一株深绿木霉T280及其筛选方法、应用技术

本发明专利技术属于微生物领域，具体涉及一株深绿木霉T280及其筛选方法、应用。本发明专利技术筛选的菌株，其保藏编号为CGMCC NO.40730，于2023年07月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明专利技术筛选得到的深绿木霉T280具有漆酶和过氧化物酶活性，具有耐高温特性，能够在50℃条件下高效降解木质素，从而使堆肥快速发酵技术更易实现。本发明专利技术提供的深绿木霉T280为丝状真菌，相比较常见的细菌类腐熟菌种，具有遗传和功能性状稳定的优势，其菌丝结构有助于菌体抵达秸秆等纤维组织内部，增加了降解酶系的可及性，使木质素快速解聚，从而实现腐熟效率的提高。实现腐熟效率的提高。实现腐熟效率的提高。

【技术实现步骤摘要】
一株深绿木霉T280及其筛选方法、应用


[0001]本专利技术属于微生物领域，具体涉及一株深绿木霉T280及其筛选方法、应用。

技术介绍

[0002]在现代农业产量不断提升过程中，我国每年产出逾10亿吨农作物秸秆，是阻碍农业绿色发展的主要面源污染物之一。虽然秸秆中包含丰富的有机质和矿物质营养，但由于其高度聚合的木质纤维素结构，造成自然腐解效率低，其中木质素与半纤维素交织包裹在纤维素外部，阻碍了降解微生物的可及性。
[0003]木质纤维素结构复杂，其降解需要多种微生物的协同互作，其中木质素的降解是秸秆腐熟过程中的限速因子。好氧堆肥技术是对秸秆无害化肥料化利用的主要应用技术，其发酵温度一般达45℃以上，但是受到耐高温木质素降解菌匮乏的制约，堆肥产业普遍面临腐熟周期长的问题。传统木质素降解以白腐菌等真菌为代表，存在预处理周期长、对高温环境适应性差等问题，而大部分耐高温的腐熟菌为细菌，对木质素降解作用很差。目前，深绿木霉及其菌剂主要应用于生物防治、植物促生等方面，将其用于高温条件下的木质素降解菌则鲜有报道。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一株深绿木霉T280，本专利技术提供的深绿木霉T280分离筛选自农业固体废弃物堆肥发酵物，筛选得到的菌株能够在高温条件下高效降解木质素。
[0005]本专利技术还提供了上述深绿木霉T280的筛选方法。
[0006]本专利技术的另一目的为提供了上述深绿木霉T280在高温条件下高效降解木质素中的应用。
[0007]本专利技术为了实现上述目的所采用的技术方案为：本专利技术提供了一株深绿木霉T280，其保藏编号为CGMCC NO.40730，于2023年07月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
[0008]上述深绿木霉T280的ITS基因序列（如SEQ ID NO.1所示）为：CGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACCATACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGGACCAACCAAACTCTTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGGTCGGCGTTGGGGACCTCGGGAGCCCCTAAGACGGGATCCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCAT本专利技术还提供了一种深绿木霉T280的筛选方法，包括以下步骤：
（1）将多地点广泛采集的农业固体废弃物堆肥发酵物进行梯度稀释至10
‑1～10
‑7倍，分别取每个梯度稀释液涂布玫瑰红钠琼脂培养基平板，恒温培养；（2）从每个梯度稀释的平板中挑取单菌落，通过形态学显微镜观察和内源转录间隔区比对，鉴定种属，得到优势菌株深绿木霉T280。
[0009]进一步的，步骤（1）中，所述梯度稀释采用含有0.3%吐温
‑
80的无菌水进行。
[0010]进一步的，步骤（1）中，所述恒温培养的条件为28℃下培养3d～14d。
[0011]本专利技术的另一目的为提供了上述深绿木霉T280在高温条件下降解木质素中的应用。
[0012]本专利技术的有益效果为：（1）本专利技术筛选得到的深绿木霉T280同时具有漆酶和过氧化物酶活性，具有耐高温特性，能够在50℃条件下高效降解木质素；避免了现有技术中多采用常温发酵菌，其在发酵过程中对发酵条件要求苛刻的问题，从而使堆肥快速发酵技术更易实现。
[0013]（2）本专利技术提供的深绿木霉T280为丝状真菌，相比较常见的细菌类腐熟菌种，具有遗传和功能性状稳定的优势，其菌丝结构有助于菌体抵达秸秆等纤维组织内部，增加了降解酶系的可及性，使木质素快速解聚，从而实现腐熟效率的提高。
[0014]保藏信息保藏时间：2023年07月11日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC NO.40730，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101分类命名：深绿木霉（Trichodermaatroviride）。
附图说明
[0015]图1为深绿木霉T280菌落状态图，其中，A为菌落正面图，B为菌落反面图；图2为深绿木霉T280在含不同底物或染料培养基内的显色或脱色反应；图3为木质素浓度测定的标准曲线。
具体实施方式
[0016]下面通过具体的实施例对本专利技术的技术方案作进一步的解释和说明。
[0017]实施例1菌株的分离鉴定本专利技术提供的深绿木霉T280分离筛选自农业固体废弃物堆肥发酵物，具体筛选方法为：将采集的发酵物样本用含有0.3%吐温
‑
80的无菌水梯度稀释至10
‑1～10
‑7倍，从每个梯度稀释液中分别取100 μL涂布玫瑰红钠琼脂培养基平板，在28℃恒温培养3天。从每个梯度稀释的平板中挑取不同形态单菌落转接至PDA在28℃培养7～14天，通过形态学显微镜观察和内源转录间隔区（internally transcribed spacer，ITS）比对，鉴定种属，其中编号为T280的菌株为分离得到的优势菌株，经鉴定为深绿木霉（Trichodermaatroviride）。
[0018]本专利技术深绿木霉T280在PDA上生长菌落边界清晰，中央有菌丝相对致密的圆盘状结构，菌落从白色逐渐变为深绿色，不产生扩散性色素。筛选得到的T280在28℃培养14天的
菌落状态见图1，图中，A为菌落正面图，B为菌落反面图。
[0019]T280的ITS基因序列为：CGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACCATACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGGACCAACCAAACTCTTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株深绿木霉T280，其特征在于，其保藏编号为CGMCC NO.40730，于2023年07月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。2.根据权利要求1所述的深绿木霉T280，其特征在于，所述深绿木霉T280的ITS基因序列为：CGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACCATACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGGACCAACCAAACTCTTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGGTCGGCGTTGGGGACCTCGGGAGCCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴晓青，李强，张新建，周方园，范素素，张广志，谢雪迎，赵晓燕，王加宁，
申请(专利权)人：山东省科学院生态研究所山东省科学院中日友好生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：