一种鸭甲型肝炎病毒3型重组免疫原及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种鸭甲型肝炎病毒3型（

【技术实现步骤摘要】
一种鸭甲型肝炎病毒3型重组免疫原及其应用


[0001]本专利技术涉及一种鸭甲型肝炎病毒3型重组免疫原及其应用，特别涉及一种串联表达鸭甲型肝炎病毒3型结构蛋白保护性抗原优势区的重组免疫原及应用
。
本专利技术属于生物

。

技术介绍

[0002]鸭病毒性肝炎（
Duck viral hepatitis
，
DVH
）是由鸭肝炎病毒（
Duck hepatitis virus
，
DHV
）引起的一种雏鸭高度致死性传染病，引起
1~3
周龄雏鸭以肝脏肿大
、
表面呈斑点样出血并伴有神经症状为特征的一种急性
、
高度致死性传染病，患病雏鸭的病死率高达
80%
，甚至
100%。
[0003]鸭肝炎病毒包括三种血清型，其中鸭甲型肝炎病毒（
Duck Hepatitis A Virus
，
DHAV
）属于小
RNA
病毒科禽肝病毒属成员，其成员按照基因型分为
A、B、C
型，此三型也称为鸭甲型肝炎病毒1型（
DHAV
‑1），2型（
DHAV
‑2）和3型（
DHAV
‑3），各型间无交叉保护或弱交叉保护
。
鸭肝炎病毒的其他两个血清型均为鸭星状病毒，属于星状病毒科禽星状病毒属成员，与鸭甲型肝炎病毒无血清型交叉反应
。<br/>以
DHAV
的发生最为严重，主要流行的为1型和3型
DHAV
，且生产实践中常发生1型和3型
DHAV
的混合感染
。VP1、VP3
和
VP0
是
DHAV
的三种结构蛋白，其中
VP1
是主要保护性抗原，可刺激机体产生保护性应答和中和抗体，但其与
VP3
和
VP0
相比变异程度较高，且以其
C
末端变异较大；
VP3
和
VP0
也具有一定的免疫保护性，可刺激机体产生免疫保护应答
。
由于
DHAV
‑3的
VP1、VP3
和
VP0
结构蛋白具有免疫原性，为基于
DHAV
‑3结构蛋白的多表位疫苗研发奠定了理论基础
。
[0004]当前，开产母鸭接种灭活疫苗和弱毒疫苗产生母源抗体保护雏鸭，及雏鸭使用卵黄抗体是防控该病的主要手段，但是传统疫苗存在诸如使用禽胚生产批次间抗原含量差异大，不易于标准化生产，毒力返强，不易于运输和保存，生产成本高等问题
。
与传统疫苗相比，多表位疫苗具有安全稳定
、
产量高
、
成本低
、
免疫效果好等优点，具有良好的应用前景
。
目前，尚没有基于
DHAV
‑
3 三种结构蛋白保护性抗原优势区的多表位疫苗的报道，因此，利用分子生物学及免疫学方法鉴定
DHAV
‑
3 三种结构蛋白的保护性抗原优势区，并构建其串联表达的重组免疫原并对其进行免疫评价，对于研制
DHAV
‑3新型疫苗从而提供有效防控策略具有重要理论和实践意义
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种串联表达
DHAV
‑
3 结构蛋白保护性抗原优势区的重组免疫原及应用
。
[0006]为了达到上述目的，本专利技术采用了以下技术手段：本专利技术的一种串联表达鸭甲型肝炎病毒（
Duck Hepatitis A Virus
，
DHAV
）3型结构蛋白保护性抗原优势区的重组免疫原，所述的重组免疫原是将
Duck hepatitis A virus 3 strain GD
（
DHAV
‑
3 GD
，
Genbank 登录号为
GQ122332
）株的结构蛋白
VP1
的
90~175 aa
保护
Rosetta
‑
pET32a
‑
DHAV
‑3‑
VP1
诱导前；
3. Rosetta
‑
pET32a
‑
DHAV
‑3‑
VP1
诱导后菌体；
4. Rosetta
‑
pET32a
‑
DHAV
‑3‑
VP1
诱导后上清；
5. Rosetta
‑
pET32a
‑
DHAV
‑3‑
VP1
诱导后沉淀；图5为
pET30a
‑
VP1
‑
1~4
的酶切鉴定图；其中，
A~B. M. Trans2K plus
Ⅱꢀ
DNA marker; 1、4. pET30a
‑
VP1
‑
1~4
质粒
; 2、5. pET30a
‑
VP1
‑
1~4
经
EcoRⅠ单酶切鉴定；
3、6: pET30a
‑
VP1
‑
1~4
经
EcoRⅠ和
XhoⅠ双酶切鉴定
;
图6为
Rosetta
‑
pET
‑
30a
‑
DHAV
‑3‑
VP1
‑
1~4 原核表达的
SDS
‑
PAGE
分析图；其中，
A~D.Rosetta
‑
pET
‑
30a
‑
DHAV
‑3‑
VP1
‑
1~4
诱导表达产物：
M.Page Ruler Marker
；
1.Rosetta
‑
pET
‑
30a
诱导前；
2.Rosetta
‑
pET
‑
30a
诱导后；
3.Rosetta
‑
pET
‑
30a
‑
DHAV
‑3‑
VP1
‑
1~4
诱导前；
4.Rosetta
‑
pET
‑
30a
‑
DHAV
‑3‑
VP1
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种串联表达鸭甲型肝炎病毒（
Duck Hepatitis A Virus
，
DHAV
）3型结构蛋白保护性抗原优势区的重组免疫原，其特征在于，所述的重组免疫原是将
DHAV
‑
3 GD
株的结构蛋白
VP1
的
90~175 aa
保护性抗原优势区
、
结构蛋白
VP3
的
81~183 aa
保护性抗原优势区及
VP0
的
39
‑
177aa
氨基酸序列经柔性
Linker
串联后得到，其中，所述的
VP0
的
39
‑
177aa
氨基酸序列中含有结构蛋白
VP0
的
50~117 aa
保护性抗原优势区
。2.
如权利要求1所述的重组免疫原，其特征在于，所述的
Li...

【专利技术属性】
技术研发人员：马波，李洪涛，门嘉琪，于李丹依，常蕊，王文月，曹永生，闵亚宏，张文龙，张桂红，王君伟，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：