蛋白多酚纳米胶囊及制备方法与其在制备纳米疫苗中的应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，涉及蛋白多酚纳米胶囊及制备方法与其在制备纳米疫苗中的应用

【技术实现步骤摘要】
蛋白多酚纳米胶囊及制备方法与其在制备纳米疫苗中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及蛋白多酚纳米胶囊及制备方法与在制备纳米疫苗中的应用
。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术
。
[0003]与传统治疗方法相比，肿瘤免疫疗法具有更低的毒副作用
。
目前，肿瘤免疫疗法的热点是肿瘤疫苗
。
纳米疫苗是纳米技术在肿瘤疫苗研究中的具体应用，首先，其能够避免抗原被酶降解从而提高其抗原稳定性，其次通过控制纳米载体的物理化学性质，如大小
、
形状和表面化学等，增强其淋巴结迁移能力和抗原提呈细胞的摄取能力，最后更为重要的是，同时递送抗原和佐剂到达抗原递呈细胞中，引起更加持久的免疫效应
。
[0004]尽管纳米疫苗在提高免疫原性和淋巴结迁移等方面已经取得了很大的进展，但仍然有一些问题亟待解决
。
首先，可以通过包埋
、
吸附和偶联等方法实现抗原的负载，但其过程往往涉及油水界面
、
机械搅拌
、
高温等剧烈条件，可能对抗原结构和活性造成破环
。
其次，由于制备复杂
、
产率低等问题导致疫苗成本增加
。
最后，一些载体本身毒性问题会导致各种不良反应的产生
。
因此，需要提供一种制备简单
、
安全性高，并且能提高免疫原性的纳米疫苗
。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供蛋白多酚纳米胶囊及其制备方法与在制备纳米疫苗中的应用，本专利技术制备的蛋白多酚纳米胶囊具有较好的生物相容性和免疫原性，可以作为纳米疫苗用于肿瘤免疫疗法
。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0007]一方面，一种蛋白多酚纳米胶囊的制备方法，包括以下步骤：
[0008]将八臂
‑
聚乙二醇
‑
羟基
(8
‑
arm
‑
PEG
‑
OH)、
免疫佐剂咪唑喹啉
(IMDQ)、2
‑
甲基咪唑
(2
‑
MIM)
和锌盐，以水作为溶剂制成负载
IMDQ
的沸石咪唑酯骨架
(ZIF
‑
8)
纳米颗粒；
[0009]将负载
IMDQ
的
ZIF
‑8纳米颗粒分散至水中，加入抗原卵清蛋白
(OVA)
，进行混合反应，使负载
IMDQ
的
ZIF
‑8纳米颗粒吸附
OVA
；
[0010]将吸附
OVA
的负载
IMDQ
的
ZIF
‑8纳米颗粒分散至水中，加入单宁酸进行反应，使得单宁酸刻蚀
ZIF
‑8形成中空结构，并且中空结构作为骨架通过单宁酸与
OVA
相互作用形成蛋白多酚纳米胶囊
。
[0011]本专利技术采用
OVA
作为抗原
。
作为一种蛋白质，
OVA
能够与多酚类化合物相互作用在模板上形成蛋白
‑
多酚网络，去除模板后形成蛋白
‑
多酚胶囊
。
然而，研究表明，仅采用
OVA
作为抗原制成纳米疫苗，免疫原性较低，难以实现抗原特异性的免疫应答，为此，本专利技术添加
了激动剂，以提高免疫原性，锌离子和免疫佐剂
IMDQ
均具有激动剂的作用，因此本专利技术采用锌离子制备金属有机框架负载
IMDQ。
负载
IMDQ
的方式可以为先制备金属有机框架，通过金属有机框架的多孔结构吸附负载
IMDQ
，也可以为在制备金属有机框架的过程中添加
IMDQ
，实现负载
。
但是本专利技术研究发现，
IMDQ
及金属有机框架均带有正电荷，
IMDQ
不易接近金属有机框架，对
IMDQ
的负载效率较低；同时还需要金属有机框架吸附
OVA
，而
OVA
带有负电，若先形成金属有机框架后负载
IMDQ
，再加入
OVA
容易与
IMDQ
静电结合，导致
OVA
的负载效率降低；因此，为了提高
IMDQ
与
OVA
的负载效率，本专利技术在制备金属有机框架的过程中添加
IMDQ
，在金属有机框架的形成过程中，将
IMDQ
负载金属有机框架内，提高了
IMDQ
的负载效率，而且能够避免
IMDQ
的游离，从而防止游离的
IMDQ
与
OVA
静电结合，提高
OVA
与金属有机框架的静电结合效率，从而实现同时提高
IMDQ
和
OVA
的负载效率
。
[0012]一般来说，锌离子制备的
ZIF
类金属有机框架需要在有机溶剂中进行，其在制备后残留的有机溶剂会破坏蛋白质的结构和性质，尤其是本专利技术采用的
OVA
既要作为抗原，又要作为纳米胶囊的原料，因此需要避免锌离子在有机溶剂中制备
。
由于需要在制备金属有机框架的过程中添加
IMDQ
，而
IMDQ
的空间位阻以及含有较多的
N
，影响锌离子在水中形成
ZIF
类金属有机框架，因此本专利技术在水中制备
ZIF
类金属有机框架时，添加8‑
arm
‑
PEG
‑
OH
，增加矿化效率和分散性，从而保证添加
IMDQ
时形成金属有机框架
ZIF
‑
8。
[0013]虽然锌离子可以作为免疫佐剂，但是
ZIF
‑8在细胞中释放过量的锌离子会导致毒性较高，生物相容性较低
。ZIF
‑8可以采用
EDTA
溶液去除，但是完全去除
ZIF
‑8会导致蛋白
‑
多酚网络缺少骨架支撑，从而产生坍塌，难以产生蛋白多酚纳米胶囊
。
本专利技术采用单宁酸刻蚀
ZIF
‑8形成中空结构，作为蛋白多酚纳米胶囊的骨架，防止蛋白多酚纳米胶囊坍塌；而且多酚类化合物与蛋白质具有多种相互作用，从而形成蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种蛋白多酚纳米胶囊的制备方法，其特征是，包括以下步骤：将8‑
arm
‑
PEG
‑
OH、
免疫佐剂
IMDQ、2
‑
MIM
和锌盐，以水作为溶剂制成负载
IMDQ
的
ZIF
‑8纳米颗粒；将负载
IMDQ
的
ZIF
‑8纳米颗粒分散至水中，加入抗原
OVA
，进行混合反应，使负载
IMDQ
的
ZIF
‑8纳米颗粒吸附
OVA
；将吸附
OVA
的负载
IMDQ
的
ZIF
‑8纳米颗粒分散至水中，加入单宁酸进行反应，使得单宁酸刻蚀
ZIF
‑8形成中空结构，并且中空结构作为骨架通过单宁酸与
OVA
相互作用形成蛋白多酚纳米胶囊
。2.
如权利要求1所述的蛋白多酚纳米胶囊的制备方法，其特征是，所述锌盐为硝酸锌
。3.
如权利要求1所述的蛋白多酚纳米胶囊的制备方法，其特征是，锌离子与2‑
MIM
的摩尔比为1～
3:5
～
10
，优选为
1:3
～5，进一步优选为
1:3.5
～
4.5
；或，锌离子与8‑
arm
‑
PEG
‑
OH
的添加比例为1～
3:0.2
～
0.4
，
mmol:g
，优选为
1:0.12
～
0.13
，
mmol:g
；或，锌离子与
IMDQ
添加比例为1～
3:0.1
～
0.2
，
mmol:g
，优选为
1:0.02
～
0.03
，
mmol:g。4.
如权利要求1所述的蛋白多酚纳米胶囊的制备方法，其特征是，制备载
IMDQ
的

【专利技术属性】
技术研发人员：翟淑梅，刘雨嘉，崔基炜，王宁，郝京诚，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：