三七皂苷R1在制备促进体外胚胎发育产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了三七皂苷R1在制备促进体外胚胎发育产品中的应用。本发明专利技术首次公开了三七皂苷R1在制备提高体外胚胎发育能力药物中的应用，此前未见报道三七皂苷R1与体外胚胎发育能力相关，拓展了三七皂苷R1的应用范围。三七皂苷R1可以通过提高囊胚率，有效保护线粒体功能，改善线粒体分布，提高线粒体膜电位，从而有效提高体外胚胎的发育质量以及发育能力。效提高体外胚胎的发育质量以及发育能力。效提高体外胚胎的发育质量以及发育能力。

【技术实现步骤摘要】
三七皂苷R1在制备促进体外胚胎发育产品中的应用


本专利技术涉及胚胎工程技术相关
，尤其是涉及三七皂苷R1在制备促进体外胚胎发育产品中的应用。

技术介绍

随着转基因动物生产技术成为一大热门，提高转基因动物生产的效率也成为了一个热点问题，而胚胎工程技术是解决此问题的方法之一。而作为胚胎工程技术的关键环节的，体外胚胎生产技术，是用于畜牧业、人类辅助生殖技术和植入前胚胎发育机制研究的一项关键技术。体外受精和体外胚胎培养是体外胚胎生产的主要内容。体外胚胎培养是在体外将激活的卵母细胞培养成囊胚的过程[1
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2]。而体内和体外的渗透压、pH值、二氧化碳含量等的微环境相差较大，体外胚胎生产的胚胎缺乏体内的非酶(谷胱甘肽)和酶(超氧化物歧化酶，过氧化氢酶等)抗氧化系统的保护，又长期在体外操作，极易使得胚胎的线粒体功能下降，降低胚胎的发育和质量。大量研究表明，能够有效提高体外胚胎的发育能力和质量的方法，除了尽可能地模拟与体内相似的胚胎发育的微环境外，在体外胚胎培养的过程中添加一些天然的抗氧化剂(例如褪黑素等)也非常有效，但许多抗氧化剂均存在不同的缺陷，比如褪黑素与季节性生殖有关，不适合用于哺乳期动物。因此，目前迫切需要寻找新的抗氧化剂，改善体外胚胎培养基的成分，以提高体外胚胎的发育能力和质量。
[0001]Kruip T,Bevers M M,Kemp B.Environment of oocyte and embryo determines health of IVP offspring[J].Theriogenology,2000,53(2):611
‑
618.
[0002]王娜，李姣，王小武，等.影响牛体外胚胎生产效率的因素[J].今日畜牧兽医，2018，34(11)：4.

技术实现思路

本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出三七皂苷R1在制备促进体外胚胎发育产品中的应用，该物质能够有效提高体外胚胎培养质量以及发育能力，有利于体外胚胎培养。根据本专利技术的一个方面，提出了三七皂苷R1在制备促进体外胚胎发育产品中的应用。根据本专利技术的一种优选的实施方式，至少具有以下有益效果：本专利技术首次公开了三七皂苷R1在制备提高体外胚胎发育能力药物中的应用，此前未见报道三七皂苷R1与体外胚胎发育能力相关，拓展了三七皂苷R1的应用范围。三七皂苷R1可以通过提高囊胚率，有效保护线粒体功能，改善线粒体分布，提高线粒体膜电位，从而有效提高体外胚胎的发育质量以及发育能力。三七皂苷R1来源于三七的干燥根或者根茎，来源广泛，在自然界中容易获得，作为传统中药，对哺乳动物细胞无毒副作用，在培养基中添加三七皂苷R1，操作简单，易
于控制，效果显著。三七皂苷R1可用于制备促进胚胎发育的药物组合物、培养基或试剂盒等，具有良好的工业应用前景。该成分在植入前胚胎发育的过程中可以提高胚胎的囊胚形成率，提高线粒体分布水平以及改善胚胎的线粒体膜电位的作用，从而提高体外胚胎培养质量以及发育能力，有利于体外胚胎培养。在本专利技术的一些实施方式中，三七皂苷R1的化学结构式如下：三七皂苷R1(Notoginsenoside R1)是从传统中药材——三七的干燥根或者根茎中提取得到的一种天然化合物，具报道，其具有抗氧化、促进细胞增殖、保护线粒体功能等作用，但是其在胚胎发育方面的影响还很少有研究证实。在本专利技术的一些实施方式中，所述促进体外胚胎发育包括提高胚胎质量或提高胚胎发育能力中的至少一种。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述产品包括试剂盒、培养基或药物中的至少一种。在本专利技术的一些更优选的实施方式中，所述促进体外胚胎发育包括提高胚胎囊胚率、提高线粒体分布水平以及改善胚胎的线粒体膜电位中的至少一种。三七皂苷R1能提高胚胎囊胚率、提高线粒体分布水平以及改善胚胎的线粒体膜电位，从而有效提高体外胚胎质量和发育能力。在本专利技术的一些具体实施方式中，如通过检测/计算体外胚胎的囊胚率、线粒体分布水平、胚胎的线粒体膜电位，三七皂苷R1通过增强体外早期胚胎发育的线粒体功能，提高了体外胚胎的质量以及发育能力。在本专利技术的一些具体实施方式中，通过检测/计算体外胚胎的囊胚率来评价体外胚胎的质量以及发育能力。囊胚率是体外培养七天后囊胚的个数与所培养的胚胎总数的比率，囊胚率的高低能够很好的反应胚胎的发育状态以及用作天然抗氧化剂的最适浓度的筛选。在本专利技术的一些具体实施方式中，通过检测/计算体外胚胎细胞的线粒体分布来评价体外胚胎的质量以及发育能力，线粒体是活性氧(ROS)诱导的细胞损伤的重要亚细胞靶点。分布均匀的是正常的线粒体，而异常的线粒体分布是累积分布、外周分布和半外周分布的。本专利技术是通过Mito
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Tracker红色探针(200mmol/L,Beyotime)对四细胞期胚胎的线粒
体进行染色分析。在本专利技术的一些具体实施方式中，通过检测/计算体外胚胎细胞的线粒体膜电位来评价体外胚胎的质量以及发育能力。线粒体在产生能量时会将电化学势能储存于线粒体内膜，而线粒体膜电位的形成是由于，在细胞内膜两侧，质子及其他离子浓度的不对称分布所形成的。正常的线粒体膜电位是维持线粒体进行氧化磷酸化、产生三磷酸腺苷的先决条件，线粒体膜电位的稳定有利于维持细胞的正常生理功能；线粒体膜电位的降低是线粒体功能下降的表现之一，不健康的线粒体其膜电位会下降或丧失，因此线粒体膜电位是评价细胞线粒体功能的重要指标之一。在本专利技术的一些具体实施方式中，所述提高体外胚胎发育能力包括提高体外胚胎囊胚率、提高线粒体分布、提高体外胚胎细胞线粒体膜电位的表达。在一些实施方式中，所述提高体外胚胎发育能力为提高体外胚胎囊胚率。优选地，如通过体外胚胎囊胚率测试所验证的，相对于未施用本专利技术产品的情况，施用本专利技术产品使体外胚胎囊胚率提高了10％
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25％。具体地，在本专利技术的一些实施方式中，相对于未施用本专利技术产品的情况，施用本专利技术产品使体外胚胎囊胚率提高了10％
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25％。在本专利技术的一些具体实施例中，施用本专利技术产品使体外胚胎囊胚率至少提高了约10％。在本专利技术的另一些实施方式中，施用本专利技术产品使体外胚胎囊胚率提高至10
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26％；优选地，施用本专利技术产品使体外胚胎囊胚率提高至12
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28％，更优选地，至少提高至约30％。在一些实施方式中，所述提高体外胚胎发育能力为提高体外胚胎细胞线粒体分布。优选地，如通过体外胚胎总细胞数测试所验证的，相对于未施用本专利技术产品的情况，施用本专利技术产品提高了体外胚胎总细胞数的13％
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25％。具体地，在本专利技术的一些实施方式中，相对于未施用本专利技术产品的情况，施用本专利技术产品使体外胚胎细胞线粒体分布提高了15％
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25％。在本专利技术的一些具体实施例中，施用本专利技术产品使体外胚胎细胞线粒体分布至少提高了约28％。在一些实施方式中，所述提高体外胚胎发育能力为提高体外胚胎细胞线粒体膜电位。优选地，如通过体外胚胎细胞线粒体膜电位测试所验证的，相对于未施用本专利技术产品的情况，施用本专利技术产品提高了本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.三七皂苷R1在制备促进体外胚胎发育产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述促进体外胚胎发育包括提高胚胎质量或提高胚胎发育能力中的至少一种。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述促进体外胚胎发育包括提高胚胎囊胚率、提高线粒体分布水平以及改善胚胎的线粒体膜电位中的至少一种。4.根据权利要求1至3任一项所述的应用，其特征在于：所述产品为试剂盒、培养基或药物。5.三七皂苷R1在制备产品中的应用，其特征在于：所述产品具有如下功能中的至少一种：(1)提高胚胎囊胚率；(2)提高线粒体分布水平...

【专利技术属性】
技术研发人员：李英花，何盛艳，刘容萍，冀荷玮，许永男，金南衡，
申请(专利权)人：五邑大学，
类型：发明
国别省市：