一种分子佐剂制造技术

本发明专利技术公开一种分子佐剂

【技术实现步骤摘要】
所示；其编码基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：
10
中自5′
端第
1327bp
～
1356bp
所示
。
[0026]所述的蜂毒信号肽的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：5所示；其编码基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：
10
中自5′
端第
28bp
～
90bp
所示
。
[0027]所述的
Flag
标签蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：6所示；其编码基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：
10
中自5′
端第
4bp
～
27bp
所示
。
[0028]所述的6×
His
标签蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：7所示；其编码基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：
10
中自5′
端第
1357bp
～
1374bp
所示
。
[0029]所述的分子佐剂还包括柔性连接分子
linker
，所述的柔性连接分子
linker
实现对鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的氨基酸残基
(Flic
△
174
‑
400
)r/>和
IIb
型大肠杆菌热不稳定肠毒素
B
亚基的氨基酸残基
(LTB
△1‑
23
)
之间的连接，所述的柔性连接分子
linker
的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：8所示；其编码基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：
10
中自5′
端第
607bp
～
636bp
所示
。
[0030]所述的分子佐剂的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：9所示；
[0031]所述的分子佐剂的编码基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：
10
所示；
[0032]一种嵌合型
H5N1
亚型禽流感病毒样颗粒，包含上述所述的分子佐剂
(FL)
蛋白
、H5N1
亚型禽流感病毒
HA
蛋白和
H7N9
亚型禽流感病毒
M1
蛋白；
[0033]优选的，所述的嵌合型
H5N1
亚型禽流感病毒样颗粒由分子佐剂
(FL)、H5N1
亚型禽流感病毒
HA
蛋白和
H7N9
亚型禽流感病毒
M1
蛋白组装而成；
[0034]所述的
H5N1
亚型禽流感病毒
HA
蛋白的氨基酸序列如专利“202310079761.X”中的
SEQ ID NO
：3所示；其编码基因的核苷酸序列如专利“202310079761.X”中的
SEQ ID NO
：1所示；
[0035]所述的
H7N9
亚型禽流感病毒
M1
蛋白的氨基酸序列如专利“202310079761.X”中的
SEQ ID NO
：4所示；其编码基因的核苷酸序列如专利“202310079761.X”中的
SEQ ID NO
：2所示；
[0036]所述的嵌合型
H5N1
亚型禽流感病毒样颗粒的制备方法，包括以下步骤：
[0037](1)
通过人工合成上述分子佐剂
FL
的编码基因，其核苷酸序列如
SEQ ID NO
：
10
所示；将
H5N1
亚型禽流感病毒
HA
蛋白的编码基因和
H7N9
亚型禽流感病毒
M1
蛋白的编码基因经密码子优化后，人工合成，分别得到密码子优化后的
HA
蛋白的编码基因和
M1
蛋白的编码基因，核苷酸序列如专利“202310079761.X”中的
SEQ ID NO
：1～2所示；
[0038](2)
将步骤
(1)
中的分子佐剂
FL
的编码基因
、HA
蛋白的编码基因和
M1
蛋白的编码基因分别插入到杆状病毒表达系统的转递质粒中，分别得到
FL
基因重组转递质粒
、HA
基因重组转递质粒以及
M1
基因重组转递质粒；
[0039](3)
将步骤
(2)
中得到的
FL
基因重组转递质粒
、HA
基因重组转递质粒以及
M1
基因重组转递质粒经转化重组，分别得到
FL
基因重组杆状病毒质粒
、HA
基因重组杆状病毒质粒以及
M1
基因重组杆状病毒质粒；
[0040](4)
将步骤
(3)
中得到的
FL
基因重组杆状病毒质粒
、HA
基因重组杆状病毒质粒以及
M1
基因重组杆状病毒质粒经脂质体介导转染
sf9
昆虫细胞，收获培养上清，分别得到
P1
代
FL
基因重组杆状病毒
、HA
基因重组杆状病毒以及
M1
基因重组杆状病毒；
[0041](5)
将步骤
(4)
中得到的
P1
代
FL
基因重组杆状病毒
、HA
基因重组杆状病毒以及
M1
基因重组杆状病毒感染
sf9
昆虫细胞进行传代，连续传代2次，分别得到
P3
代
FL
基因重组杆状
病毒
、HA
基因重组杆状病毒以及
M1
基因重组杆状病毒；
[0042](6)
将步骤
(5)
中得到的
P3
代
FL
基因重组杆状病毒
、HA
基因重组杆状病毒以及
M1
基因重组杆状病毒以共感染的方式感染昆虫细胞，收取细胞外培养上清，得到由
FL
蛋白
、HA
蛋白以及
M1
蛋白组装而成的病毒样颗粒，即所述嵌合型...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种分子佐剂，其特征在于：所述分子佐剂由
Flag
标签蛋白
、
蜂毒信号肽
、
鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的氨基酸残基
Flic
△
174
‑
400
、IIb
型大肠杆菌热不稳定肠毒素
B
亚基的氨基酸残基
LTB
△1‑
23
、H7N9
亚型禽流感病毒
HA
蛋白的跨膜区
TM
和胞质尾区
CT
以及6×
His
标签蛋白重组嵌合而成
。2.
根据权利要求1所述的分子佐剂，其特征在于：所述的分子佐剂的氨基酸序列如
SEQ ID NO
：9所示
。3.
一种权利要求1～2任一项所述的分子佐剂的编码基因，其特征在于：所述的编码基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：
10
所示
。4.
一种嵌合型
H5N1
亚型禽流感病毒样颗粒，其特征在于：包含权利要求1～2任一项所述的分子佐剂蛋白
、H5N1
亚型禽流感病毒
HA
蛋白和
H7N9
亚型禽流感病毒
M1
蛋白
。5.
权利要求4所述的嵌合型
H5N1
亚型禽流感病毒样颗粒的制备方法，其特征在于：所述的嵌合型
H5N1
亚型禽流感病毒样颗粒由权利要求1～2任一项所述的分子佐剂
、H5N1
亚型禽流感病毒
HA
蛋白和
H7N9
亚型禽流感病毒
M1
蛋白组装而成；所述的嵌合型
H5N1
亚型禽流感病毒样颗粒的制备方法，包括以下步骤：
(1)
分子佐剂
FL
的编码基因，其核苷酸序列如
SEQ ID NO
：
10
所示；密码子优化后的
HA
蛋白的编码基因的核苷酸序列如专利“202310079761.X”中的
SEQ ID NO
：1所示，密码子优化后的
M1
蛋白的编码基因的核苷酸序列如专利“202310079761.X”中的
SEQ ID NO
：2所示；
(2)
将步骤
(1)
中的分子佐剂
FL
的编码基因
、HA
蛋白的编码基因和
M1
蛋白的编码基因分别插入到杆状病毒表达系统的转递质粒中，分别得到
FL
基因重组转递质粒
、HA
基因重组转递质粒以及
M1
基因重组转递质粒；
(3)
将步骤
(2)
中得到的
FL
基因重组转递质粒
、HA
基因重组转递质粒以及
M1
基因重组转递质粒经转化重组，分别得到
FL
基因重组杆状病毒质粒
、HA
基因重组杆状病毒质粒以及
M1
基因基因重组杆状病毒质粒；
(4)
将步骤
(3)
中得到的<...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊惠英，孔德鑫，贺艳娟，廖明，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：