一种重组酵母菌及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种重组酵母菌及其制备方法。该方法包括如下步骤：（１）将表达载体Ｉ转入宿主酵母菌中，得到转入所述表达载体Ｉ的重组酵母菌，记作酵母菌Ａ；（２）将表达载体ＩＩ转入所述酵母菌Ａ中，得到转入所述表达载体Ｉ和所述表达载体ＩＩ的重组酵母菌；将所述转入所述表达载体Ｉ和所述表达载体ＩＩ的重组酵母菌记作酵母菌Ｂ。实验证明，用本发明专利技术方法制备得到的重组酵母菌中不携带任何抗性基因；转入的表达载体拷贝数多，可达５－５０个拷贝，且均整合到宿主菌的基因组中；用本发明专利技术的重组菌表达的外源基因产品成为安全的食品级产品。本发明专利技术制备方法操作简单、省时省力、成本低廉。因此，本发明专利技术的重组酵母菌及其制备方法适于推广使用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种制备重组酵母菌的方法，包括如下步骤：　　（１）将表达载体Ⅰ转入宿主酵母菌中，得到转入所述表达载体Ⅰ的重组酵母菌，记作酵母菌Ａ；　　（２）将表达载体Ⅱ转入所述酵母菌Ａ中，得到转入所述表达载体Ⅰ和所述表达载体Ⅱ的重组酵母菌；将所述转入所述表达载体Ⅰ和所述表达载体Ⅱ的重组酵母菌记作酵母菌Ｂ；　　（３）诱导所述酵母菌Ｂ中的所述表达载体Ⅱ中的Ｃｒｅ重组酶表达，所述Ｃｒｅ重组酶将所述酵母菌Ｂ中的所述载体Ⅰ中的抗性基因切除，抗性筛选，得到含有所述外源基因和所述表达载体Ⅱ、但不含有所述表达载体Ⅰ中的抗性基因的重组酵母菌；将所述含有所述外源基因和所述表达载体Ⅱ、但不含有所述表达载体Ⅰ中的抗性基因的重组酵母菌记作酵母菌Ｃ；　　（４）传代培养所述酵母菌Ｃ，至所述酵母菌Ｃ中的所述表达载体Ⅱ丢失，抗性筛选，得到含有所述外源基因但不含有所述表达载体Ⅰ中抗性基因也不含有所述表达载体Ⅱ的重组酵母菌，即为目的重组酵母菌；　　所述表达载体Ⅰ包括如下元件：ｌｏｘＰ位点序列Ⅰ、ｌｏｘＰ位点序列Ⅱ、所述宿主酵母菌的１８Ｓ　ｒＤＮＡ序列、外源基因表达盒、抗性筛选标记基因表达盒和原核复制起点序列，所述抗性筛选标记基因表达盒和所述原核复制起点序列在所述ｌｏｘＰ位点序列Ⅰ和所述ｌｏｘＰ位点序列Ⅱ之间；所述ｌｏｘＰ位点序列Ⅰ和所述ｌｏｘＰ位点序列Ⅱ在所述表达载体Ⅰ中为正向重复序列；　　所述表达载体Ⅱ是将所述宿主酵母菌的自我复制序列插入载体ｐＳＨ６５的多克隆位点得到的；所述载体ｐＳＨ６５中含有Ｃｒｅ重组酶表达盒。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邱并生，牛振东，宋浩雷，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]