一种利用毕赤酵母发酵产超氧化物歧化酶的方法技术

本发明专利技术提供一种利用毕赤酵母发酵产超氧化物歧化酶的方法包括：毕赤酵母种子活化：将毕赤酵母接入活化培养基中进行活化培养；毕赤酵母的发酵培养：将毕赤酵母种子液接种于发酵培养基中进行液体深层发酵，得到含超氧化物歧化酶的发酵液；毕赤酵母发酵培养基包括如下组分：甘油

【技术实现步骤摘要】
一种利用毕赤酵母发酵产超氧化物歧化酶的方法


[0001]本专利技术涉及微生物发酵
，具体涉及一种利用毕赤酵母发酵产超氧化物歧化酶的方法
。

技术介绍

[0002]超氧化物歧化酶
(superoxide dismutase
，简称
SOD)
是一类金属酶，是生物体防御氧化损伤的重要酶类，广泛存在于需氧生物
、
耐氧生物和某些厌氧生物中
。
目前已知的主要分为三类，即
Fe
‑
SOD、Mn
‑
SOD
和
Cu
，
Zn
‑
SOD。
[0003]超氧化物歧化酶能够催化超氧阴离子自由基歧化为过氧化氢与氧气，此酶在保护机体免受超氧自由基以及由其生成的活性氧类的氧化伤害过程中起着极其关键的作用
。
目前，已经在化妆品
、
保健食品添加剂等方面得到了广泛的应用
。Cu
，
Zn
‑
SOD
的稳定性高于
Mn
‑
SOD
，并且在哺乳动物中含量远高于
Mn
‑
SOD
，因此众多学者更重视，
Cu
，
Zn
‑
SOD
在临床上的应用
。
[0004]SOD
被科技界
、
医学界誉为“人体的清道夫，人类的生命剂”。
但国内
SOD
均为动植物及微生物提取的
SOD
，欧盟从
1997
年1月起禁止使用动物
SOD
，植物
SOD
虽然克服了动物的各种弊病
(
主要是病毒交叉感染
)
，但与人的
SOD
有一定差别，不利于人体利用且易引起过敏，用
Pichia pastoris
表达系统表达的基因工程产品在国外已上临床，但常规的毕赤酵母，均需要甲醇诱导产酶，周期长
、
原料成本高，且甲醇存在安全隐患
。
[0005]因此，基于上述内容，本专利技术提供了一种利用毕赤酵母发酵产超氧化物歧化酶的方法
。

技术实现思路

[0006]基于上述表述，本专利技术提供了一种利用毕赤酵母发酵产超氧化物歧化酶的方法，以解决现有技术中常规的使用毕赤酵母发酵制备超氧化物歧化酶时均需要甲醇诱导产酶，存在周期长
、
原料成本高，且甲醇存在安全隐患的技术问题
。
[0007]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0008]本专利技术提供一种利用毕赤酵母发酵产超氧化物歧化酶的方法，包括以下步骤：
[0009](1)
毕赤酵母种子活化：将毕赤酵母接入活化培养基中进行活化培养；
[0010](2)
毕赤酵母的发酵培养：将毕赤酵母种子液接种于发酵培养基中进行液体深层发酵，得到含超氧化物歧化酶的发酵液；
[0011]其中，毕赤酵母发酵培养基包括如下组分：甘油
、
山梨醇
、
磷酸
、
硫酸镁
、
硫酸钾
、
氢氧化钾
、
硫酸钙
、PTM1、
泡敌
、
余量为水；
[0012](3)
补料操作：待底料耗尽
、
溶氧反弹，流加补料培养基，以维持溶氧在
20
～
40
％之间，补料后放罐酶活
6000
～
8000U/mL。
[0013]在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进
。
[0014]进一步地，所述活化培养基为
YPD
培养基，包括以下组分：蛋白胨，酵母粉
、
葡萄糖，
115℃
灭菌
30min
，用前合瓶处理
。
[0015]进一步地，所述活化培养基的组分包括：蛋白胨2％
、
酵母粉1％和葡萄糖2％
。
[0016]进一步地，在步骤
(2)
中，所述毕赤酵母发酵培养基包括如下组分：甘油1％
、
山梨醇3％，磷酸
2.67
％，硫酸镁
1.49
％，硫酸钾
1.82
％，氢氧化钾
0.3
％，硫酸钙
0.09
％，
PTM1 0.41
％，泡敌
0.02
％，余量为水
。
[0017]进一步地，在步骤
(2)
中，发酵培养的条件为：温度为
30℃、
用氨水调控
pH
为
5.5、
转速为
600
转
/min
以及风量为
1:1.5vvm。
[0018]进一步地，在步骤
(3)
中，所述补料速度为
10
～
30mL/(L
×
h)。
[0019]进一步地，在步骤
(3)
中，所述补料培养基包括如下组分：甘油
、
山梨醇
、PTM1
和水
。
[0020]进一步地，所述补料培养基包括如下组分：甘油2％
、
山梨醇
40
％
、PTM12
％
、
余量为水
。
[0021]与现有技术相比，本申请的技术方案具有以下有益技术效果：
[0022]本专利技术提供的利用毕赤酵母发酵产超氧化物歧化酶的方法包括毕赤酵母种子活化
、
毕赤酵母的发酵培养和补料操作三个步骤，相较于现有技术，该方法增加了补料操作，且毕赤酵母的发酵培养过程不同于现有技术，将毕赤酵母种子液接种于发酵培养基中进行液体深层发酵，得到含超氧化物歧化酶的发酵液；其中，毕赤酵母发酵培养基包括如下组分：甘油
、
山梨醇
、
磷酸
、
硫酸镁
、
硫酸钾
、
氢氧化钾
、
硫酸钙
、PTM1、
泡敌
、
余量为水；补料阶段可获得目标酶蛋白，区别于常规的毕赤酵母需甲醇诱导才能产酶，可大幅降低原料成本；且培养周期短，大幅降低动力成本，更确保了操作的安全性
。
此法通过补料操作能够控制溶氧在
20
～
40
％，周期内酶活可达
6000
～
8000U/mL。
具体实施方式
[0023]为了便于理解本申请，下面结合实施例对本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种利用毕赤酵母发酵产超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)
毕赤酵母种子活化：将毕赤酵母接入活化培养基中进行活化培养；
(2)
毕赤酵母的发酵培养：将毕赤酵母种子液接种于发酵培养基中进行液体深层发酵，得到含超氧化物歧化酶的发酵液；其中，毕赤酵母发酵培养基包括如下组分：甘油
、
山梨醇
、
磷酸
、
硫酸镁
、
硫酸钾
、
氢氧化钾
、
硫酸钙
、PTM1、
泡敌
、
余量为水；
(3)
补料操作：待底料耗尽
、
溶氧反弹，流加补料培养基，以维持溶氧在
20
～
40
％之间，补料后放罐酶活
6000
～
8000U/mL。2.
根据权利要求1所述的利用毕赤酵母发酵产超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，所述活化培养基为
YPD
培养基，包括以下组分：蛋白胨，酵母粉
、
葡萄糖，
115℃
灭菌
30min
，用前合瓶处理
。3.
根据权利要求2所述的利用毕赤酵母发酵产超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，所述活化培养基的组分包括：蛋白胨2％
、
酵母粉1％和葡萄糖2％
。4.
根据权利要求1所述的利用毕赤酵母发酵产超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，在步骤
(2)
中，所述毕赤酵母发酵培养基包...

【专利技术属性】
技术研发人员：张立，李超，周翔，饶建军，赵高祥，吴微，熊晓燕，胡革芬，吴菡，王启军，辜玲芳，袁志超，
申请(专利权)人：武汉新华扬生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：