一种检测新冠病毒抗原的金纳米探针及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种检测新冠病毒抗原的金纳米探针及其制备方法和应用。本发明专利技术提供了一种检测新冠病毒抗原的金纳米探针的制备方法，不需要严控具体温度，制备方法简单易操作，对实验条件要求不高。制备的金纳米花粒径有55～75nm，具有高比表面积和高消光系数，形成更高的对比度。所述金纳米花与特异识别新型冠状病毒N抗原的单克隆抗体通过静电吸附形成金纳米探针，进一步提升了检测试纸的灵敏度，有效检测稀释128000倍后的新冠假病毒样品(巴西株，约7.8125TCID

【技术实现步骤摘要】
一种检测新冠病毒抗原的金纳米探针及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体地，涉及一种检测新冠病毒抗原的金纳米探针及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]在面对传播迅速的新型冠状病毒时，胶体金检测法有其应用价值，其突出优点是检测迅速、使用方便，但也有灵敏度不足的缺点，在检测病毒浓度低的样品时难以给出阳性判读结果。因此，提高检测灵敏度是胶体金免疫检测技术的一个提升和突破的重要方向。
[0003]在胶体金免疫检测技术中，可以通过筛选更高亲和性的抗体，调节更优的生产流程，或是利用显色试剂达到增敏效果。通过筛选抗体可以提高检测灵敏度，但投入成本和时间较大，所获得的抗体应用面窄。而对工艺流程的优化往往效果有限，并且所获得的流程方法同样不具有广泛适用性。辅助增敏的显色试剂可能需要低温避光的保存条件，有些成分具有毒性，还有增加的成本以及对胶体金额外修饰带来的繁琐工艺。
[0004]目前也有利用金纳米花检测新冠的胶体金试纸条。该试纸条存在以下缺点：(1)制备金纳米花需要严格控制温度，对实验条件要求高；(2)所用的胶体金标抗体，还需要偶合链霉亲和素和生物素，提高对抗体的亲和性，金标抗体最后还需要经过透析、过柱纯化，制备方法复杂繁琐；(3)对硝酸纤维素膜的材料要求高，需要将纳米纤维素凝胶预涂在检测线附近，进一步放大检测信号。(4)灵敏度低，最低检测限为2.0
×
102TCID
50
/mL，不能分辨更低浓度的新冠病毒样品，难以满足市场需求。
专利技术内容
[0005]本专利技术的目的是克服现有技术的上述不足，提供一种检测新冠病毒抗原的金纳米探针及其制备方法和应用。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一种检测新冠病毒抗原的金纳米探针的制备方法。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供所述制备方法制备得到的金纳米探针。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供所述金纳米探针在制备检测新冠病毒抗原的产品中的应用。
[0009]本专利技术的第四个目的是提供一种检测新冠病毒抗原的试纸条。
[0010]本专利技术的第五个目的是提供所述的试纸条在制备检测新冠病毒抗原的试剂盒中的应用。
[0011]本专利技术的第六个目的是提供一种检测新冠病毒抗原的试剂盒。
[0012]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：
[0013]一种检测新冠病毒抗原的金纳米探针的制备方法，包括以下步骤：
[0014]S1：将标准大气压下沸腾的HAuCl4溶液与柠檬酸钠溶液混合，充分反应，至变红色，得金纳米球；
[0015]S2：将步骤S1的金纳米球、HAuCl4溶液、柠檬酸钠和氢醌混合，充分反应，得金纳米
花；
[0016]S3：将新冠病毒单克隆抗体与步骤S2的金纳米花混合，充分反应，得金纳米探针。
[0017]优选地，步骤S1中，HAuCl4与柠檬酸钠的质量比为10：7～50。
[0018]更优选地，步骤S1中，HAuCl4与柠檬酸钠的质量比为10：27。
[0019]优选地，步骤S2中，金纳米球与HAuCl4的质量比为1：129～259。
[0020]更优选地，步骤S2中，金纳米球与HAuCl4的质量比为1：129。
[0021]优选地，步骤S3中，所述新冠病毒单克隆抗体为新冠病毒N蛋白单克隆抗体。
[0022]更优选地，所述新冠病毒N蛋白单克隆抗体为市售的SC2N
‑
118抗体。
[0023]更优选地，将步骤S2的金纳米花调pH至8.5～10.0，与SC2N
‑
118抗体混合，充分反应，酪蛋白封闭后，固液分离，即得金纳米探针。
[0024]更优选地，金纳米花与SC2N
‑
118抗体的质量比为100：11～46。
[0025]更优选地，金纳米花与SC2N
‑
118抗体的质量比为100：23。
[0026]更优选地，反应时间为13～17min。
[0027]更优选地，反应时间为15min。
[0028]更优选地，固液分离为，0～4℃，5500～6500g条件下离心13～17min。
[0029]更优选地，固液分离为，4℃，6000g条件下离心15min。
[0030]所述制备方法制备得到的金纳米探针。
[0031]所述金纳米探针在制备检测新冠病毒抗原的产品中的应用。
[0032]一种检测新冠病毒抗原的试纸条，所述试纸条的结合垫包被有所述的金纳米探针。
[0033]优选地，所述金纳米探针的包被浓度为0.76～3.04mg/mL。
[0034]更优选地，所述金纳米探针的包被浓度为3.04mg/mL。
[0035]更优选地，用复溶液将所述金纳米探针复溶后，再包被在所述试纸条中，所述复溶液为含0.9～1.1％(w/v)BSA，2.9～3.1％(w/v)蔗糖和0.04～0.06％(w/v)叠氮化钠的浓度为10mM，pH为7.4的硼酸缓冲液。
[0036]更优选地，所述复溶液为含1％(w/v)BSA，3％(w/v)蔗糖和0.05％(w/v)叠氮化钠的浓度为10mM，pH为7.4的硼酸缓冲液。
[0037]优选地，所述试纸条的检测区包被有新冠病毒单克隆抗体。
[0038]更优选地，所述新冠病毒单克隆抗体的包被量为1.4～1.6mg/mL.
[0039]更优选地，所述新冠病毒单克隆抗体的包被量为1.5mg/mL。
[0040]更优选地，所述新冠病毒单克隆抗体为新冠病毒N蛋白单克隆抗体。
[0041]更优选地，所述新冠病毒单克隆抗体为市售的SC2N
‑
113抗体。
[0042]优选地，所述试纸条的质控区包被有羊抗兔多克隆抗体。
[0043]更优选地，所述羊抗兔多克隆抗体的包被量为0.9～1.1mg/mL。
[0044]更优选地，所述羊抗兔多克隆抗体的包被量为1mg/mL。
[0045]优选地，所述试纸条的样品垫经样品处理液浸泡得到，所述样品处理液由5.9～6.1％(w/v)蔗糖、1.9～2.1％(w/v)海藻糖、0.09～0.11％(v/v)吐温
‑
20和0.4～0.6％(w/v)BSA的水溶液组成。
[0046]更优选地，所述样品处理液由6％(w/v)蔗糖、2％(w/v)海藻糖、0.1％(v/v)吐温
‑
20和0.5％(w/v)BSA的水溶液组成。
[0047]所述的试纸条在制备检测新冠病毒抗原的试剂盒中的应用。
[0048]一种检测新冠病毒抗原的试剂盒，所述试剂盒包括所述的试纸条。
[0049]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0050](1)本专利技术使用的金纳米花，不需要严控具体温度，制备方法简单易操作。对实验条件要求不高，
[0051本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测新冠病毒抗原的金纳米探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将标准大气压下沸腾的HAuCl4溶液与柠檬酸钠溶液混合，充分反应，至变红色，得金纳米球；S2：将步骤S1的金纳米球、HAuCl4溶液、柠檬酸钠和氢醌混合，充分反应，得金纳米花；S3：将新冠病毒单克隆抗体与步骤S2的金纳米花混合，充分反应，得金纳米探针。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中，HAuCl4与柠檬酸钠的质量比为10：7～50。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，金纳米球与HAuCl4的质量比为1：129～259。4.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，张月明，胡飞驰，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：