一种肝素结合蛋白质控品及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种肝素结合蛋白质控品及其制备方法，所述肝素结合蛋白质控品包括HBP抗原和质控品稀释液，所述质控品稀释液包含10～100mM的缓冲液，0.5～5w/v％的保护剂，0.05～0.1w/v％的防腐剂和0.2～1.0w/v％的硫酸铵；该质控品以缓冲液为基质，在基质中加入了保护剂、防腐剂和硫酸铵，再加入HBP抗原即得不同水平的质控品溶液。本发明专利技术提供的质控品无需冻干，具有工艺简单成本低、准确度高、均匀性良好、操作简便等优点，且质控品稳定性不易受环境温度影响，开瓶后2～8℃能保存90天，极大地提高了使用率。提高了使用率。

【技术实现步骤摘要】
一种肝素结合蛋白质控品及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物制品领域，特别涉及一种肝素结合蛋白质控品及其制备方法。

技术介绍

[0002]炎症是指机体被细菌或病毒等外界刺激感染时产生的一种防御性反应，或由于自身免疫缺陷等因素导致的非感染性炎症反应。炎症标志物是指在机体发生感染、创伤或其它刺激时产生的一系列敏感物质，且产生后一段时间内在体液中稳定存在，检测不受抗菌药物、抑制剂等影响，因而作为检测炎症的指标而受到广泛关注。
[0003]肝素结合蛋白(Heparin
‑
Binding Protein,HBP)也被称为天青杀素(Azurocidin)或者阳离子抗菌蛋白(CAP37)，是一种具有杀菌功能和趋化特性的多功能蛋白，主要存在于中性粒细胞的分泌颗粒和嗜天青颗粒中。肝素结合蛋白是细菌等炎症感染最早升高的标志物，当发生感染时，细菌侵入血管内，刺激中性粒细胞释放HBP，血浆中HBP含量升高。传统的炎症标志物有降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)等，单一应用于临床时均存在一定局限性，在实际的临床检测中一般需要结合多个指标、多次检测结果才能对炎症感染严重程度作出准确判断。而肝素结合蛋白的感染变化出现早，且具更高的灵敏度和特异性，对炎症感染性疾病的早期预警、预测评估及疗效观察均具有重要的临床价值。
[0004]当前市面质控品种类较少，多数厂家生产的试剂盒中不含有质控品，而临床实验室自己配制质控品又受到诸多因素的影响，所以在临床中质量控制现状不容乐观，亟待改善。现有部分多项复合质控品，包含检测项目较多，成本较高，容易造成浪费，且多为冻干产品，检测时操作较复杂。因此，临床上急需一种商品化稳定性好、操作简便的单项炎症标志物质控品，用于实验室的室内质量控制和室间质量评价。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术旨在提供一种肝素结合蛋白(HBP)质控品及其制备方法，该质控品制备工艺简单成本低，且具有优异的稳定性，能够长时间保存，瓶间差异小，准确度高，能够满足临床使用需求。
[0006]本专利技术的技术方案具体如下：
[0007]本专利技术第一方面提供了一种肝素结合蛋白质控品，其包括HBP抗原和质控品稀释液，其中质控品稀释液包含10～100mM的缓冲液，0.5～5w/v％的保护剂，0.05～0.1w/v％的防腐剂和0.2％～1.0w/v％的硫酸铵。
[0008]硫酸铵在现有技术中较多地被用于蛋白质纯化方面，本专利技术发现将其用于肝素结合蛋白质控品稀释液中，能够起到良好的保护肝素结合蛋白活性的作用，推测其原因在于，NH
4+
能通过静电作用与蛋白弯曲肽链结合，使蛋白质结构更紧密，从而使蛋白性能上更稳定。但是盐离子浓度过高会争夺蛋白胶粒的水分，破坏蛋白水化层，导致蛋白质聚集析出，故合适的硫酸铵浓度也是保证质控品稳定性的关键因素之一。另外，硫酸铵是一种惰性物质，一般不会与其他活性物质发生反应，能够最大限度的发挥保护作用，从而保证质控品的
监测效果。
[0009]可以理解的是，本专利技术中“w/v％”的含义为组分的体积质量比，如质控品稀释液中包含0.5～5w/v％的保护剂是指质控品稀释液1L体积中含有5～50g的保护剂。
[0010]进一步地，在上述肝素结合蛋白质控品中，缓冲液为柠檬酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液；更进一步地，缓冲液的浓度优选为10～100mM，且pH优选为4.0～5.5；其中，缓冲液为pH5.0、50mmol/L柠檬酸缓冲液时为最佳。
[0011]肝素结合蛋白属于丝氨酸蛋白酶家族，大多数为碱性蛋白酶，一般在pH 9～10具最佳催化活性，但在酸性环境下更为稳定。本专利技术中使用柠檬酸缓冲液或磷酸盐缓冲液为其创造一个pH 4.0～5.5酸性环境，能最大程度地保证其稳定性，从而延长产品使用效期。
[0012]进一步地，在上述肝素结合蛋白质控品中，保护剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白、明胶、丙氨酸和组氨酸中的一种或多种。
[0013]进一步地，在上述肝素结合蛋白质控品中，防腐剂为ProClin300、BND和硫酸庆大霉素中的一种或多种；更进一步地，防腐剂优选为ProClin300和BND的组合。
[0014]进一步地，在上述肝素结合蛋白质控品中，包括高水平质控品溶液和低水平质控品溶液；在高水平质控品溶液中，HBP抗原的浓度为60～140ng/mL；在低水平质控品溶液中，HBP抗原的浓度为12～28ng/mL。
[0015]本专利技术第二方面提供了上述肝素结合蛋白质控品在制备肝素结合蛋白检测试剂盒中的应用。
[0016]本专利技术第三方面提供了上述肝素结合蛋白质控品的制备方法，具体为：以缓冲液为基质液，按比例向基质液中加入保护剂、防腐剂和硫酸铵，混合均匀后过滤，得到质控品稀释液；再将HBP抗原加入所述质控品稀释液中，定量后分装保存。
[0017]进一步地，在上述制备方法中，过滤可采用0.22μm的滤膜过滤。
[0018]进一步地，在上述制备方法中，可使用全自动化学发光免疫分析仪对质控品溶液中HBP抗原含量进行检测，待其浓度检测值在给定的参考范围内时进行分装。
[0019]进一步地，在上述制备方法中，质控品的保存温度优选为2～8℃。
[0020]相比于现有技术，本专利技术至少具有如下优点：
[0021](1)本专利技术提供的肝素结合蛋白质控品的生产过程不涉及冻干，工艺简单且成本低；所得质控品为液态，使用时无需复溶，操作简便。
[0022](2)本专利技术提供的肝素结合蛋白质控品使用缓冲剂基质，并添加了适量保护剂、防腐剂和硫酸铵，原料易于获得且保护效果较好，肝素结合蛋白在此体系中稳定性极高。
[0023](3)本专利技术提供的肝素结合蛋白质控品的临床一致性和稳定性好，在37℃条件下放置21天对稳定性无影响，保证运输过程中环境温度变化不会对其稳定性产生影响，且开瓶后在2～8℃可保存90天，能极大地保证质控品的使用率，减少浪费，且瓶间变异小，增强了检测的准确度。
具体实施方式
[0024]为了更好地理解本专利技术，下面结合具体实施例进一步阐明本专利技术的内容。应当理解的是，此处所描述的具体实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。
[0025]若未特别指明，实施例均按照常规实验条件或按照制造厂商说明书建议的条件。
所用试剂和材料，若无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0026]实施例1
[0027]本例提供了一种肝素结合蛋白(HBP)质控品，其由HBP抗原和质控品稀释液组成，其中质控品稀释液包含50mM的柠檬酸缓冲液(pH为5.0)、0.07w/v％的BND、0.07v/v％的ProClin300、1.0w/v％的牛血清白蛋白以及0.5w/v％的硫酸铵。
[0028]在该质控品中，包括高、低两个浓度水平的质控品溶液，两个浓度水平的质控品溶液中所含的HBP抗原的最终含量分别预设为：
[0029]低水平的质控品溶液中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肝素结合蛋白质控品，其特征在于，包括HBP抗原和质控品稀释液，所述质控品稀释液包含10～100mM的缓冲液，0.5～5w/v％的保护剂，0.05％～0.1％w/v的防腐剂和0.2％～1.0w/v％的硫酸铵。2.根据权利要求1所述的肝素结合蛋白质控品，其特征在于，所述缓冲液为柠檬酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液。3.根据权利要求2所述的肝素结合蛋白质控品，其特征在于，所述缓冲液浓度为10～100mM，且pH为4.0～5.5。4.根据权利要求1所述的肝素结合蛋白质控品，其特征在于，所述保护剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白、明胶、丙氨酸和组氨酸中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的肝素结合蛋白质控品，其特征在于，所述防腐剂为ProClin300、BND和硫酸庆大霉素中的一种或多种...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宝玉，肖雨，徐凯，席再军，
申请(专利权)人：武汉明德生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：