一种用原位合成制备蛋白质芯片的方法技术

本发明专利技术为了解决困扰学术界已久的如何将蛋白质分子不失活地且永久地结合到金属上、而且还能一步到位地将蛋白质分子固定于任何探测器金属表面或独立寻址电极上的难题，提供了一种蛋白质芯片的制备方法，通过采用原位电化学组合合成方法和独立寻址的微电极阵列技术，使带有生物活性单元的苯胺衍生物单体以活性自由基聚合方式与溶液中的苯胺共聚于电极上，一步直接在电极上原位生成具有生物活性并导电的电极覆盖物，并在仿生条件下使接有多种蛋白质的卵白素与其牢固结合从而制得蛋白质芯片。本发明专利技术为无标记的分析方法奠定了基础，使批量制作蛋白质芯片真正成为可能，第一次从可操作层面上提供了自动化生产蛋白质芯片的可能性并且具有很高的重现性。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种用原位合成制备蛋白质芯片的方法，其特征在于，包括如下具体步骤：ａ）制备带有生物活性单元的苯胺衍生物单体将带有生物活性单元的甘醇亚磷酰胺溶解在无水乙腈中，然后加入苯胺衍生物的无水乙腈溶液，其中：带有生物活性单元的甘醇亚磷酰胺与苯胺衍生物的摩尔比为１０∶１～１∶１０；加入适量５－乙硫基四氮唑（ＥＴＴ）活化剂，使形成的活化剂无水乙腈溶液的浓度为０．２５ｍｏｌ／Ｌ；在室温下搅拌２０～４０分钟后，进行减压蒸馏至粉末状；加入过量氧化溶液，所述氧化溶液是由单质碘溶于四氢呋喃∶水∶三乙胺＝８∶１∶１的混合溶剂中形成，溶液的质量百分比浓度为４％；室温下搅拌５～１５分钟后，以硫代硫酸钠还原至中性，然后减压蒸出四氢呋喃，以氯仿萃取，有机层经无水硫酸钠干燥后，减压蒸干有机溶剂；最后加入１０％氢氧化铵脱保护，减压蒸出过量氨气后以０．２Ｍ盐酸中和至中性，放入－４℃冰箱备用；ｂ）制备蛋白质芯片将微电极阵列建立在独立寻址的逻辑电路芯片上，此电路上的每个电极由互补金属氧化物半导体（ＣＭＯＳ）晶体管的开关连接，通过发送电子地址信号到共同结点电路进而到与每个电极相关的静态随机存取记忆体（ＳＲＡＭ）导通该开关；微电极阵列放置在一个流体反应器中，反应器中的反应液为步骤ａ）制备得到的带有生物活性单元的苯胺衍生物单体与其摩尔量的１～１０倍的苯胺及适量作为电解质的氯化钾混合而成；在逻辑电路控制下，以１０毫秒开，１０毫秒关的脉冲，在０．５～１．５伏，３０秒总时间内，具有生物活性并导电的电极覆盖物在原位迅速生成，经去离子水清洗后用氮气吹干，与带有荧光的卵白素在ＰＢＳ缓冲液中培养１～３小时，用ＰＢＳ缓冲液反复冲洗后即得。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王巍，
申请(专利权)人：无锡中美亿芯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]