本发明专利技术一般涉及高半胱氨酸检测领域。特别是，本发明专利技术提供一种测定样品中高半胱氨酸的存在或浓度的方法，该方法包含：在Ｈｃｙ转化反应中将含有或怀疑含有Ｈｃｙ的样品与Ｈｃｙ共底物和Ｈｃｙ转化酶接触以形成Ｈｃｙ转化产物和Ｈｃｙ共底物转化产物；和评估Ｈｃｙ共底物转化产物以确定样品中Ｈｃｙ的存在、不存在和／或数量。本发明专利技术还提供了基于相同原理测定高半胱氨酸的试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术一般涉及高半胱氨酸检测领域。特别是，本专利技术提供一种测定样品中高半 胱氨酸(Hcy)的存在或浓度的方法，其中在通过Hcy转化酶催化的Hcy转化反应中将高半 胱氨酸与Hcy共底物反应以形成Hcy转化产物和Hcy共底物转化产物，和评估Hcy共底物 转化产物以确定样品中Hcy的存在和/或浓度。本专利技术还提供了基于相同原理测定高半胱 氨酸的试剂盒。专利技术背景体液如血浆或血清中的高半胱氨酸的总浓度是疾病的重要标志。例如，高半胱 氨酸定量可以是心血管病重要的风险指标，可以是钴胺素和叶酸缺乏的灵敏标志，并且可 以用于诊断称为高胱氨酸尿症的代谢的先天缺陷。高半胱氨酸定量也已经报道有效用 于评估孕妇中的出生缺陷和老年人的认知损伤。参见Frantzen，等，Enzyme Conversion Immunoassay forDetermining Total Homocysteine in Plasma or Serum, Clinical Chemistry 44:2,311-316(1998)。高半胱氨酸(Hcy)是在S-腺苷甲硫氨酸-依赖性甲基转移反应过程中由甲硫氨 酸形成的含硫醇的氨基酸。胞内Hcy被再甲基化为甲硫氨酸，或者在一系列反应中不可逆 地代谢形成半胱氨酸。胞内Hcy被输出到胞外流体如血液和尿中，并且大多以氧化的形式 循环，主要与血菜蛋白质结合(Refsum，等，Annu. Rev. Medicine, 49 :31_62 (1998))。血菜和 尿中的Hcy的数量反映了 Hcy生产和利用之间的平衡。该平衡可被各种临床状态所扰乱， 所述临床状态其特征在于参与Hcy转硫作用和再甲基化的酶(例如，胱硫醚β-合酶和N5’ 1(1_亚甲基四氢叶酸还原酶)的遗传病或参与Hcy代谢的维生素类(例如维生素B6, B12和叶 酸)的饮食缺乏(Baual，等，ClevelandClinic Journal of Medicine, 64 543-549 (1997)) 另外，血浆Hcy水平还可能被一些用于治疗癌症或关节炎的药物如抗叶酸药物(例如甲氨 蝶呤)所扰乱(Foody，等，Clinician Reviews, 8 203-210 (1998)) —些高半胱氨酸血症病例是由编码参与Hcy代谢的酶的基因的纯合缺陷所导致。 在这些病例中，参与Hcy再甲基化或转硫作用的酶的缺陷导致血液和尿中Hcy高达50倍的 升高。这种病症的典型形式，先天性高半胱氨酸血症(Hcyemia)，是由编码胱硫醚β -合酶 (CBS)的基因的纯合缺陷所导致。这些个体在早年患有血栓栓塞并发症，其导致中风，心肌 梗死，肾血管性高血压，间歇性跛行，肠系膜局部缺血，和肺栓塞。这些患者还可能显示智 力迟钝和其它类似于晶状体异位和骨骼畸形的异常(Perry Τ.，Homocysteine Selected aspects in Nyham W. L. ed. Heritable disorders ofamino acid metabolism. New York,3John Wiley & Sons，pp. 419-451 (1974))。还已知孕妇中升高的Hcy水平与具有神经管闭合 的儿童出生缺陷有关(Scott，等，〃 The etiology of neural tube defects in Graham, I. , Refsum, H. , Rosenberg, I. H. , and Ureland P. M. ed. Homocysteine metabolism from basicscience to clinical medicine Kluwer Academic Publishers, Boston, pp. 133-136 (1995))。因此，Hcy测定的诊断应用已经在这些临床病症中很好地证明。已经显示即使是轻微或适度升高的Hcy水平也增加了冠状动脉、脑动脉和外周动 脉的动脉粥样硬化和心血管病的风险(Boushey，等，JAMA，2H =1049-1057(1995))。在患有 脑血管病、外周血管病和心血管病的患者中，高半胱氨酸血症的发病率据显示分别为42%， 28%，和 30% (Moghadasian，等，Arch. Intern. Med. , 157 2299~2307 (1997)) 0 27 项临床研 究的meta-分析计算表明，Hcy水平每增加5 μ Μ,男人和女人的冠状动脉病的风险分别增加 60%和80%，其相当于血浆胆固醇增加ZOmg/dr1 (0. Smmol/dr1)，提示Hcy作为风险因子在 一般人群中与胆固醇一样强大。这些临床研究的结果得出结论，即高半胱氨酸过高血症是 心血管疾病的一个新出现的独立的风险因子，并且可以解释所有不具有任何确立的心血管 风险因子(例如高血压，高胆固醇血症，吸烟，糖尿病，显著肥胖和身体不活动)的心血管患 者中的一半。轻度高半胱氨酸血症主要是由酶缺陷的杂合性造成的。亚甲基四氢叶酸还原 酶的基因的一种常见多态性似乎影响高半胱氨酸水平对叶酸缺乏的敏感性(Boers，等， J. Inher. Metab. Dis. ,20 301-306 (1997)) 此外，血浆高半胱氨酸水平还在以下患者中 显著升高心脏和肾脏移植患者(Ueland，等，J. Lab. Clin. Med.，114 :473_501 (1989))，阿 尔茨海默氏病患者(Jacobsen，等，Clin. Chem. ,M =2238-2239 (1998)),以及非胰岛素依 赖型糖尿病患者(Ducloux，等，N印hrol. Dial. Transplantl，丛2890-2893 (1998))。将 升高的高半胱氨酸与心血管病联系在一起的证据的积累已经促使开始双盲、随机和安 慰剂对照的多中心临床试验以证明降低血浆Hcy在预防或阻止血管病的进展中的功效 (Diaz-Arrastia,等，Arch. Neurol. ,55 1407-1408 (1998))。血浆高半胱氨酸水平的测定应 当是一项常规的临床实践。作为心血管病的风险因子，已经在临床设置中推荐测定总血浆Hcy水平(还原型， 氧化型和结合蛋白的)(Hornberger，等，American J. of PublicHealth,88 61-67 (1998)) 自从1982年，已经描述了几种测定总血浆Hcy的方法(Mansoor，等，Anal. BioChem.， 200 218-229(1992) ；Steir,等，Arch. Intern. Med.，迴1301-1306 (1998) ；Ueland, 等，Clin. Chem.，巡1764-1779 0 1993)；禾Π Ueland,等，“Plasma homocysteine and cardiovascular disease inFrancis, R. B. Jr. eds. Atherosclerotic Cardiovascular Disease, Hemostasis, andEndothelial Function.New York, 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种测定样品中的高半胱氨酸（Ｈｃｙ）的方法，该方法包含：ａ）在Ｈｃｙ转化反应中将含有或怀疑含有Ｈｃｙ的样品与Ｈｃｙ共底物和Ｈｃｙ转化酶接触以形成Ｈｃｙ转化产物和Ｈｃｙ共底物转化产物，其中所述Ｈｃｙ共底物是Ｓ－腺苷甲硫氨酸（ＳＡＭ），所述Ｈｃｙ转化酶是Ｓ－腺苷甲硫氨酸（ＳＡＭ）－依赖性高半胱氨酸Ｓ－甲基转移酶，所述Ｈｃｙ转化产物是甲硫氨酸（Ｍｅｔ）并且所述Ｈｃｙ共底物转化产物是Ｓ－腺苷－Ｌ－高半胱氨酸（ＳＡＨ）；ｂ）将步骤（ａ）中产生的所述ＳＡＨ与ＳＡＨ水解酶接触以产生Ｈｃｙ和腺苷（Ａｄｏ），所述Ｈｃｙ通过ＳＡＭ－依赖性高半胱氨酸Ｓ－甲基转移酶循环至所述Ｈｃｙ转化反应中以形成基于Ｈｃｙ共底物的酶循环反应体系，评估所述Ａｄｏ以确定样品中Ｈｃｙ的存在、不存在和／或数量。
【技术特征摘要】
US 2003-7-10 60/486,865;US 2004-3-15 10/801,623的范围所限制。权利要求一种测定样品中的高半胱氨酸(Hcy)的方法，该方法包含a)在Hcy转化反应中将含有或怀疑含有Hcy的样品与Hcy共底物和Hcy转化酶接触以形成Hcy转化产物和Hcy共底物转化产物，其中所述Hcy共底物是S 腺苷甲硫氨酸(SAM)，所述Hcy转化酶是S 腺苷甲硫氨酸(SAM) 依赖性高半胱氨酸S 甲基转移酶，所述Hcy转化产物是甲硫氨酸(Met)并且所述Hcy共底物转化产物是S 腺苷 L 高半胱氨酸(SAH)；b)将步骤(a)中产生的所述SAH与SAH水解酶接触以产生Hcy和腺苷(Ado)，所述Hcy通过SAM 依赖性高半胱氨酸S 甲基转移酶循环至所述Hcy转化反应中以形成基于Hcy共底物的酶循环反应体系，评估所述Ado以确定样品中Hcy的存在、不存在和/或数量。2.权利要求1的方法，其中通过将所述Ado与腺苷转化酶而...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁崇生，A达塔，窦超，
申请(专利权)人：通用原子公司，
类型：发明
国别省市：US
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