一种用于鉴定晚熟脐橙制造技术

本发明专利技术公开了一种用于鉴定晚熟脐橙种质

【技术实现步骤摘要】
一种用于鉴定晚熟脐橙WS22的分子标记及其应用


[0001]本专利技术涉及一种用于鉴定晚熟脐橙WS22的分子标记及其应用，属于植物育种


技术介绍

[0002]柑橘在我国水果产业中占据绝对优势地位，是我国南方丘陵山地地区经济的重要支柱。柑橘成熟期过于集中是柑橘产业发展待解决的重要问题。据统计，柑橘的早、中、晚熟品种的中熟品种占比较大，集中上市在短期内造成柑橘鲜销市场饱和，冲击市场价格，严重影响经济效益。
[0003]选育早、晚熟柑橘是解决这一问题的重要途径。其中脐橙种质WS22是从主栽脐橙品种
‘
伦晚
’
中芽变选育的一个晚熟脐橙种质，晚熟脐橙WS22与伦晚在果实形态上与
‘
伦晚
’
存在显著差异，其成熟后果实颜色不转为橙红色，而转为橙黄色。晚熟脐橙WS22果实晚熟性明显，达到相同外观色泽和内在品质水平的时间比赣南地区主栽脐橙品种
‘
纽荷尔
’
晚熟110天以上，具有良好的市场应用价值。但是由于柑橘童期较长，在童期通过形态鉴定晚熟脐橙WS22品种存在难度。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种用于鉴定晚熟脐橙WS22的分子标记及其应用，方便对晚熟脐橙WS22苗木进行鉴定。
[0005]为达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0006]第一方面，本专利技术提供一种用于鉴定晚熟脐橙WS22的分子标记，分子标记命名为CsChr4
‑
WS22，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，位于脐橙的Chr4染色体上，所述Chr4染色体第5095156
‑
6757953序列缺失，缺失的断点位置插入DNA转座子。
[0007]结合第一方面，进一步的，用于扩增所述分子标记CsChr4
‑
WS22的引物对为CsChr4
‑
WS22
‑
F及CsChr4
‑
WS22
‑
R；所述引物对其中一条引物位于脐橙Chr4染色体上，另一条引物位于插入的DNA转座子上
[0008]进一步的，所述CsChr4
‑
WS22
‑
F的序列如SEQ ID NO.2所示，所述CsChr4
‑
WS22
‑
R的序列如SEQ ID NO.3所示。
[0009]第二方面，本专利技术提供一种试剂盒，包括上述任一所述的分子标记CsChr4
‑
WS22扩增使用的引物对。
[0010]第三方面，本专利技术提供一种用于鉴定晚熟脐橙WS22的方法，包括检测分子标记CsChr4
‑
WS22的引物对扩增脐橙基因组DNA的步骤。
[0011]结合第三方面，进一步的，所述方法包括以下步骤：
[0012]从脐橙品中提取基因组DNA；
[0013]使用分子标记CsChr4
‑
WS22的引物对分别对提取的基因组DNA进行PCR扩增，得到扩增产物；
[0014]对扩增产物分别进行电泳，获得电泳胶图；
[0015]根据电泳胶图带型，筛选出目的脐橙。
[0016]进一步的，上述任一所述分子标记，或所述方法，或试剂盒应用在选育晚熟脐橙WS22种质。
[0017]与现有技术相比，本专利技术所达到的有益效果：
[0018]本专利技术提供了一个位于晚熟脐橙WS22的Chr4染色体上的染色体片段位点，并基于该位点开发了晚熟脐橙WS22检测的显性分子标记CsChr4
‑
WS22，用于鉴定脐橙苗木或其他繁殖材料是否为晚熟脐橙WS22，效果显著、快速；
[0019]还提供了晚熟脐橙WS22检测用分子标记CsChr4
‑
WS22的引物对，方便用于晚熟脐橙WS22苗木快速鉴定。
附图说明
[0020]图1是本专利技术实施例提供的晚熟脐橙WS22的Chr4染色体序列与
‘
纽荷尔
’
脐橙Chr4染色体序列差异示意图；
[0021]图2是本专利技术实施例提供的分子标记CsChr4
‑
WS22检测晚熟脐橙WS22与伦晚脐橙的凝胶电泳图；
[0022]图3是本专利技术实施例提供的分子标记CsChr4
‑
WS22检测晚熟脐橙WS22与赣南地区其他主栽脐橙品种的凝胶电泳图。
具体实施方式
[0023]下面结合附图对本专利技术作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。
[0024]本专利技术提供了一个位于晚熟脐橙WS22的Chr4染色体上与其芽变来源
‘
纽荷尔
’
脐橙的差异位点，以及提供了晚熟脐橙WS22检测用分子标记CsChr4
‑
WS22及其引物对。
[0025]本专利技术采用的技术方案为：晚熟脐橙WS22与其芽变来源
‘
伦晚
’
脐橙的差异位点位于Chr4染色体上，参考基因组序列(甜橙Chr4染色体序列)见NCBI数据库(GenBank:CM030743.1)。在晚熟脐橙WS22的一条Chr4染色体序列5095156
‑
6757953缺失，在缺失的断点位置插入一条DNA转座子。基于该染色体结构变异，开发了与该差异位点紧密连锁的分子标记CsChr4
‑
WS22，分子标记CsChr4
‑
WS22位于Chr4染色体上，序列如SEQ ID NO.1所示。
[0026]本专利技术设计了晚熟脐橙WS22鉴定分子标记CsChr4
‑
WS22对应的引物对，CsChr4
‑
WS22的上游引物序列为CsChr4
‑
WS22
‑
F，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示；下游引物序列为CsChr4
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WS22
‑
R，其核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示。
[0027]利用本专利技术分子标记或引物对晚熟脐橙WS22检测的方法，包括：使用分子标记CsChr4
‑
WS22的引物对扩增脐橙基因组DNA，扩增产物在1％琼脂糖凝胶电泳后，如果获得晚熟脐橙WS22中变异对应的扩增片段，则表明为晚熟脐橙WS22种质。如果未获得晚熟脐橙WS22中变异对应的扩增片段，则表明不存在晚熟脐橙WS22所包含的特异性变异位点，预测该苗木不是晚熟脐橙WS22。
[0028]具体可实施的，本专利技术晚熟脐橙WS22检测的分子标记CsChr4
‑
WS22通过下列筛选步骤：
[0029](1)在脐橙多年连续的芽变选种过程中，在果园发现了一株晚熟芽变，通过多年选育，获得晚熟脐橙种质WS22。
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于鉴定晚熟脐橙WS22的分子标记，其特征在于，分子标记命名为CsChr4
‑
WS22，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，位于脐橙Chr4染色体上，所述Chr4染色体第5095156
‑
6757953序列缺失，缺失的断点位置插入DNA转座子。2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，用于扩增所述分子标记CsChr4
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WS22的引物对为CsChr4
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WS22
‑
F及CsChr4
‑
WS22
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R；所述引物对其中一条引物位于脐橙Chr4染色体上，另一条引物位于插入的DNA转座子上。3.根据权利要求2所述的分子标记，其特征在于，所述CsChr4
‑
WS22
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F的序列如SEQ ID NO.2所示，所述CsChr4
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈健美，林怡，万书贝，袁壬生，陈琼，
申请(专利权)人：赣南师范大学，
类型：发明
国别省市：