源于黄金芽的多酚氧化酶同工酶制造技术

本发明专利技术公开了一种源于黄金芽的多酚氧化酶同工酶

【技术实现步骤摘要】
源于黄金芽的多酚氧化酶同工酶、基因、粗酶液及应用


[0001]本专利技术属于茶叶加工
，具体涉及一种源于黄金芽的多酚氧化酶同工酶
、
编码基因
、
粗酶液及应用
。

技术介绍

[0002]发酵茶是在加工过程中，充分发挥和利用多种酶的生物催化作用，生成不同的生物活性物质及风味物质的茶叶
。
其中，红茶主要是通过多酚氧化酶及过氧化物酶的作用，由儿茶素类化合物
(L
‑
EC、L
‑
ECG、L
‑
EGC、L
‑
EGCG)
产生茶黄素及茶红素类化合物
。
其中茶黄素类化合物主要为
TF、TF2A、TF2B
和
TF3
，其合成方式分别为：
(L)
‑
EGC+(L)
‑
EC
→
TF、(L)
‑
EGCG+(L)
‑
EC
→
TF2A、(L)
‑
ECG+(L)
‑
EGC
→
TF2B
和
(L)
‑
EGCG+(L)
‑
ECG
→
TF3。
[0003]茶黄素对红茶的色
、
香
、
味及品质起着决定性的作用，是红茶汤色“亮”的主要成分，也是汤味强度和鲜爽度的重要成分，同时还是形成茶汤“金圈”的最主要物质
。
此外，研究表明茶黄素还具有显著的生物活性，如抗癌
、
抗炎
、
抗病毒
、
抗高脂
、
降糖作用
、
抗代谢综合征特性
、
预防骨质疏松和调节神经等功能
。
因此茶黄素含量的高低是决定红茶品质的关键因素之一
。
[0004]茶黄素的产生从制茶的揉捻阶段持续到发酵阶段
。
然而茶黄素在成品茶中的含量一般不高，高品质的红茶含量一般也仅为1％左右
。
如何提高制茶过程中茶黄素的生物合成效率，或者如何采用体外合成的方式获得高产茶黄素对提高红茶等发酵茶的品质以及推动其在医疗保健领域的应用具有重要价值
。
[0005]目前，多酚氧化酶
(PPO)
和过氧化物酶
(POD)
被认为是在红茶制造生产中生产茶黄素的关键酶，但仅有少数几种茶树中的多酚氧化酶
PPO
研究的较为透彻
。
公开日为
2015
年4月8日的中国专利技术专利
《
茶叶多酚氧化酶同工酶单体
PPO1
和
PPO2
及其制备方法
》(
公开号
CN 104498448 A)
采用一芽二叶的政和大白
、
福云6号
、
桃源大叶茶树品种茶树鲜叶，依次通过丙酮粉富集酶蛋白
、
硫酸铵分级沉淀
、
强阴离子交换色谱
、
凝胶介质层析
、
分子鉴定
、
酶学性质分析等技术及优化工艺，分离制备了氨基酸序列结构
、
分子量
、
等电点
、
酶学性质明确的两种茶叶多酚氧化酶同工酶单体
PPO1
和
PPO2
的制备方法
。
该专利涉及的
PPO1
和
PPO2
并无提供具体碱基序列与蛋白序列，其所给
Gene ID
也无法对应到相应的
PPO
同工酶，其蛋白分子量大小也与本专利技术序列有较大差异
。
公开日为
2015
年5月
27
日的中国专利技术专利
《
一种利用茶多酚氧化酶同工酶
PPO1
酶促合茶黄素
TF
的方法
》(
公开号为
CN 104651426A)
公布了一种利用茶多酚氧化酶同工酶
PPO1
开展酶促合成茶黄素
TF
的方法
。
该方法是介绍以茶多酚氧化酶同工酶
PPO1
为酶源，以茶多酚中的儿茶素
EC
和
EGC
组分为主要反应底物，以一定
pH
值的缓冲液作为反应体系，经摇床振荡酶促反应以及后续的萃取
、
离心
、
浓缩
、
冷冻干燥等步骤，定向酶促合成单一茶黄素组分
TF(theaflavin)
的技术及工艺优化
。
[0006]黄金芽
(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze cv.Huangjinya(Hjy Cs))
茶树品种属于黄色系变异茶树品种，对光敏感，在光照下顶部叶片因叶绿素的合成受到抑制而呈现金黄色
。
其鲜叶色泽金黄
、
口感滋味丰富，因为稀有，也被称为“茶中大熊猫”。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于克服现有技术问题，并提供一种源于黄金芽的多酚氧化酶同工酶
、
核苷酸序列与粗酶液及其应用
。
[0008]本专利技术所采用的具体技术方案如下：
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种源于黄金芽的多酚氧化酶同工酶，所述多酚氧化酶同工酶为
HJY
‑
PPO1
蛋白或
HJY
‑
PPO3
蛋白，所述
HJY
‑
PPO1
蛋白氨基酸序列结构如
SEQ ID No.1
所示，所述
HJY
‑
PPO3
蛋白氨基酸序列结构如
SEQ ID No.2
所示
。
[0010]第二方面，本专利技术提供了一种编码第一方面所述的多酚氧化酶同工酶的基因，所述基因为用于编码
HJY
‑
PPO1
蛋白的
HJY
‑
PPO1
基因或用于编码
HJY
‑
PPO3
蛋白的
HJY
‑
PPO3
基因，所述
HJY
‑
PPO1
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示，所述
HJY
‑
PPO3
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.4
所示
。
[0011]第三方面，本专利技术提供了一种含有第本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种源于黄金芽的多酚氧化酶同工酶，其特征在于，所述多酚氧化酶同工酶为
HJY
‑
PPO1
蛋白或
HJY
‑
PPO3
蛋白，所述
HJY
‑
PPO1
蛋白氨基酸序列结构如
SEQ ID No.1
所示，所述
HJY
‑
PPO3
蛋白氨基酸序列结构如
SEQ ID No.2
所示
。2.
一种编码权利要求1所述的多酚氧化酶同工酶的基因，其特征在于，所述基因为用于编码
HJY
‑
PPO1
蛋白的
HJY
‑
PPO1
基因或用于编码
HJY
‑
PPO3
蛋白的
HJY
‑
PPO3
基因，所述
HJY
‑
PPO1
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.3
所示，所述
HJY
‑
PPO3
基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO.4
所示
。3.
一种含有权利要求1所述的多酚氧化酶同工酶的粗酶液，其特征在于，所述粗酶液制备方法可采用从黄金芽茶树鲜叶中自然提取；优选的，所述自然提取是采用黄金芽茶树鲜叶经磷酸氢二钠
‑
柠檬酸缓冲液提取
、
过滤
、
离心后获得含有所述多酚氧化酶同工酶的粗酶液
。4.
一种含有权利要求1所述的多酚氧化酶同工酶的粗酶液，其特征在于，所述粗酶液通过人工合成制备，人工合成方法是将
SEQ ID NO.3
或
SEQ ID NO.4
所示的核苷酸序列作为目的基因序列导入重组大肠杆菌
BL21
进行体外表达，随后用柠檬酸
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张琳，蔡泓历，付红伟，钟卓珩，王可豪，陈祎苒，黄天玥，林浩，邱人平，蒋嘉俊，
申请(专利权)人：红河创新技术研究院有限责任公司，
类型：发明
国别省市：