一种合成制造技术

本发明专利技术公开了一种合成

【技术实现步骤摘要】
一种合成P34HB3HP的菌株及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物工程领域，特别涉及一种合成
P34HB3HP
的菌株及其构建方法和应用
。

技术介绍

[0002]生物可降解聚合物在现代可持续发展的背景下具有极大的潜力，能够替代传统塑料，减少对环境的负面影响
。
聚羟基脂肪酸酯（简称
PHA
）是一类由羟基脂肪酸作为单体组成的生物聚酯
。
作为一种生物可降解塑料，
PHA
具有从刚性材料到弹性体的性能，可应用于各种包装材料和日常消费用塑料制品以及纺织纤维等
。
共聚物中单体种类的不同以及其比例的不同，给
PHA
结构变化带来了无限可能，赋予了
PHA
性能的多样化，如聚（3‑
羟基丁酸酯）（简称
P3HB
）
、
聚（3‑
羟基丁酸酯
‑
co
‑4‑
羟基丁酸酯（简称
P34HB
）等，属于双聚物类型，这些双聚物聚合物在性能上存在一些限制，例如裂时延伸能力较低
、
材料易碎
、
韧性较差以及在高温下熔化不稳定等，因此在生物降解材料使用中具有一定的局限
。
[0003]因此，亟需一种能够提高材料热力学性能和机械性能
、
生物相容好
、
降低生产成本
、
提高生产效率的方法
。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的缺陷，本专利技术提出了一种合成聚（3‑
羟基丁酸
‑
co
‑4‑
羟基丁酸
‑
co
‑4‑
羟基丙酸）（
P34HB3HP
）的菌株及其构建方法和应用
。
[0005]本专利技术提供一种合成聚（3‑
羟基丁酸
‑
co
‑4‑
羟基丁酸
‑
co
‑4‑
羟基丙酸）的菌株的构建方法，包括如下步骤：
S1
：体外扩增
xylB
‑
xylD
‑
Kivd
‑
Yqhd
目的基因序列，插入载体中，得到载体质粒；
S2
：体外扩增
ppdA
‑
ppdC
‑
ppdB
‑
aldD
‑
orfZ
目的基因序列，插入载体中，得到载体质粒；
S3
：体外扩增
dhaB1
‑
dhaB2
‑
dhaB3
‑
gdrA
‑
gdrB
‑
PduP
‑
PhaC
目的基因序列，插入载体中，得到载体质粒；
S4
：将
S1、S2
和
S3
所述载体质粒共同导入菌株中；所述菌株为
。
[0006]本申请中使用的菌株已于
2021
年8月2日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（简称
GDMCC
地址：广州市先列中路
100
号大院
59
号楼5楼，广东省微生物研究所，邮编
510070
）
。
保藏号为
GDMCC NO:61850。
菌株名称为，分类命名为盐单胞菌（
Halomonas lutescens
）
。
[0007]进一步的，所述步骤
S1
使用的载体为
pSEVA321
，步骤
S2
使用的载体为
pSEVA341
，步骤
S3
使用的载体为
pRSF。
[0008]进一步的，所述步骤
S1、S2
和
S3
中目的基因序列的扩增程序为：（1）预变性：温度
95℃
，时间
3 min
；
（2）变性：温度
95℃
，时间
15 sec
；（3）退火：温度
56~60℃
，时间
15 sec
；（4）延伸：温度
72℃
，时间
30~60 sec/kb
；（5）步骤（2）
~
（4）循环
35
次；（6）彻底延伸：温度
72℃
，时间
5 min。
[0009]本专利技术还提供一种合成聚（3‑
羟基丁酸
‑
co
‑4‑
羟基丁酸
‑
co
‑4‑
羟基丙酸）的菌株，所述的构建方法得到
。
[0010]本专利技术还提供一种使用所述的菌株合成聚（3‑
羟基丁酸
‑
co
‑4‑
羟基丁酸
‑
co
‑4‑
羟基丙酸）的方法，包括如下步骤：（1）菌种活化后进行一级
、
二级种子培养，获得种子液；（2）将种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养
。
[0011]进一步的，所述步骤（2）中发酵培养的温度为
36~38℃
，
pH
为
8.2~8.5
，时间为
45~50 h。
[0012]进一步的，所述步骤（2）中发酵培养基包括如下组分：甘油
10 g/L、
木糖
10 g/L、
葡萄糖
10 g/L、
氯化钠
50 g/L、
酵母粉
1.2 g/L、
尿素
0.2~3 g/L、
无水硫酸镁
0.2 g/L、
磷酸二氢钾
1.5~5.5 g/L、Fe(III)
‑
NH4‑
Citrate 5 g/L、CaCl2·
2H2O 2 g/L、HCl 12 mol/L、ZnSO4·
7H2O 0.1 g/L、MnCl2·
4H2O 0.03 g/L、、CoCl2·
6H2O 0.2 g/L、CuSO4·
5H2O 0.01 g/L、NiCl2·
6H2O 0.02 g/L、NaMoO4·
2H2O 0.03 g/L。
[0013]综上，与现有技术相比，本专利技术达到了以下技术效果：（1）本专利技术的重组菌利用自身能生产
3HB
的特性，引入生产
4HB
和
3HP
的代谢途径，合成
P34HB3HP
三聚合物，提高了聚本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种合成聚（3‑
羟基丁酸
‑
co
‑4‑
羟基丁酸
‑
co
‑4‑
羟基丙酸）的菌株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1
：体外扩增
xylB
‑
xylD
‑
Kivd
‑
Yqhd
目的基因序列，插入载体中，得到载体质粒；
S2
：体外扩增
ppdA
‑
ppdC
‑
ppdB
‑
aldD
‑
orfZ
目的基因序列，插入载体中，得到载体质粒；
S3
：体外扩增
dhaB1
‑
dhaB2
‑
dhaB3
‑
gdrA
‑
gdrB
‑
PduP
‑
PhaC
目的基因序列，插入载体中，得到载体质粒；
S4
：将
S1、S2
和
S3
所述载体质粒共同导入菌株中；所述菌株为，保藏编号为
GDMCC NO:61850。2.
根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤
S1
使用的载体为
pSEVA321
，步骤
S2
使用的载体为
pSEVA341
，步骤
S3
使用的载体为
pRSF。3.
根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤
S1、S2、S3
中目的基因序列的扩增程序为：（1）预变性：温度
95℃
，时间
3 min
；（2）变性：温度
95℃
，时间
15 sec
；（3）退火：温度
56~60℃
，时间
15 sec
；（4）延伸：温度
72℃
，时间
30...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶健文，吕金艳，司徒卫，余柳松，林艺娜，
申请(专利权)人：珠海麦得发生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：