测定制造技术

本发明专利技术公开了一种测定

【技术实现步骤摘要】
测定Taq DNA聚合酶绝对活性的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及一种测定
Taq DNA
聚合酶绝对活性的方法
。

技术介绍

[0002]Taq DNA
聚合酶是从水生嗜热杆菌
Thermus aquaticus
中克隆出的耐热
DNA
聚合酶，具有
5'
‑
3'
聚合活性与
5'
‑
3'
外切活性
。
温度为
55℃~110℃
时催化
DNA
的复制，
70℃~75℃
为最适温度范围
。
由于
Taq DNA
聚合酶的耐热性，被广泛应用于分子克隆，使得
Taq DNA
聚合酶成为
PCR
反应中的独特用酶
。
[0003]Taq DNA
聚合酶是一种重要的分子生物学工具酶，广泛用于各种
PCR
技术/>、TA
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种测定
Taq DNA
聚合酶绝对活性的方法，其特征在于，该方法为：以环状单链
DNA
为模板，在含有扩增引物和
dATP
的反应体系中，以待测
Taq DNA
聚合酶引发延伸复制反应，消耗反应体系中的
dNTPs
；然后测定
dATP
的消耗量，再根据预先构建的表征
Taq DNA
聚合酶的绝对活性与
dATP
消耗量之间关系的标准曲线
f1计算得到
Taq DNA
聚合酶的绝对活性
。2.
根据权利要求1所述的测定
Taq DNA
聚合酶绝对活性的方法，其特征在于，
dATP
的消耗量是通过将反应体系中
dATP
的初始含量减去反应结束后反应体系中
dATP
的剩余量得到，其中，
dATP
的剩余量是通过检测萤火虫萤光素酶利用
dATP
提供的能量催化萤光素产生的萤光值得到
。3.
根据权利要求2所述的测定
Taq DNA
聚合酶绝对活性的方法，其特征在于，
dATP
的剩余量通过以下方法检测得到：在延伸复制反应结束后，取反应产物加入
ATP
检测试剂，检测萤火虫萤光素酶利用
dATP
提供的能量催化萤光素产生的萤光值，然后根据预先构建的表征
dATP
的浓度与萤光值之间关系的标准曲线
f2计算得到
dATP
的剩余量
。4.
根据权利要求1所述的测定
Taq DNA
聚合酶绝对活性的方法，其特征在于，标准曲线
f1的构建方法为：采用标准
Taq DNA
聚合酶，配制一系列具有不同
Taq DNA
聚合酶浓度的反应体系，在每个反应体系中加入扩增引物和
dATP
，在加热条件下反应
10 min~60min
，进行延伸反应；其中，每个反应体系中，除
Taq DNA
聚合酶浓度不同外，其余条件均相同；完成延伸反应后，测定反应过程中
dATP
的消耗量，以标准
Taq DNA
聚合酶的浓度为横轴
、dATP
的消耗量为纵轴，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王学峰，景伟，马富强，江晶洁，桂萍，李晓，陆泽林，罗成坤，陆峰，
申请(专利权)人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：