【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品安全领域，具体涉及一种采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法。
技术介绍
1、橙汁可以降低舒张压、保护内皮功能、降低血脂、抑制骨质流失，并且能够改善认知功能。其中一些影响可能与黄烷酮，尤其是橙皮苷和芸香柚皮苷有关；黄烷酮物质被肠道酶如α-鼠李糖苷酶、β-葡萄糖苷酶降解为糖苷元，并在结肠中被肠道细菌代谢为酚酸，然后被吸收到体内。而其生物利用度受到食物成分如蛋白、膳食纤维的影响。牛奶中的蛋白质与多酚之间存在几种相互作用，蛋白质可以通过亲水和疏水相互作用与类黄酮物质结合，结合能力随黄酮中oh基团数量的增加而增加。而乳蛋白通过具有疏水特性的酪蛋白与绿茶多酚发生静电相互作用产生胶束结构，trigueros等人使用超滤柱分析石榴汁、酸奶和含无蛋白酸奶的石榴汁中的酚类成分，发现酚类物质种类决定了酚-蛋白质相互作用的程度。
2、酸奶是利用含嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌等菌株的生物发酵剂，添加或不添加益生菌发酵牛奶而制成，分为天然酸奶或益生菌酸奶。与单独饮用橙汁相比，同时摄入橙汁和全脂酸奶降低了24h尿液中3-羟基苯乙酸、3-羟基苯肼丙烯酸、二氢阿魏酸、3-甲氧基-4-羟基苯腼丙烯酸和3-羟基马尿酸的水平，与此同时，0～5h尿液中黄烷酮代谢物含量亦减少了50％。rosa等人在10名受试者食用天然酸奶两周后和2名受试者食用含德尔布鲁茨乳杆菌和嗜热链球菌的巴氏杀菌酸奶两周后的粪便中检测到乳酸菌。利用体外上消化道模拟系统消化后发现，牛奶和酸奶将绿茶提取物的总酚含量提高了20％。
3、因
技术实现思路
1、针对现有技术存在的上述问题，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法，用于评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的含量在胃肠道系统中的变化的影响。
2、为了解决上述问题，本专利技术所采用的技术方案如下：
3、一种采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法，包括以下步骤：
4、1)采用模拟上消化道系统的体外消化模型，收集胃肠道消化前后的消化液试样，存储备用；
5、2)采用体外结肠发酵模型，收集发酵液试样，存储备用；
6、3)分别萃取步骤1)中收集的消化液和步骤2)中收集的发酵液，然后将萃取液注入hplc-pda系统检测黄烷酮，通过线性回归分析检测结果；
7、4)将步骤1)中收集的消化液、步骤2)中收集的发酵液和标样分别进行衍生化，加入无水己烷后，使用gc-ms检测分析衍生化样品，得到质谱图，根据图谱对酚酸进行定性分析，得到检测结果。
8、进一步的，步骤1)中，采用模拟上消化道系统的体外消化模型收集消化液的方法为：将酸奶和橙汁的混合物添加到密封瓶中，加入5m盐酸和胃蛋白酶，调节ph至2，然后在37℃下振荡水浴，孵育1h后，模拟胃消化，然后加入nahco3中和消化液ph至7，然后加入胰酶和胆汁提取物，模拟小肠消化，再次在37℃下振荡水浴孵育6h；在胃肠道消化前后取等分试样，存储在-80℃下，备用。
9、进一步的，所述胃蛋白酶的w/v为0.32％；其中，w/v的单位为g/ml。
10、进一步的，所述振荡的频率为100stokes/min，所述胰酶的质量浓度为4g/l，所述胆汁提取物的质量浓度为254g/l。
11、进一步的，步骤2)中，采用体外结肠发酵模型收集发酵液的方法为：由受试者提供粪便样本，在粪便样本中加入磷酸钠缓冲液匀浆，得到粪便浆液，然后通过尼龙网过滤粪便浆液得到过滤浆液；将含有缓冲液、常量和微量矿物质、胰蛋白胨、天青素和还原溶液的发酵培养基加入发酵瓶中，加入过滤浆液，用聚乙烯膜密封，在厌氧条件下振荡水浴孵育，并重复三组，收集发酵液等分试样，存储在-80℃下，备用；其中，振荡频率为60stokes/min，水浴温度为37℃。
12、进一步的，所述粪便浆液的质量浓度为32％；所述缓冲液为体积比为1:1的nh4hco3和nahco3；所述还原溶液为质量比为1:1的半胱氨酸盐酸盐和na2s的混合溶液。
13、进一步的，步骤3)中，采用hplc-pda系统检测黄烷酮的方法为：将消化液和发酵液解冻后，分别用细胞破碎混合仪均质，然后分别和含有1％甲酸的甲醇加入玻璃管中，涡旋离心后取出上清液，然后将甲醇加入沉淀物中，再与上清液合并，进行浓缩，再用甲醇和甲酸将浓缩物重新溶解，得到萃取液；将萃取液注入hplc-pda系统，得到谱图，通过线性回归分析检测结果。
14、进一步的，所述hplc-pda系统的检测条件为：pda检测器的扫描范围为250nm～700nm；自动进样器的温度为4℃；synergi maxrp色谱柱的型号为phenomenex，macclesfield，规格为250mm×4.6mm×4μm；使用含1％甲酸的甲醇溶液以1ml/min流速进行洗脱，含1％甲酸的甲醇溶液的质量分数从5％升至50％，洗脱时间为60min，洗脱温度为40℃。
15、进一步的，步骤4)中，使用gc-ms检测酚酸的方法为：将消化液、发酵液和标样中加入tmca和1m盐酸，在4℃下放置10min，然后加入无水乙酸乙酯涡旋离心，将上层有机相转移到琥珀色小瓶中，在37℃氮气流下干燥，再加入dcm冲洗小瓶壁并在氮气流下干燥，然后加入衍生化试剂，在70℃下孵育4h，每30min涡旋1次，衍生化完成；将衍生化样品加入无水己烷，使用gc-ms对样品进行分析，得到质谱，通过图谱进行分析；其中，衍生化试剂为bstfa和tmcs的混合溶液。
16、进一步的，所述gc-ms系统的检测条件为：注射器温度为220℃，在分流模式下以25:1的比例进样；将质谱仪设置为正电离模式，传输线分别设定为180℃和310℃；熔融石英毛细管柱表面涂有0.25μm的5％苯基甲基硅氧烷，规格为30mm×0.25mm；氦气为载气，流速为1.2ml/min；柱温最初设定45℃，以20℃/min升至160℃，然后以1.5℃/min升至200℃，接着再以10℃/min升至250℃，最后以40℃/min升至300℃，保持5min；在全扫描模式下进行数据采集，m/z为50～470，电离能量为70ev，使用xcalibur 2.0版本进行分析。
17、有益效果：相比于现有技术，本专利技术的优点为：
18、(1)本专利技术采用模拟胃肠消化的体外模型，并利用来自人的粪便菌群模拟结肠发酵的方法，得出酸奶橙汁的混合液经过上消化道消化后，与单独橙汁相比，橙皮苷含量比单独橙汁的含量高25％，芸香柚皮苷的含量比单独橙汁的含量高50％。
19、(2)本专利技术采用模拟上消化道系统的体外消化模型，在经过上消化道消化后，对香豆酸、阿魏酸、3,4二羟基苯乙酸、3-羟基-4-甲氧基苯基丙酸、3-甲氧基-4羟基苯基丙酸和3,4-二羟基苯基丙酸本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法，其特征在于，步骤1)中，采用模拟上消化道系统的体外消化模型收集消化液的方法为：将酸奶和橙汁的混合物添加到密封瓶中，加入5M盐酸和胃蛋白酶，调节pH至2，然后在37℃下振荡水浴，孵育1h后，模拟胃消化，然后加入NaHCO3中和消化液pH至7，然后加入胰酶和胆汁提取物，模拟小肠消化，再次在37℃下振荡水浴孵育6h；在胃肠道消化前后取等分试样，存储在-80℃下，备用。
3.根据权利要求2所述的采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法，其特征在于，所述胃蛋白酶的w/v为0.32％；其中，w/v的单位为g/mL。
4.根据权利要求2所述的采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法，其特征在于，所述振荡的频率为100stokes/min，所述胰酶的质量浓度为4g/L，所述胆汁提取物的质量浓度为254g/L。
...【技术特征摘要】
1.一种采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法，其特征在于，步骤1)中，采用模拟上消化道系统的体外消化模型收集消化液的方法为：将酸奶和橙汁的混合物添加到密封瓶中，加入5m盐酸和胃蛋白酶，调节ph至2，然后在37℃下振荡水浴，孵育1h后，模拟胃消化，然后加入nahco3中和消化液ph至7，然后加入胰酶和胆汁提取物，模拟小肠消化，再次在37℃下振荡水浴孵育6h；在胃肠道消化前后取等分试样，存储在-80℃下，备用。
3.根据权利要求2所述的采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法，其特征在于，所述胃蛋白酶的w/v为0.32％；其中，w/v的单位为g/ml。
4.根据权利要求2所述的采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法，其特征在于，所述振荡的频率为100stokes/min，所述胰酶的质量浓度为4g/l，所述胆汁提取物的质量浓度为254g/l。
5.根据权利要求1所述的采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法，其特征在于，步骤2)中，采用体外结肠发酵模型收集发酵液的方法为：由受试者提供粪便样本，在粪便样本中加入磷酸钠缓冲液匀浆，得到粪便浆液，然后通过尼龙网过滤粪便浆液得到过滤浆液；将含有缓冲液、常量和微量矿物质、胰蛋白胨、天青素和还原溶液的发酵培养基加入发酵瓶中，加入过滤浆液，用聚乙烯膜密封，在厌氧条件下振荡水浴孵育，并重复三组，收集发酵液等分试样，存储在-80℃下，备用；其中，振荡频率为60stokes/min，水浴温度为37℃。
6.根据权利要求5所述的采用模拟胃肠消化的体外模型评估酸奶对橙汁中黄烷酮和酚酸的影响的方法，其特征在于，所述粪便浆液的质量浓度为32％；所述缓冲液为体积比为1:1的nh4hco3和nahco3；所述还原溶液为质量比为1:1的半胱氨酸盐酸盐和na2s的混合溶液。
7.根据权利要求1所述的采用模拟胃肠消化的体...
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