一种锰佐剂固定的疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种治疗性疫苗，特别涉及一种锰佐剂固定的疫苗及其制备方法

【技术实现步骤摘要】
一种锰佐剂固定的疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种治疗性疫苗，特别涉及一种锰佐剂固定的疫苗及其制备方法
。

技术介绍

[0002]肿瘤免疫是指癌症患者对肿瘤产生的免疫反应
。
肿瘤免疫的发现促进了治疗性疫苗的发展
。
但是，临床癌症疫苗的发展受到很多因素的限制
。
由于不同肿瘤细胞中表达的肿瘤抗原不同，以及同种肿瘤不同患者抗原表达的差异，导致肿瘤抗原广泛表达的缺乏，以及其中部分肿瘤抗原为健康细胞中原有的非突变的蛋白，甚至肿瘤细胞经常发生高比率突变可能导致一个或多个抗原的丢失，导致针对单一抗原表位的抗原来源难以起到良好的免疫效果，而且在肿瘤进展过程中进化出的多种免疫抑制机制可能抑制产生的抗肿瘤免疫反应
。
因此，需要一种能够引起针对多个抗原表位的广泛的多克隆肿瘤特异性反应的抗原来源，且这种抗原来源需要能够改善抑制性的肿瘤免疫微环境
。
目前，部分本领域技术人员采用以矿化的方法固定肿瘤细胞团中的抗原的方式制作研发针对癌症的治疗性疫苗
。
[0003]2022
年，美国
Rita
等研究人员开发了一种低温硅化的癌症疫苗用于治疗小鼠卵巢上皮细胞癌，他们通过吸附聚乙烯亚胺从而在硅化小鼠卵巢上皮癌细胞表面修饰了
Toll
样受体激动剂
CpG
和
MPL
，构建的硅化癌症疫苗早期治疗较小卵巢癌时，可以诱导保护性肿瘤抗原特异性
T/>细胞免疫，并消除小鼠模型中已建立的肿瘤
。
当与化疗药物顺铂联合使用治疗较大卵巢癌时，硅化癌症疫苗增加活化
T
细胞的比例，与顺铂发挥协同抗肿瘤作用
。
但此策略用到的小分子佐剂获得困难，价格高昂，且需要在使用前即时被装备到硅化细胞表面，工序繁杂
。
同时，为了实现二氧化硅的体内溶解，需要严格控制硅化层厚度，且硅化癌症疫苗难以逆转肿瘤内已建立的抑制性免疫微环境，无法进一步扩大免疫效应
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种实用性更高的用于癌症的疫苗
。
[0005]为达到上述目的，本专利技术提供了一种锰佐剂固定的疫苗，包括：
[0006]抗原，为肿瘤细胞
、
细菌或病毒；
[0007]MnO2，由所述抗原以
KMnO4为原料进行仿生矿化反应生成，包裹于所述抗原及其内部分细胞器膜的表面形成壳层
。
[0008]第二方面，本专利技术还提供了一种上述锰佐剂固定的疫苗的制备方法，包括：
[0009]培养肿瘤细胞
、
细菌或病毒并收获，弃上清，得到抗原沉淀；
[0010]配制
KMnO4低渗溶液；
[0011]向所述抗原沉淀中加入所述
KMnO4低渗溶液，重悬并反应孵育，得到反应体系；
[0012]以
PBS
缓冲液清洗所述反应体系，直至上清液澄清无色，得到锰佐剂固定的疫苗
。
[0013]可选地，所述培养肿瘤细胞
、
细菌或病毒并收获，包括：
[0014]培养肿瘤细胞或寄生病毒的细胞至对数生长期，确认细胞铺满培养皿底部后，以
PBS
缓冲液清洗并以酶溶液消化分散；
[0015]或
[0016]培养细菌至对数生长期，测定菌密度值
。
[0017]可选地，所述弃上清包括离心弃上清或吸取舍弃上清液
。
[0018]可选地，所述
KMnO4低渗溶液中包括
KMnO4、NaCl
和超纯水
。
[0019]可选地，所述
KMnO4低渗溶液中
NaCl
的浓度为
100
‑
120mmol/L
中任一值
。
[0020]可选地，所述
KMnO4低渗溶液中
KMnO4的浓度为
10
‑
100mmol/L
中任一值
。
[0021]可选地，所述反应孵育的时间为5‑
60min
中的任一值
。
[0022]可选地，所述反应体系中所述肿瘤细胞数量为1×
106‑6×
106中的任一值；或所述细菌的数量为1×
108‑1×
109中的任一值；或所述病毒的数量为1×
10
10
‑1×
10
11
中的任一值
。
[0023]可选地，以4×
106个所述肿瘤细胞
、1
×
108个所述细菌或5×
10
10
个所述病毒为一个单位的抗原量，所述反应体系中的所述抗原量的单位数与所述
KMnO4的摩尔数的比值为
1:(0.5
×
10
‑5‑
1.5
×
10
‑5)mol
中的任一值
。
[0024]根据本专利技术的第一方面：以二氧化锰固定抗原形成疫苗，有助于保留肿瘤细胞
、
细菌或病毒的抗原，提供完整
T
细胞表位
。
这种锰佐剂固定的疫苗可以被免疫细胞摄取，然后释放
Mn
2+
，作为佐剂，激活
cGAS
‑
STING
信号通路，增强免疫激活作用
。
这种锰佐剂固定的疫苗作为载体，可同时负载佐剂和抗原，实现佐剂和抗原的共递送
。
锰具有易于在体内监测的优势，通过
MnO2固定抗原，可以实现对疫苗的体内实时监测
。
以
MnO2固定的疫苗成分稳定，以
PBS
缓冲液保存即可，保存较为方便
。
同时，本专利技术的锰佐剂固定的疫苗可适用于多种肿瘤细胞和细菌及病毒，具有普适性
。
[0025]当抗原为肿瘤细胞，即锰佐剂固定的疫苗用于癌症治疗时，锰佐剂固定的疫苗注射入肿瘤部位，由于抗原保留完整，能够改善抗原不足或突变导致的免疫治疗无效，且
MnO2在肿瘤微环境内高过氧化氢和微酸的响应下释放
O2和
Mn
2+
。
释放的
O2通过改善肿瘤乏氧，逆转肿瘤放疗抵抗，增强放射治疗诱导的免疫原性死亡，诱导更多肿瘤抗原释放，释放的抗原与锰佐剂固定的疫苗的完整抗原发生协同作用，有助于提高免疫效果
。
释放的
Mn
2+
提供佐剂作用，有助于逆转肿瘤进展中的抑制性免疫微环境，增强抗原对免疫细胞的激活效应，进而激活局部与全身的免疫效应，产生杀灭原位和转移肿瘤的作用，既能提供完整
T
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种锰佐剂固定的疫苗，其特征在于，包括：抗原，为肿瘤细胞
、
细菌或病毒；
MnO2，由所述抗原以
KMnO4为原料进行仿生矿化反应生成，包裹于所述抗原及其内部细胞器膜的表面形成壳层
。2.
一种如权利要求1所述的锰佐剂固定的疫苗的制备方法，其特征在于，包括：培养肿瘤细胞
、
细菌或病毒并收获，弃上清，得到抗原沉淀；配制
KMnO4低渗溶液；向所述抗原沉淀中加入所述
KMnO4低渗溶液，重悬并反应孵育，得到反应体系；以
PBS
缓冲液清洗所述反应体系，直至上清液澄清无色，得到锰佐剂固定的疫苗
。3.
如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述培养肿瘤细胞
、
细菌或病毒并收获，包括：培养肿瘤细胞或寄生病毒的细胞至对数生长期，确认细胞铺满培养皿底部后，以
PBS
缓冲液清洗并以酶溶液消化分散；或培养细菌至对数生长期，测定菌密度值
。4.
如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述弃上清包括离心弃上清或吸取舍弃上清液
。5.
如权利要求2‑4任一所述的锰佐剂固定的疫苗的制备方法，其特征在于，所述
KMnO4低渗溶液中包括
KMnO4、NaCl
和超纯水
。6.
如权利要求5所述的锰佐剂固定的疫苗的制备方法，其特征在于，所述
KMnO4低渗溶液中
NaCl
的浓度为
100...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪勇，顾媛，王杨云，张乐帅，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：