专利技术第五方面，提供单克隆抗体
5A8
在以下任一方面中的应用：
[0022](1)
用于制备治疗由
ASFV
感染以及由其感染所致相关疾病的产品；所述产品可为药物或疫苗
。
[0023](2)
用于制备
ASFV
检测试剂或试剂盒
。
[0024]本专利技术的有益效果为：
[0025]本专利技术利用细胞融合和亚细胞筛选技术，成功获得一株特异性针对
ASFV P72
蛋白的
、
具有中和活性的单克隆抗体
。
该单克隆抗体在体外具有阻止
ASFV
感染敏感细胞的中和功能，且对
P72
蛋白的亲和力强，为进一步探究
P72
蛋白的功能提供了可靠的研究工具
。
[0026]本专利技术提供的单克隆抗体，可以利用常规基因工程或蛋白质工程的方法获得，避免了杂交瘤细胞长期冻存抗体丢失，同样也有利于抗体在基因和蛋白水平上进行优化，进而提高抗体的特异性和亲和力
。
[0027]本专利技术制备的单克隆抗体能够特异性识别并中和
ASFV
，因此，该抗体为探究
ASFV
致病机制的研究
、
早期检测试剂盒和治疗性抗体或疫苗的开发提供了新的原材料
。
附图说明
[0028]图1为
P72
蛋白免疫后
ELISA
检测小鼠抗体效价；
[0029]1～3：
1、2
和3号免疫鼠，
NC
：阴性对照
。
[0030]图2为
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
抗非洲猪瘟病毒
P72
蛋白的单克隆抗体
5A8
，其特征在于，所述单克隆抗体
5A8
的重链可变区包括氨基酸序列为
GYTFTDYN
的
CDR1、
氨基酸序列为
INPNNGGT
的
CDR2、
氨基酸序列为
ARRGLLRRHWYFDV
的
CDR3
；所述单克隆抗体
5A8
的轻链可变区包括氨基酸序列为
QIVGTN
的
CDR1、
氨基酸序列为
SAS
的
CDR2、
氨基酸序列为
QQYNSYPLT
的
CDR3。2.
根据权利要求1所述的抗非洲猪瘟病毒
P72
蛋白的单克隆抗体
5A8
，其特征在于，所述单克隆抗体
5A8
的重链可变区的氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列分...

【专利技术属性】
技术研发人员：王琦，曹丽艳，郑海学，万颖，孔祥雨，张宇，孙茂文，段月月，袁聪，李想通，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：