一种外泌体低温冻存保护液及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种外泌体低温冻存保护液及其制备方法

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体低温冻存保护液及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种外泌体低温冻存保护液及其制备方法
。

技术介绍

[0002]外泌体
(Exosome)
是一种由活细胞分泌的直径在
30
～
150nm
的具有信息传递功能的细胞外囊泡
。
外泌体具有双层脂膜结构，可通过向靶细胞递送其所携带的脱氧核糖核酸
(deoxyribonucleic acid,DNA)、
核糖核酸
(ribonucleic acid,RNA)、
脂类和蛋白质等来介导细胞间的信号通讯
。
[0003]内皮细胞来源外泌体富含大量微小
RNA(microRNA
，
miRNA)、
细胞因子和生长因子，血管内皮细胞可通过外泌体中的这些内容物调控血管生成及血管周围癌细胞
、
成纤维细胞
、
神经细胞及免疫细胞等的生物学功能
。
越来越多的研究表明，外泌体具有减少细胞凋亡
、
减轻炎症反应
、
促进血管生成
、
抑制纤维化
、
提高组织修复潜力等重要生物学作用
。
此外，相较于活细胞，外泌体的成分更为明确，易于质量控制，在治疗心肌梗死
、
皮肤创伤等组织损伤中均具有良好的临床应用前景
。
[0004]外泌体稳定性低
、
易失活，为维持其生物活性必须维持低温保存和运输
。
外泌体生物活性的丧失多发生在贮存保藏阶段
。
研究表明，低温保存下的外泌体仍会发生直径变大
、
外泌体破裂
、
外膜内翻等结构性破坏以及内容物降解或失活等生物活性降低等情况
。
国际胞外囊泡协会
(International Society for ExtracellularVesicles)
建议将外泌体保存在
‑
80℃
下的
PBS
缓冲液中，该方法可维持外泌体生物活性3‑6个月
。
但是，保存期间仍会发生外泌体破损，进而影响外泌体的回收率及生物活性，且较短的保存期也极大地限制了外泌体的正常使用
。
[0005]目前已有研究发现，较为单一的液体环境不利于外泌体的保存，而模拟体液的复合型环境和酸性环境则更利于外泌体的长期保存
。
在无保护剂存在时，外泌体会自然发生聚集
、
沉淀
、
融合
、
破损等现象
。
因此，现有技术通常通过添加冻存保护剂来保存外泌体的活性，如培养基或牛血清
。
但牛血清会引入存在潜在的致病因子，并造成外泌体批间稳定性不一致
。
也有针对外泌体设计的冻干制剂方法，这类方法虽能一定程度上保护外泌体活性，但试剂制备繁琐
、
操作复杂，并不利于外泌体制剂的应用
。
凝胶制剂是外泌体储存的另一方式，虽然也能保护外泌体结果完整性，但凝胶制剂在制备过程中会使用大量的高分子药用辅料，会严重影响外泌体的生物性能和实际应用
。
[0006]因此，亟需一种成分简单
、
生物安全性高
、
能在较低温度下长期保存外泌体且不影响其生物活性的低温冻存保护试剂
。

技术实现思路

[0007]针对上述问题，本专利技术提供了一种外泌体低温冻存保护液及其制备方法，该外泌体低温冻存保护液成分简单，能在低温下长期保存外泌体且不影响其生物活性
。
[0008]第一方面，本专利技术提供了一种外泌体低温冻存保护液，所述外泌体低温冻存保护
液成分包括：以质量百分比计，牛血清白蛋白1～
5wt
％，右旋糖酐
701
～
5wt
％，唾液酸
0.1
～
0.5wt
％，不含
Ca
2+
、Mg
2+
的
PBS
缓冲溶液
89.5
～
97.9wt
％
。
[0009]较佳地，所述外泌体低温冻存保护液成分包括：以质量百分比计，牛血清白蛋白
2wt
％，右旋糖酐
70 2wt
％，唾液酸
0.25wt
％，不含
Ca
2+
、Mg
2+
的
PBS
缓冲溶液
95.75wt
％
。
[0010]较佳地，所述右旋糖酐
70
的平均分子量为6万～8万
。
[0011]较佳地，不含
Ca
2+
、Mg
2+
的
PBS
缓冲溶液的
pH
值为
6.4
‑
8.8
，优选为
6.8
‑
8.8
，更优选为
7.4。
[0012]第二方面，本专利技术提供了一种上述外泌体低温冻存保护液的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：将右旋糖酐
70
溶解于不含
Ca
2+
、Mg
2+
的
PBS
缓冲溶液中得到右旋糖酐
70
‑
PBS
胶体溶液，然后将所述右旋糖酐
70
‑
PBS
胶体溶液与唾液酸
、
牛血清白蛋白溶液混合，得到所述外泌体低温冻存保护液
。
[0013]较佳地，右旋糖酐
70
溶解于不含
Ca
2+
、Mg
2+
的
PBS
缓冲溶液中的温度为
50
～
60℃。
[0014]较佳地，所述制备方法还包括右旋糖酐
70
‑
PBS
胶体溶液与唾液酸
、
牛血清白蛋白溶液混合之后形成的混合溶液采用滤膜进行过滤的操作
。
[0015]较佳地，所述滤膜的孔径为
0.2
～
0.3
μ
m
，优选为
0.22
μ
m。
[0016]有益效果本专利技术提供的外泌体低温冻存保护液的组成明确，通过加入本专利技术提供的低温冻存保护液的外泌体能在
‑
20℃
的低温条件下稳定保存9‑
12
个月，并在保护外泌体结构的同时维持其生物活性；本专利技术提供的外泌体低温冻存保护液成分简单，所用原材料均已获得国家市场监本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种外泌体低温冻存保护液，其特征在于，所述外泌体低温冻存保护液成分包括：以质量百分比计，牛血清白蛋白1～
5wt
％，右旋糖酐
701
～
5wt
％，唾液酸
0.1
～
0.5wt
％，不含
Ca
2+
、Mg
2+
的
PBS
缓冲溶液
89.5
～
97.9wt
％
。2.
根据权利要求1所述的外泌体低温冻存保护液，其特征在于，所述外泌体低温冻存保护液成分包括：以质量百分比计，牛血清白蛋白
2wt
％，右旋糖酐
70 2wt
％，唾液酸
0.25wt
％，不含
Ca
2+
、Mg
2+
的
PBS
缓冲溶液
95.75wt
％
。3.
根据权利要求1或2所述的外泌体低温冻存保护液，其特征在于，所述右旋糖酐
70
的平均分子量为6万～8万
。4.
根据权利要求1‑3中任一项所述的外泌体低温冻存保护液，其特征在于，不含
Ca
2+
、Mg
2+
的
PBS
缓冲溶液的
pH
值为
6.4
‑
8.8
，优选为
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王昊，张评奥，张永芳，赵兰雪，徐见容，张瑞，黄婉莹，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院，
类型：发明
国别省市：