一种无动物源补充剂制造技术

本发明专利技术公开了一种无动物源补充剂

【技术实现步骤摘要】
一种无动物源补充剂、培养基及其在诱导分化定向内胚层细胞中的应用


[0001]本专利技术涉及一种无动物源补充剂
、
培养基及其在诱导分化定向内胚层细胞中的应用
。

技术介绍

[0002]人胚胎发育过程中，定向内胚层
(Definitive endoderm
，
DE)
的形成是胚胎发育中的关键阶段，它是形成肝脏
、
肺部
、
胰腺等内脏器官的前体
。
[0003]多能干细胞
hiPSC
不仅具有无限增值潜能，而且无相关的伦理和道德问题争议，这使得
hiPSC
成为研究和治疗许多疾病的理想选择
。
研究人员一直在努力开发高效可靠分化方案，诱导多能干细胞
hiPSC
向定向内胚层命运分化
。
[0004]通过技术手段诱导的定向内胚层细胞可以进一步引导它们沿着特定途径分化，获得各种内胚层衍生的功能性细胞如肝细胞
、
胰岛细胞和肺泡细胞等等
。
高效诱导定向内胚层分化有潜力革命性地改变再生医学，并为器官衰竭
、
遗传疾病和其他令人困扰的疾病患者带来新的治疗可能性
。
[0005]现有技术中，诱导定向内胚层细胞的培养基一般是以基础培养基加入各种补充剂配制得到，补充剂一般包括各类活性小分子如生长因子等，但补充剂大多数都含有血清和动物源成分
。
而临床产品要求细胞制剂不能含有动物源成分，因为动物源成分中可能残留了动物核酸
、
或感染过的细菌和病毒核酸等，以及可能对受体引起免疫作用的蛋白
。
虽然可以在后续质量检测时，检测动物源成分，但是药物审批时为了安全性，仍旧不允许使用含有动物源成分的物料，即便只是作为辅助支撑性质的物料
。
因此，有必要开发无动物源的诱导定向内胚层细胞的补充剂以及培养基
。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于，提供一种用于诱导分化定向内胚层细胞的无动物源补充剂和培养基，成分简单，不含血清等动物源成分，可避免临床应用前动物源成分的检测，更适合临床应用
。
[0007]本专利技术采用的技术方案是：
[0008]一种无动物源补充剂，所述补充剂包括以下组分：
[0009]生物素
、DL
α
‑
生育酚醋酸酯
、
人重组胰岛素
、
人转铁蛋白
、
皮质酮
、D
‑
半乳糖
、
盐酸乙醇胺
、
还原型谷胱甘肽
、
左旋肉碱盐酸盐
、
亚油酸
、
亚麻酸
、
黄体酮
、
腐胺
、
亚硒酸钠和三碘甲状腺氨酸
。
[0010]进一步，本专利技术还提供一种无动物源浓缩补充剂，由上述无动物源补充剂制得，所述无动物源浓缩补充剂为
100
×
浓缩液，以
MCDB131
培养基为溶剂，包括以下浓度的组分：
[0011]200
～
350
μ
g/mL
生物素
、80
～
150
μ
g/mL
的
DL
α
‑
生育酚醋酸酯
、350
～
500
μ
g/mL
人重组胰岛素
、400
～
600
μ
g/mL
人转铁蛋白
、1
～5μ
g/mL
皮质酮
、1000
～
2000
μ
g/mLD
‑
半乳糖
、80
～
150
μ
g/mL
盐酸乙醇胺
、80
～
150
μ
g/mL
还原型谷胱甘肽
、150
～
300
μ
g/mL
左旋肉碱盐酸盐
、80
～
150
μ
g/mL
亚油酸
、80
～
150
μ
g/mL
亚麻酸
、0.5
～
0.8
μ
g/mL
黄体酮
、1500
～
2000
μ
g/mL
腐胺
、1
～2μ
g/mL
亚硒酸钠和
0.1
～
0.5
μ
g/mL
三碘甲状腺氨酸
。
[0012]优选所述无动物源浓缩补充剂，以
MCDB131
培养基为溶剂，包括以下浓度的组分：
[0013]250
μ
g/mL
生物素
、100
μ
g/mL
的
DL
α
‑
生育酚醋酸酯
、400
μ
g/mL
人重组胰岛素
、500
μ
g/mL
人转铁蛋白
、2
μ
g/mL
皮质酮
、1500
μ
g/mLD
‑
半乳糖
、100
μ
g/mL
盐酸乙醇胺
、100
μ
g/mL
还原型谷胱甘肽
、200
μ
g/mL
左旋肉碱盐酸盐
、100
μ
g/mL
亚油酸
、100
μ
g/mL
亚麻酸
、0.63
μ
g/mL
黄体酮
、1610
μ
g/mL
腐胺
、1.44
μ
g/mL
亚硒酸钠和
0.20
μ
g/mL
三碘甲状腺氨酸
。
[0014]进一步，本专利技术还提供用于诱导分化定向内胚层细胞的无动物源培养基，所述培养基包括上述无动物源补充剂，具体的，所述诱导分化定向内胚层细胞的无动物源培养基包括定向内胚层培养基1和定向内胚层培养基2，所述定向内胚层培养基1以
MCDB131
培养基为基础培养基，包括以下成分：
[0015]2～
3.5
μ
g/mL
生物素
、0.8
～
1.5
μ
g/mL
的
DL
α
‑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种无动物源补充剂，其特征在于所述无动物源补充剂包括以下组分：生物素
、DL
α
‑
生育酚醋酸酯
、
人重组胰岛素
、
人转铁蛋白
、
皮质酮
、D
‑
半乳糖
、
盐酸乙醇胺
、
还原型谷胱甘肽
、
左旋肉碱盐酸盐
、
亚油酸
、
亚麻酸
、
黄体酮
、
腐胺
、
亚硒酸钠和三碘甲状腺氨酸
。2.
一种无动物源浓缩补充剂，由如权利要求1所述的无动物源补充剂制得，所述无动物源浓缩补充剂为
100
×
浓缩液，以
MCDB131
培养基为溶剂，包括以下浓度的组分：
200
～
350
μ
g/mL
生物素
、80
～
150
μ
g/mL DL
α
‑
生育酚醋酸酯
、350
～
500
μ
g/mL
人重组胰岛素
、400
～
600
μ
g/mL
人转铁蛋白
、1
～5μ
g/mL
皮质酮
、1000
～
2000
μ
g/mLD
‑
半乳糖
、80
～
150
μ
g/mL
盐酸乙醇胺
、80
～
150
μ
g/mL
还原型谷胱甘肽
、150
～
300
μ
g/mL
左旋肉碱盐酸盐
、80
～
150
μ
g/mL
亚油酸
、80
～
150
μ
g/mL
亚麻酸
、0.5
～
0.8
μ
g/mL
黄体酮
、1500
～
2000
μ
g/mL
腐胺
、1
～2μ
g/mL
亚硒酸钠和
0.1
～
0.5
μ
g/mL
三碘甲状腺氨酸
。3.
如权利要求2所述的无动物源浓缩补充剂，其特征在于所述无动物源浓缩补充剂，以
MCDB131
培养基为溶剂，包括以下浓度的组分：
250
μ
g/mL
生物素
、100
μ
g/mL
的
DL
α
‑
生育酚醋酸酯
、400
μ
g/mL
人重组胰岛素
、500
μ
g/mL
人转铁蛋白
、2
μ
g/mL
皮质酮
、1500
μ
g/mLD
‑
半乳糖
、100
μ
g/mL
盐酸乙醇胺
、100
μ
g/mL
还原型谷胱甘肽
、200
μ
g/mL
左旋肉碱盐酸盐
、100
μ
g/mL
亚油酸
、100
μ
g/mL
亚麻酸
、0.63
μ
g/mL
黄体酮
、1610
μ
g/mL
腐胺
、1.44
μ
g/mL
亚硒酸钠和
0.20
μ
g/mL
三碘甲状腺氨酸
。4.
诱导分化定向内胚层细胞的无动物源培养基，其特征在于所述无动物源培养基包括权利要求1所述的无动物源补充剂
。5.
如权利要求4所述的诱导分化定向内胚层细胞的无动物源培养基，其特征在于所述诱导分化定向内胚层细胞的无动物源培养基包括定向内胚层培养基1和定向内胚层培养基2，所述定向内胚层培养基1以
MCDB131
培养基为基础培养基，包括以下成分：2～
3.5
μ
g/mL
生物素
、0.8
～
1.5
μ
g/mL
的
DL
α
‑
生育酚醋酸酯
、3.5
～5μ
g/mL
人重组胰岛素
、4
～6μ
g/mL
人转铁蛋白
、0.01
～
0.05
μ
g/mL
皮质酮
、10
～
20
μ
g/mLD
‑
半乳糖
、0.8
～
1.5
μ
g/mL
盐酸乙醇胺
、0.8
～
1.5
μ
g/mL
还原型谷胱甘肽
、1.5
～3μ
g/mL
左旋肉碱盐酸盐
、0.8
～
1.5
μ
g/mL
亚油酸
、0.8
～
1.5
μ
g/mL
亚麻酸
、0.005
～
0.008
μ
g/mL
黄体酮
、15
～
20
μ
g/mL
腐胺
、0.01
～
0.02
μ
g/mL
亚硒酸钠和
0.001
～
0.005
μ
g/mL
三碘甲状腺氨酸；1～
2mM
谷氨酰胺
、50
～
100U/mL
青霉素
、50
～
100
μ
g/mL
链霉素
、3
～
5mM
葡萄糖
、80
～
120ng/mL TGF
‑
β
激活剂
、0.2
～
0.3mM
维生素
C、5
～8μ
M Wnt
信号通路激活剂
、40
～
60nM PI3K/mTOR
抑制剂和8～
15
μ
M ROCK
抑制剂；所述定向内胚层培养基2以
MCDB131
培养基为基...

【专利技术属性】
技术研发人员：王小丰，鲁素芳，吴双双，
申请(专利权)人：杭州瑞普晨创科技有限公司，
类型：发明
国别省市：