ESAT6-wFc融合蛋白及其在制备抗结核黏膜免疫疫苗中的应用制造技术

本发明专利技术公开了ESAT6

【技术实现步骤摘要】
ESAT6
‑
wFc融合蛋白及其在制备抗结核黏膜免疫疫苗中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及ESAT6
‑
wFc融合蛋白及其在制备抗结核黏膜免疫疫苗中的应用。

技术介绍

[0002]结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，M.tb)感染所致的一种慢性传染病，肺结核最为常见，呈世界性分布，是细菌感染性疾病致死的首位原因，严重威胁人类健康。约90％的TB患者是成年人，据WHO统计，2021年全球新发TB患者1060万，发病率上升了3.6％。因此预防治疗该疾病显得尤为紧迫。
[0003]卡介苗(Bacillus Calmette
‑
Guerin，BCG)是目前临床上唯一应用的结核疫苗，研究结果表明，卡介苗免疫保护力只能维持10
‑
15年。BCG对新生儿有较好的免疫保护效果，能降低儿童重症TB的发病率，但其主要对生长期细菌产生保护性免疫应答，在休眠期起保护作用的抗原较少且表达量较低，使得已经潜伏在人体的M.tb不能被及时清除，所以对成人肺结核的保护效果并不明显。鉴于BCG对成人保护力不足的情况，针对该疾病疫苗的开发和接种方式的改进意义重大。由于M.tb主要通过呼吸道传播，呼吸道黏膜是病原体侵犯机体的门户，随着学界对黏膜免疫应答机制的深入研究、对M.tb感染产生的黏膜局部和全身免疫应答认识的增强，黏膜免疫疫苗有望成为结核疫苗研发的新策略。
[0004]目前，国内外研究比较多的结核疫苗有病毒载体疫苗、蛋白/佐剂疫苗、分枝杆菌
‑
全细胞或提取物疫苗和分支杆菌减毒活疫苗。这些疫苗在研发的过程中，主要采取的是皮下或肌肉接种途径。因为M.tb主要通过呼吸道传播，其对呼吸道黏膜局部诱导的抗结核免疫效应相对于其它部位更为快速和有效。因此，开发稳定高效的抗结核黏膜免疫疫苗及选择合适的黏膜免疫佐剂是目前结核黏膜疫苗研发成功的主要考虑方面。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供ESAT6
‑
wFc融合蛋白及其在制备抗结核黏膜免疫疫苗中的应用。
[0006]本专利技术首先保护一种蛋白质，命名为ESAT6
‑
wFc蛋白，包括ESAT6区段和IgG2a Fc区段；
[0007]所述ESAT6区段如序列表的序列1中第26
‑
119位所示；
[0008]所述IgG2a Fc区段如序列表的序列1中第134
‑
366位所示。
[0009]ESAT6，全称为6kD早期分泌性抗原靶蛋白(Early secreted antigenic target6
‑
kDa)，是M.tb分泌的一种低分子量免疫蛋白。
[0010]IgG2a Fc，可以介导IgG穿过黏膜屏障并能有效地提高抗原传输效率及延长其半衰期，从而达到更佳的免疫效果。
[0011]具体的，ESAT6
‑
wFc蛋白自N端至C端依次包括如下区段：ESAT6区段和IgG2a Fc区
段。
[0012]具体的，ESAT6
‑
wFc蛋白自N端至C端依次包括如下区段：ESAT6区段、linker和IgG2a Fc区段。
[0013]Linker即连接肽。
[0014]具体的，ESAT6
‑
wFc蛋白自N端至C端依次由如下区段组成：ESAT6区段、linker和IgG2a Fc区段。
[0015]具体的，ESAT6
‑
wFc蛋白中，ESAT6区段和IgG2a Fc区段由linker连接。
[0016]具体的，所述linker如序列表的序列1中第120
‑
133位所示。
[0017]具体的，ESAT6
‑
wFc蛋白如序列表的序列1中第26
‑
366位所示。
[0018]本专利技术还保护一种蛋白质，命名为ESAT6
‑
wFc融合蛋白，其具有ESAT6
‑
wFc蛋白。
[0019]ESAT6
‑
wFc融合蛋白中，除了ESAT6
‑
wFc蛋白，还具有其它区段。示例性的，所述区段可为信号肽。示例性的，所述区段可为用于纯化的蛋白标签。示例性的，所述区段可为用于鉴定的蛋白标签。ESAT6
‑
wFc融合蛋白具有信号肽和ESAT6
‑
wFc蛋白时，命名为SP
‑
ESAT6
‑
wFc蛋白。具体的，所述信号肽如序列表的序列1中第1
‑
25位所示。具体的，SP
‑
ESAT6
‑
wFc蛋白如序列表的序列1所示。
[0020]所述蛋白标签具体可如表1所示。
[0021]表1标签的序列
[0022]标签残基序列Poly
‑
Arg5
‑
6(通常为5个)RRRRRPoly
‑
His2
‑
10(通常为6个)HHHHHHFLAG8DYKDDDDKStrep
‑
tag II8WSHPQFEKc
‑
myc10EQKLISEEDL
[0023]编码ESAT6
‑
wFc蛋白的核酸分子也属于本专利技术的保护范围。具体的，编码ESAT6
‑
wFc蛋白的核酸分子如序列表的序列2中第76
‑
1098位所示。
[0024]编码ESAT6
‑
wFc融合蛋白的核酸分子也属于本专利技术的保护范围。具体的，编码ESAT6
‑
wFc融合蛋白的核酸分如序列表的序列2所示。
[0025]具有以上任一所述核酸分子的表达盒、重组质粒或重组细胞均属于本专利技术的保护范围。
[0026]所述重组质粒具体可为重组质粒pcDNA
‑
SP
‑
ESAT6
‑
wFc。
[0027]将质粒pcDNA3.1(+)的HindIII和XhoI酶切位点之间的小片段替换为序列表的序列2所示的DNA分子，得到重组质粒pcDNA
‑
SP
‑
ESAT6
‑
wFc。
[0028]所述重组细胞具体可为将所述重组质粒导入哺乳动物细胞得到的重组细胞。
[0029]所述重组细胞具体可为将所述重组质粒转染哺乳动物细胞得到的稳定表达所述蛋白质的重组细胞。
[0030]示例性的，所述哺乳动物细胞具体可为中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞。
[0031]本专利技术还保护以上任一所述重组细胞在制备以上任一所述蛋白质中的应用。
[0032]本专利技术还保护生物材料在制备疫苗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.蛋白质，命名为ESAT6
‑
wFc蛋白，包括ESAT6区段和IgG2a Fc区段；所述ESAT6区段如序列表的序列1中第26
‑
119位所示；所述IgG2a Fc区段如序列表的序列1中第134
‑
366位所示。2.如权利要求1所述的蛋白质，其特征在于：ESAT6
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wFc蛋白中，ESAT6区段和IgG2a Fc区段由linker连接；所述linker如序列表的序列1中第120
‑
133位所示。3.蛋白质，命名为ESAT6
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wFc融合蛋白，其具有权利要求1或2中所述的ESAT6
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：万巧凤，杨茂胜，杨雨欣，李慧，白雅，
申请(专利权)人：宁夏医科大学，
类型：发明
国别省市：