一种用于鱼类缓解黄曲霉毒素B1的解毒剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于鱼类缓解黄曲霉毒素B1的解毒剂及其应用，上述解毒剂的活性成分包括4

【技术实现步骤摘要】
一种用于鱼类缓解黄曲霉毒素B1的解毒剂及其应用


[0001]本专利技术涉及水产养殖
，具体涉及一种用于鱼类缓解黄曲霉毒素B1的解毒剂及其应用。

技术介绍

[0002]近年来随着我国水产养殖量的增加，饲料价格的上涨，植物蛋白源不断取代动物蛋白源。但随之而来的问题是霉菌毒素对饲料原料的污染，尤其是黄曲霉毒素B1(AFB1)，是一种毒性极强，污染率极高的霉菌毒素。鱼类采食含有霉菌毒素的饲料会抑制生长性能。而肌肉作为鱼类重要的可食用部分，其生长发育不容忽视。采用体外培养技术分离原代成肌细胞探究AFB1对鱼类肌肉发育的抑制作用并寻找有效的解毒剂至关重要。
[0003]目前有效的解毒办法是通过控制饲料发霉，吸附法等，但是这些方法不能得到很好的控制。4
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甲基七叶亭(4
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ME)是一种来源于秦皮的成分—七叶亭经代谢产生。目前现有的研究结果表明其具有抗氧化、抗炎等作用，作为药物在医学上使用，但作为饲料添加剂和解毒剂目前未见报道。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种用于鱼类缓解黄曲霉毒素B1的解毒剂及其应用，以解决现有用于鱼类黄曲霉毒素B1解毒方法效果差的问题。
[0005]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0006]4‑
甲基七叶亭在制备用于鱼类缓解黄曲霉毒素B1的解毒剂中的应用。
[0007]一种用于鱼类缓解黄曲霉毒素B1的解毒剂，包括上述的4
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甲基七叶亭。/>[0008]一种用于鱼类缓解黄曲霉毒素B1的饲料，包括上述的解毒剂。
[0009]上述的解毒剂在制备用于鱼类缓解黄曲霉毒素B1的饲料中的应用。
[0010]本专利技术具有以下有益效果：
[0011](1)4
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甲基七叶亭具有有效的抗氧化、抗炎、抗凋亡的作用。本专利技术将4
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甲基七叶亭用于制备鱼类缓解黄曲霉毒素B1的解毒剂，本专利技术以草鱼原代成肌细胞为实验对象，经过实验表明，4
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甲基七叶亭可以有效的缓解黄曲霉毒素B1对细胞的毒性，有效缓解黄曲霉毒素B1对细胞的迁移率的抑制，有效缓解黄曲霉毒素B1对细胞诱导的ROS水平升高，有效缓解黄曲霉毒素B1对细胞带来的氧化损伤，有效缓解黄曲霉毒素B1对细胞带来的负面作用。
[0012](2)本专利技术使用简单方便，无副作用，可有效改善鱼类细胞活力，细胞迁移以及细胞的氧化应激情况，显著缓解了鱼类细胞的中毒症状，为鱼类肌肉细胞对黄曲霉毒素B1中毒提供了新的解毒剂。
附图说明
[0013]图1为实施例1中细胞形态显微镜实验结果；
[0014]图2为实施例1中细胞活力实验酶标仪测试结果；
[0015]图3为实施例2中迁移率实验结果，其中，上图为显微镜拍照结果，下图为Image J软件统计分析结果；
[0016]图4为实施例3中细胞活性氧实验结果，其中，上方四幅图为流式细胞仪测试结果，下方图为FlowJo软件分析结果；
[0017]图5为实施例4中抗氧化实验结果；
[0018]图6为实施例5中MyoD mRNA表达实验qPCR检测结果；
[0019]图7为实施例5中Western blot检测细胞中MyoD的蛋白表达实验结果。
具体实施方式
[0020]以下结合附图对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0021]实施例1：细胞形态及细胞活力实验
[0022]一、细胞形态实验
[0023](1)完全培养基组成：M199基础培养基+10％胎牛血清+1％三抗+20ng/ml表皮细胞生长因子+10ng/ml人成纤维细胞生长因子；
[0024](2)在完全培养基中分别加入15μmol/L AFB1，0.5μmol/L 4
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ME，15μmol/L AFB1+0.5μmol/L 4
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ME，混合均匀；
[0025](3)将生长70％左右的草鱼原代成肌细胞弃去原来的培养基，分为四组，分别更换为完全培养基，含有15μmol/L AFB1，0.5μmol/L 4
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ME，15μmol/L AFB1+0.5μmol/L 4
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ME的完全培养基，处理24h后，通过显微镜观察处理后的草鱼原代成肌细胞；
[0026](4)实验结果如图1，结果表明，AFB1诱导细胞死亡较多，而在培养基中加入解毒剂(4
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ME)后，细胞死亡明显降低。
[0027]二、细胞活力实验
[0028](1)将草鱼原代成肌细胞接种至96孔板中，于28℃培养24h后分别更换为100μL的完全培养基，含有15μmol/L AFB1的完全培养基，含有0.5μmol/L 4
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ME的完全培养基，含有15μmol/L AFB1+0.5μmol/L 4
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ME的完全培养基，处理24h，然后加入10μL CCK8，在28℃培养箱中孵育2h，最后用酶标仪在490nm波长下读数检测其活力；
[0029](2)实验结果如图2所示，检测结果发现，AFB1降低草鱼原代成肌细胞活力，而解毒剂(4
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ME)可以有效缓解AFB1对草鱼原代成肌细胞的毒性。
[0030]实施例2：细胞迁移率实验
[0031](1)将草鱼原代成肌细胞接种至6孔板中，待细胞长至70
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80％时，用200μL的移液枪头在6孔板底部轻轻划线，然后用PBS缓冲液清洗掉死细胞和划线掉落的细胞，然后在显微镜下拍照；
[0032](2)向步骤(1)中处理完毕的孔板中分别加入2mL的完全培养基，含有15μmol/L AFB1的完全培养基，含有0.5μmol/L 4
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ME的完全培养基，含有15μmol/L AFB1+0.5μmol/L 4
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ME的完全培养基，处理24h，在显微镜下拍照观察，用Image J软件统计分析细胞的迁移率。
[0033](3)实验结果如图3所述，结果表明AFB1明显抑制了草鱼原代成肌细胞的迁移率，
而解毒剂(4
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ME)可以有效缓解细胞的迁移率。
[0034]实施例3：细胞活性氧实验
[0035](1)将草鱼原代成肌细胞接种至6孔板中，待细胞长至70
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80％时，分别更换为100μL的完全培养基，含有15μmol/L AFB1的完全培养基，含有0.5μmol/L 4
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ME的完全培养基，含有15μmol/L AFB1+0.5μmol/L 4
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ME的完全培养基，处理24小时后用胰蛋白酶消化，收集细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.4
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甲基七叶亭在制备用于鱼类缓解黄曲霉毒素B1的解毒剂中的应用。2.一种用于鱼类缓解黄曲霉毒素B1的解毒剂，其特征在于，包括权利要求1所述的4
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【专利技术属性】
技术研发人员：周小秋，何香凝，冯琳，姜维丹，吴培，金小琬，刘杨，任红梅，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：