小孢根霉HR3-26在牛肝菌多酚提取中的应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，公开了小孢根霉HR3

【技术实现步骤摘要】
小孢根霉HR3
‑
26在牛肝菌多酚提取中的应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，尤其涉及小孢根霉HR3
‑
26在牛肝菌多酚提取中的应用。

技术介绍

[0002]牛肝菌是牛肝菌科(Boletaceae)真菌的统称，该科共有35个属，超过787个种，其中除少数种的子实体有毒或味苦而不能食用外，大部分种的子实体肉质肥厚，菌盖厚实，颜色极似牛肝，烹饪熟透后，吃起来也有牛肝的口感和味道，因此而得名“牛肝菌”。我国常见的食用牛肝菌品种有美味牛肝菌(Boletus edulis，也称白牛肝菌)、橙香牛肝菌(Boletuscitrifragrans)、黄牛肝菌(Boletusauripes)、黑牛肝菌(Boletusnigricans)和红脚牛肝菌(Boletuserythropus)等。
[0003]牛肝菌味道鲜美，营养丰富，属于为“四大菌王”之一，世界各国人民都有食用牛肝菌的习惯。牛肝菌富含多糖、蛋白质、多酚、氨基酸、牛肝菌素、三萜、维生素、矿物质等物质，食用牛肝菌，对人体具有清热解烦、补虚提神等功效，可治疗腰腿疼痛、手足麻木等症状，还有抗流感病毒、防治感冒的作用。在中医方面，其具有消食和中、祛风寒、舒筋络之功效，主治食少腹胀、腰腿疼痛、手足麻木等。野生牛肝菌稀少，属于珍惜食品，近些年来，由于人工栽培技术逐渐成熟，市场上供应的牛肝菌增多，已成为人们餐桌上的普通菜肴。
[0004]天然多酚具有良好抗氧化、抗衰老、抗菌、降血压和预防心脑血管疾病等多种生物活性，牛肝菌中多酚含量较高，从牛肝菌中提取多酚并将其应用于食品领域具有广阔的前景。
[0005]目前，关于牛肝菌中提取多酚的研究报道不多。报道的研究中，多酚提取的方法主要是乙醇提取法。常规乙醇浸提法操作简单，但提取得率往往不高。在乙醇浸提法的基础上，辅以超声波处理，能促进多酚溶出，提取得率有一定程度的提高。超声辅助提取法设备要求低，不会显著增加提取成本，但对提取得率的提高效果不够显著。
[0006]近年来，酶解技术在天然活性物质的提取中有广泛应用，它具有条件温和，对活性成分结构破坏小，能显著提高产物提取得率等优点。酶解辅助提取方法中，使用最多的是纤维素酶，其次是果胶酶和蛋白酶，或者同时使用多种酶。植物或食用菌的细胞壁构成包括纤维素、半纤维素、木质素和果胶等物质，所以单一使用一种酶，对提高产物提取得率非常有限，许多研究同时使用多种酶(复合酶)，如果酶的使用量较大，无疑增加了提取成本。
[0007]自然界中的天然物质都是靠微生物分解腐烂，这些微生物在生长过程中可以产生多种分解植物或食(药)用菌组织的酶类，包括纤维素酶、半纤维素酶、木质素酶和果胶酶等。但依靠微生物作用，提高从牛肝菌中多酚物质的提取得率，尚未得到有效应用。

技术实现思路

[0008]现有方法从牛肝菌中多酚物质的提取得率低，为了解决该技术问题，本专利技术提供了小孢根霉HR3
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26在牛肝菌多酚提取中的应用。
[0009]本专利技术目的之一在于，通过提供一株新的微生物菌株—小孢根霉(Rhizopusmicrosporus)HR3
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26，以该菌株接种于牛肝菌中进行微生物发酵，使得牛肝菌中多糖的提取得率大大提高。
[0010]本专利技术另一目的在于，提供小孢根霉HR3
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26在牛肝菌多糖提取中应用的方法——控制好小孢根霉HR3
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26的生长程度，达到产酶水解牛肝菌的细胞壁，但又未分解可溶性多糖，从而促进牛肝菌多糖溶出，使得提取得率最终得以提高。
[0011]本专利技术的具体技术方案为：一方面，本专利技术提供了一株小孢根霉(Rhizopus microsporus)HR3
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26，其保藏编号为GDMCCNo:63394。
[0012]本专利技术从牛肝菌粉微生物富集物中分离到菌株HR3，经紫外线诱变后，筛选获得菌株HR3
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26，即小孢根霉(Rhizopus microsporus)HR3
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26，该菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号GDMCC No:63394，保藏日期2023年4月24日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。本专利技术通过提供一株新的微生物菌株—小孢根霉(Rhizopus microsporus)HR3
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26，以该菌株接种于牛肝菌中进行微生物发酵，使得牛肝菌中多酚的提取得率大大提高。
[0013]其中，所述小孢根霉HR3
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26的核糖体DNA内转录间隔区核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0014]另一方面，本专利技术提供了上述小孢根霉HR3
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26在牛肝菌多酚提取中的应用。
[0015]本专利技术提供一种新的微生物菌株小孢根霉HR3
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26，该菌株是针对能够水解牛肝菌细胞壁而有目的分离和筛选，并经过诱变获得。微生物在生长过程中可以产生多种分解植物或食(药)用菌组织的酶类，包括纤维素酶、半纤维素酶、木质素酶和果胶酶等。所以，在筛选得到在牛肝菌多酚提取中应用的优势菌株的前提下，如果用微生物直接发酵预处理牛肝菌，只要控制好生长程度，达到产酶水解牛肝菌的细胞壁，但又未分解可溶性多酚，从而促进牛肝菌多酚溶出，提取得率就能得以提高。
[0016]具体地，本专利技术还提供了所述应用的方法，包括以下步骤：(1)在牛肝菌粉中加入小孢根霉HR3
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26孢子液，进行发酵，得到牛肝菌发酵物；(2)向牛肝菌发酵物中加入去离子水，搅匀后于35～40℃保温2～3h，再加入无水乙醇，超声，过滤得到多酚提取液；(3)取多酚提取液减压蒸馏至无液体流出，然后用无水乙醇溶解，干燥后得到多酚提取物。
[0017]经过上述步骤(1)～(3)，能够显著提高牛肝菌超声水提时多酚的提取得率。步骤(1)中，小孢根霉HR3
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26在添加蔗糖的牛肝菌粉中适度生长，产生多种水解酶；之后，步骤(2)中，经发酵的牛肝菌粉加水保温，细胞壁中的纤维素等物质被水解，有助于结合态的牛肝菌多糖在乙醇超声时溶出，从而能够显著提高多酚的提取得率。具体而言：步骤(1)中，牛肝菌粉中接种小孢根霉HR3
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26孢子液后，在28～32℃下发酵60～72h，可以使小孢根霉HR3
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26生长刚好达到产酶适宜的程度。
[0018]步骤(2)中，向牛肝菌发酵物中加入去离子水后于35～40℃保温2～3h，可以使发酵达到恰好水解牛肝菌细胞壁中的纤维素等物质、但又未分解可溶性多酚的程度。
[0019]作为本专利技术上述技术方案的优选，步骤(1)中，所述小孢根霉HR3
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26孢子液的浓度
为1
×
107～2
×
107个/mL。
[0020]作为本专利技术上述技术方案的优选，以牛肝菌粉质量计，步骤(1)中，所述小孢根霉HR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.小孢根霉HR3
‑
26在牛肝菌多酚提取中的应用，其特征在于，所述小孢根霉HR3
‑
26保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期为2023年4月24日，保藏编号为GDMCC No: 63394。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：其核糖体DNA内转录间隔区核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述应用的方法包括以下步骤：（1）在牛肝菌粉中加入小孢根霉HR3
‑
26孢子液，进行发酵，得到牛肝菌发酵物；（2）向牛肝菌发酵物中加入去离子水，搅匀后于35～40℃保温2～3 h，再加入无水乙醇，超声，过滤得到多酚提取液；（3）取多酚提取液减压蒸馏至无液体流出，然后用无水乙醇溶解，干燥后得到多酚提取物。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：步骤（1）中，所述小孢根霉HR3
‑
26孢子液的浓度为1
×
107～2
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【专利技术属性】
技术研发人员：韩彦超，徐振豪，孙水成，柴宇铖，梅建凤，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：