香豆素类化合物在制备预防新冠病毒感染引起的肺炎药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了香豆素类化合物在制备预防新冠病毒感染引起的肺炎药物中的应用，所述香豆素类化合物为西瑞香素、伞形酮或瑞香素；本发明专利技术首次发现了香豆素类化合物西瑞香素、伞形酮或瑞香素能够通过抑制ACE2的表达来预防感染新冠病毒，可作为预防感染新冠病毒的药物进行使用。行使用。行使用。

【技术实现步骤摘要】
香豆素类化合物在制备预防新冠病毒感染引起的肺炎药物中的应用


[0001]本专利技术属于药物应用
，具体涉及香豆素类化合物在制备预防新冠肺炎药物中的应用。

技术介绍

[0002]严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS
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2)，通常通过呼吸道感染人类，并造成呼吸系统和人体各个器官的损伤。由于Omicron新的病毒突变株不断出现具有更强的感染能力或更强免疫逃逸能力至今仍然存在SARS
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2的大规模流行，现在对SARS
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2的预防主要是通过大规模接种疫苗。而对SARS
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2的治疗主要是用小分子化药、抗体药以及中国特有的中药。
[0003]但是因为新冠病毒是RNA病毒，其传播速度极快，变异性极强，一般六个月即可发生新的突变导致大规模流行使得以往接种的疫苗失去预防感染效果。而抗体药在临床试验阶段就会因为病毒的变异而不得不淘汰。至于中药，因为其标准化和产能有困难，可及性不及小分子化药。现在的治疗新冠病毒感染的小分子化药以辉瑞的奈玛特韦片/利托那韦片(Paxlovid)(3CL蛋白酶抑制剂)和国产阿兹夫定(RNA聚合酶抑制剂)为代表，但这些药物针对感染病毒之前的人群没有预防效果，并且对没有基础病普通人群没有治疗效果。
[0004]因此，针对SARS
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2每隔六个月因变异而造成的持续全世界范围内的大流行，迫切需要开发可以无视病毒变异并且预防或阻断SARS
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2感染的药物。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供香豆素类化合物在制备预防新冠病毒感染引起的肺炎药物中的应用，本专利技术首次发现了香豆素类化合物西瑞香素、伞形酮或瑞香素能够通过抑制ACE2的表达来预防感染新冠病毒。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：
[0007]香豆素类化合物在制备预防新冠病毒感染引起的肺炎药物中的应用，所述香豆素类化合物为西瑞香素、伞形酮或瑞香素。
[0008]西瑞香素、伞形酮或瑞香素通过抑制ACE2的表达来预防感染新冠病毒。
[0009]所述西瑞香素、伞形酮或瑞香素的结构式分别为：
[0010]西瑞香素：
[0011]伞形酮：
[0012]瑞香素：
[0013]SARS
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2主要通过其表面刺突蛋白与人体细胞上的血管紧张素转化酶2(ACE2)受体结合实现感染，刺突蛋白是SARS
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2识别宿主细胞的蛋白，也是人体免疫系统的主要攻击目标。ACE2是SARS
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2的主要进入受体，ACE2也称为ACEH，称为血管紧张素转化酶2。该基因编码的蛋白属于二肽基羧基二肽酶的血管紧张素转换酶家族，与人血管紧张素转换酶1具有相当大的同源性。在正常成人肺中，ACE2主要在肺泡上皮II型细胞中表达，这些细胞产生表面活性物质，降低肺泡表面张力，从而防止肺泡塌陷，对肺的气体交换功能至关重要，这些细胞的损伤可以解释为何COVID
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19患者会出现严重的肺损伤。此外，ACE2也在包括心脏、肾脏、血管和肠道在内的多个肺外组织中表达，而这可能是在新冠病毒感染引起的肺炎患者中观察到多器官功能障碍的原因。SARS
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2通过表达ACE2的呼吸道上皮细胞的腔面的感染，因此，如果ACE2的表达受到抑制，则可以预防所有新冠病毒变异株的感染和大规模流行。
[0014]本专利技术经实验验证发现，中药单体西瑞香素及其体内代谢产物伞形酮及伞形酮结构类似物瑞香素均可以强烈抑制ACE2的表达，ACE2的表达量能够下调70％。而且因为伞形酮是临床用双香豆素抗凝剂主要代谢产物，瑞香素是中国药监局已经许可的常用口服治疗药物，因此这两种药物在临床使用不存在任何障碍；伞形酮及瑞香素均强烈下调PC9细胞系ACE2 mRNA及蛋白量。并且细胞表面染色也明确PC9细胞系膜表面ACE2表达明显下调；SARS
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2假病毒感染实验也证实伞形酮及瑞香素处理的PC9细胞系膜表面ACE2表达下调会阻碍SARS
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2感染。
附图说明
[0015]图1为肺癌细胞系Calu
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1、PC9、H1650、H1299、H460、H226、H3122及结直肠癌细胞系hct15的ACE2表达情况，相同细胞量抽提RNA，qRT
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PCR实验ACE2循环数比较，以内参GAPDH及Actin标准化；
[0016]图2为西瑞香素、伞形酮、瑞香素、4甲基伞形酮的分子结构示意图；
[0017]图3为西瑞香素、伞形酮、瑞香素、4甲基伞形酮、DMSO、熊去氧胆酸对ACE2表达的影响图，GAPDH作为内参，N＝3，方差分析及t检验，*P＜0.05，***，P＜0.001；
[0018]图4为蛋白印迹鉴定西瑞香素和瑞香素对ACE2表达影响，(A)蛋白印迹检测ACE2表达；(B)Image J图像分析统计蛋白印迹条带，以GAPDH为参考，与DMSO处理组标化用GraphPad Prism统计软件作图分析，N＝3，方差分析及t检验，***，P＜0.001；
[0019]图5为ACE2细胞表面受体染色鉴定瑞香素对细胞表面ACE2表达影响；
[0020]图6为瑞香素处理抑制SARS
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2S蛋白假病毒对PC9细胞的感染结果。
具体实施方式
[0021]下面结合实施例对本专利技术进行详细说明。
[0022]实施例1
[0023]实验细胞的筛选及各细胞的ACE2表达情况
[0024]将购自中科院生化细胞所细胞库肺癌细胞系Calu
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1、PC9、H1650、H1299、H460、H226、H3122及结直肠癌细胞系严格按照中科院生化细胞所细胞库提供的说明书上的培养方法和培养条件培养。
[0025]其中，PC9细胞培养条件：使用RPMI
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1640 10％FBS培养基，在含5％二氧化碳，37度恒温细胞培养箱中培养。传代方法：0.125％胰酶消化打散，1:2传代，3天可长满。
[0026]RT
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qPCR实验：使用TRIzol试剂(Thermo Fisher Scientific)从上述实验细胞中提取总RNA。使用qScript cDNA Synthesis Kit(Quantabio)用随机引物合成互补DNA(cDNA)。在LightCycler 480(Roche)上使用Perfecta SYBR G本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.香豆素类化合物在制备预防新冠病毒感染引起的肺炎药物中的应用，其特征在于，所述香豆素类化合物为西瑞香素、伞形酮或瑞香素。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，西瑞香素、伞形...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晓辉，
申请(专利权)人：皖南医学院，
类型：发明
国别省市：