一种液相色谱串联质谱联用仪测定鸡蛋中聚醚类抗生素残留量的方法及应用技术

本发明专利技术属于农业生产技术领域，公开了一种液相色谱串联质谱联用仪测定鸡蛋中聚醚类抗生素残留量的方法，包括以下步骤：

【技术实现步骤摘要】
一种液相色谱串联质谱联用仪测定鸡蛋中聚醚类抗生素残留量的方法及应用


[0001]本专利技术属于农业生产
，尤其是一种液相色谱串联质谱联用仪测定鸡蛋中聚醚类抗生素残留量的方法和应用
。

技术介绍

[0002]鸡蛋是人民群众喜爱的大众营养消费食品
。
聚醚类抗生素是目前使用最广泛的鸡用抗球虫药，在国内普遍用于治疗鸡球虫病
。
历史上鸡球虫病曾对集约化养禽业构成极大威胁
。
有关研究表明，1株球虫与抗球虫药接触几十代后即能产生稳定的抗药性
。
目前，养禽生产中使用抗球虫药有加大剂量的倾向
。
大部分聚醚类抗生素在毒理学上属高毒或剧毒物质，具有较强的细胞毒性，安全范围小
。
莫能菌素和盐霉素均属于聚醚类离子载体型抗生素
。
不合理用药可使动物产生急性中毒，并会导致所产蛋中相当水平的药物残留，因此消费者可能因一次摄入相当或更高剂量的药物残留，而对身体造成危害
。
[0003]食品中聚醚类抗生素残留的测定一般使用液相色谱法
、
液相色谱
‑
串联质谱法
、
分光光度法
、
微生物检测法及免疫学方法
。
薄海波等用乙腈提取牛奶和奶粉样品中莫能菌素
、
盐霉素
、
甲基盐霉素
、
沙拉洛菌素
、
尼日利亚菌素马杜霉素铵等6种聚醚类抗生素，提取液通过r/>HLB
固相萃取柱净化，
UPLC
分离，以电喷雾
MRM
进行质谱分离
。
曹亚青等用液相色谱
‑
质谱联用技术
TurboFIow
在线净化的方法有效的分离出了莫能菌素
、
盐霉素和甲基盐霉素，现有技术的前处理方法多采用固相萃取柱净化，另外，大部分使用无水硫酸钠吸收样品中的水分
、0.5
％甲酸水作为流动相
、TurboFlow
在线净化
/
液相色谱
‑
串联质谱法测定鸡蛋中的聚醚类抗生素
。
其中莫能菌素的样品平均加标回收率为
83.17
％，盐霉素的样品平均为
80.6
％，甲基盐霉素的样品平均加标回收率为
81.5
％，该实验的标准偏差在
1.5
％
‑
8.1
％之间，提取时间在
17min
左右，加标回收率一般，灵敏度和精密度不够高，存在操作繁琐和时间长等问题
。
因此，亟需一种液相色谱串联质谱联用仪测定鸡蛋中聚醚类抗生素残留量的方法和应用
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种液相色谱串联质谱联用仪测定鸡蛋中聚醚类抗生素残留量的方法和应用
。
[0005]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0006]一种液相色谱串联质谱联用仪测定鸡蛋中聚醚类抗生素残留量的方法，包括以下步骤：
[0007]1)
鸡蛋中聚醚类抗生素残留量的乙腈提取
[0008]称取样品，精确至
0.05g
，于
50mL
的离心管中，加入乙腈迅速摇匀，
2500r/min
涡旋
10min
，提取上清液；再加入乙腈进行第二次提取，涡旋离心条件均与前面的参数相同；合并提取液，摇匀，得到样品提取液；
[0009]其中，样品：第一次乙腈：第二次乙腈的比例
g
：
mL
：
mL
为5：
15
：
10
；
[0010]2)
无水碳酸钠吸收样品提取液中的水分
[0011]加入无水碳酸钠吸收步骤
1)
得到的样品提取液中的水分，
2500r/min
涡旋
5min
，涡旋完成后高速离心；移取上清液，不加热氮吹，等样品提取液无流动时，用甲醇水溶液定容，过滤至进样小瓶中，制得样品溶液，低温避光保存备用；
[0012]其中，所述无水碳酸钠与样品的质量比为1：1，无水碳酸钠：用甲醇水溶液定容后体积的比例
g
：
mL
为5：4；
[0013]3)
使用液相色谱串联质谱联用仪检测
[0014]a)
标准工作溶液的制备：分别准确称取莫能菌素
、
盐霉素和甲基盐霉标准品，用甲醇定容，配制成
10
μ
g/mL
的标准溶液，再用甲醇稀释成
100ng/mL
的标准工作溶液；
[0015]b)
基质标准工作曲线：鸡蛋空白样品按上述步骤
1)
和步骤
2)
的前处理方式提取和净化后的空白基质液，与步骤
a)
制备的莫能菌素
、
盐霉素和甲基盐霉素的标准工作溶液配制成浓度为
0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、3ng/mL、6ng/mL
混合基质标准工作溶液；
[0016]c)
将步骤
b)
制备的系列浓度的莫能菌素
、
盐霉素和甲基盐霉素的基质标准工作溶液和步骤
2)
制备的待检测莫能菌素
、
盐霉素和甲基盐霉素含量的样品溶液注入液相色谱仪，经串联质谱仪检测后得到鸡蛋样品中莫能菌素
、
盐霉素和甲基盐霉素的含量；
[0017]4)
结果分析
[0018]定性和定量：以化合物的准分子离子峰的精确质量数为定性离子和定量离子；以标准工作液的浓度
X
为横坐标，定量离子的峰面积
Y
为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行外标法定量；用样品溶液出现的色谱峰保留时间和定性离子进行定性
。
[0019]进一步地，所述液相色谱的条件：
ACQOITYC18
色谱柱；流速：
0.300mL/min
；进样量：5μ
L
；流动相
A
：乙腈；流动相
B
：
0.1
％甲酸水；流动相洗脱梯度：
[0020][0021][0022]其中，％
A
示流动相
A
体积分数，％
B
示流动相
B
体积分数
。
[0023]进一步地，所述质谱条件：液相色谱
/
三重四级杆串联质谱联用仪；
MassLynx4.1 SN950
系统软件本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种液相色谱串联质谱联用仪测定鸡蛋中聚醚类抗生素残留量的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)
鸡蛋中聚醚类抗生素残留量的乙腈提取称取样品，加入乙腈迅速摇匀，
2500r/min
涡旋
10min
，提取上清液；再加入乙腈进行第二次提取，涡旋离心条件均与前面的参数相同；合并提取液，摇匀，得到样品提取液；其中，样品：第一次乙腈：第二次乙腈的比例
g
：
mL
：
mL
为
5:15:10
；
2)
无水碳酸钠吸收样品提取液中的水分加入无水碳酸钠吸收步骤
1)
得到的样品提取液中的水分，
2500r/min
涡旋
5min
，涡旋完成后高速离心；移取上清液，不加热氮吹，等样品提取液无流动时，用甲醇水溶液定容，过滤至进样小瓶中，制得样品溶液，低温避光保存备用；其中，所述无水碳酸钠与样品的质量比为1：1，无水碳酸钠：用甲醇水溶液定容后体积的比例
g
：
mL
为5：4；
3)
使用液相色谱串联质谱联用仪检测
a)
标准工作溶液的制备：分别准确称取莫能菌素
、
盐霉素和甲基盐霉标准品，用甲醇定容，配制成
10
μ
g/mL
的标准溶液，再用甲醇稀释成
100ng/mL
的标准工作溶液；
b)
基质标准工作曲线：鸡蛋空白样品按上述步骤
1)
和步骤
2)
的前处理方式提取和净化后的空白基质液，与步骤
a)
制备的莫能菌素
、
盐霉素和甲基盐霉素的标准工作溶液配制成浓度为
0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、3ng/mL、6ng/mL
混合基质标准工作溶液；
c)
将步骤
b)
制备的系列浓度的莫能菌素
、
盐霉素和甲基盐霉素的基质标准工作溶液和步骤
2)
制备的待检测莫能菌素
、
盐霉素和甲基盐霉素含量的样品溶液注入液相色谱仪，经串联质谱仪检测后得到鸡蛋样品中莫能菌素
、
盐霉素和甲基盐霉素的含量；
4)
结果分析定性和定量：以化合物的准分子离子峰的精确质量数为定性离子和定量离子；以标准工作液的浓度
X
为横坐标，定量离子的峰面积
Y
为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行外标法定量；用样品溶液出现的色谱峰保留...

【专利技术属性】
技术研发人员：马会芳，陈晓婷，潘政，刘丽丽，潘晓威，叶剑芝，彭侃霖，林玲，占国艳，梁耀辉，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：