一种红曲产环二肽的培养方法技术

本发明专利技术公开一种红曲产环二肽的培养方法，包括如下步骤：

【技术实现步骤摘要】
一种红曲产环二肽的培养方法


[0001]本专利技术涉及微生物发酵
，特别涉及一种红曲产环二肽的培养方法
。

技术介绍

[0002]红曲历史悠久，是祖国宝贵的科学文化遗产
。
红曲在我国古代又称丹曲，红曲是大米接种红曲霉发酵而成的一种红色米曲，所以也称作红曲米
。
[0003]红曲霉
(Monascus spp.)
又称红曲菌，在分类学中属于真菌门
(Eumycophyta)、
子囊菌亚门
(Ascomycotina)、
不整囊菌纲
(Plectomycetes)、
散囊菌目
(Eurotiales)、
红曲菌科
(Monascaceae)、
红曲霉属
(Monascus)。
主要种类有血红红曲霉
(Monascus sanguineus)、
红色红曲霉
(Monascus ruber)、
紫红曲霉
(Monascus purpureus)
丛毛红曲霉
(Monascuspilosus)、
苍白红曲霉
(Monascus pallens)
新月弯孢红曲霉
(Monascus Iunisporas)、
高粱红曲霉
(MonascusKaoliang)、
烟灰色红曲霉
(Monascus fumeus)
烟色红曲霉
(Monascusfuliginosus)
等
。
[0004]红曲霉作为一种能够产食用色素的微生物，目前广泛应用于酒
、
醋
、
食用色素以及保健食品等生产中
。
但是，我们用于接种大米的红曲霉并不是只有红曲霉属的菌株，它实际上是一个包含红曲霉属菌株在内的微生物群，除了红曲霉属菌株以外，还有根霉
、
毛霉
、
芽孢杆菌
、
酵母等数百种微生物组成的微生物群
。
[0005]环二肽
(Cyclic dipeptides
，
CD)
，又称为2，5‑
二酮哌嗪
(2
，5‑
diketopiperazines)
，2，5‑
二氧哌嗪
(2
，5‑
dioxopiperazines)
，由两个氨基酸通过肽键相互连接形成相对稳定的六元环结构，是目前已知的最小的，也是结构最简单的环肽
。
在
1888
年，
Curtius
等首次合成了一种环二肽
——
环甘氨酸，之后环二肽被发现于细菌
、
真菌
、
动植物以及海洋生物中
。
[0006]目前发现，环二肽具有较强的生物活性，比如：抑菌
、
影响细胞间信息传递
、
抑制毒素
、
促进癌细胞凋亡以及阵痛作用
。Rhee
等首次提出环
(
亮氨酸
‑
脯氨酸
)
和环
(
苯丙氨酸
‑
脯氨酸
)
在抑制致病微生物生长方面具有协同作用，并且能够在沙门氏菌中发挥抗突变作用
。Kwak
等的研究表明，环
(
缬氨酸
‑
脯氨酸
)
和环
(
苯丙氨酸
‑
脯氨酸
)
能够抑制病原菌增殖
。
袁王俊等研究了杜仲内生真菌代谢产物的环
(
苯丙氨酸
‑
脯氨酸
)
能够明显抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的增殖，并能够清除
DPPH
自由基和羟自由基
。
张艳荣等发现玉米环二肽
(
组氨酸
‑
脯氨酸
)
具有很强的
DPPH
自由基清除活性
。
何培青等发现环
(
脯氨酸
‑
络氨酸
)、
环
(
脯氨酸
‑
亮氨酸
)
对测试病原真菌表现出一定的抑菌活性，最小抑制浓度为
125
～
500
微克
/
毫升
。Milne
等报道，环
(
苯丙氨酸
‑
脯氨酸
)
等四种环二肽有被开发成抗生素替代物或者抗肿瘤药物的潜力
。Nishanth
等的研究指出环
(
络氨酸
‑
苯丙氨酸
)
在抗菌活性方面对表皮葡萄球菌的抑菌能力比氯霉素还要强，同时还具有一定的抗肿瘤活性
。Kanoh
等报告了一种由苯丙氨酸和异丙脱氢组氨酸组成环二肽衍生物
——
苯并咪唑，在体外和体内具有很强的抗肿瘤活性
。
另外，环二肽还可以作为信号分子调节机体基因表达及代谢
。Park
等发现，环
(
苯丙氨酸
‑
脯氨酸
)
作为信号分子可以控制弧菌属致病基因的表达
。Srinivasan
等专利技术了一种碳水
化合物代谢改善剂，其活性成分即为环二肽，可以促进
GLP
‑1分泌，进而改善糖类的代谢
。
张艳荣等通过体外降血糖实验，研究了玉米环二肽环
(His
‑
Pro)
的生物活性，发现该环二肽对
α
‑
葡萄糖苷酶和
α
‑
淀粉酶活性具有很强抑制能力
。
[0007]20
世纪
70
年代，日本的研究者首次从红色红曲霉
Monascus ruber
中分离得到了具有抑制胆固醇合成活性的代谢产物莫纳可林
K。
此后，科学家们对红曲霉代谢产物进行了更广泛深入的研究
。
研究表明：红曲霉可以产生多种具有抑菌
、
调节血脂
、
抗动脉粥样硬化
、
抗肿瘤
、
神经保护等多种功效活性次级代谢产物，包括莫纳可林类化合物
、
红曲色素
、
γ
－氨基丁酸
、
麦角甾醇
、
氨基多糖等
。
但是，现有的文献报道中，关于红曲次级代谢产物中环二肽的相关报道鲜有报道
。
[0008]龙眼肉
(Longan Arillus)<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种红曲产环二肽的培养方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1
制备培养基，培养基的组成为：龙眼肉
10
％，纯净水，大豆蛋白粉0‑2％，
pH6.5
‑
7.0
；
S2
将红曲米3‑
5g
接种于
100
毫升所述培养基，在
35℃
，转速
200r/min
条件下培养
48h
，得到红曲发酵产物
。2.
如权利要求1所述的一种红曲产环二肽的培养方法，其特征在于：所述培养基包括
LM1、LM2
和
LM3
，每个所述培养基的制备方法如下：
LM1
：将龙眼肉粉碎，称取
50
克，加入纯净水
400mL
，煮
20
‑
30
分钟，过滤去渣后，用纯净水定容到
500mL
，
pH6.5
‑
7.0
，然后高压灭菌备用；
LM2
：称取
50
克龙眼肉碎，加入纯净水
400mL
，煮
20
‑
30
分钟，过滤去渣后加入大豆蛋白粉1％，用纯净水定容到
500mL
，
pH6.5
‑
7.0
，然后高压灭菌备用；
LM3
：称取
50
克龙眼肉碎，称取
50
克，加入纯净水
400mL
，煮
20
‑
30
分钟，过滤去渣后加入大豆蛋白粉2％，用纯净水定容到
500mL
，
pH6.5
‑
7.0
，然后高压灭菌备用
。3.
如权利要求1所述的一种红曲产环二肽的培养方法，其特征在于：对所述红曲发酵产物的成分进行非靶标质谱分析
。4.
如权利要求1所述的一种红曲产环二肽的培养方法，其特征在于：对所述红曲发酵产物中环二肽进行
HPLC
分析，取步骤
S2
中培养好的所述培养基的菌液
2mL
，在室温，
10000rpm
条件下离心
5min
，取上清，用
0.22
μ
m
水系过滤器过滤，过滤后的液体装入进样瓶中用于
HPLC
检测
。5.
如权利要求4所述的一种红曲产环二肽的培养方法，其特征在于：所述
HPLC
检测方法如下：流动相
A
相：
0.1
％的甲酸水溶液；
B
相：
100
％色谱纯乙腈，流动相梯度为0～
25min
中
B
相由2％增加到
30
％，
25
～
60min
中
B
相由
30
％增加到
95
％；检测波长为
200
‑
260nm
，色谱柱为
250mm
×
...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜帆，黄大柯，潘道远，王芹，徐欢，王宇，陈亮，
申请(专利权)人：福建永春侨新酿造有限责任公司，
类型：发明
国别省市：