一种靶向乙肝表面抗原的T细胞受体工程化T细胞制造技术

本发明专利技术涉及一种靶向乙肝表面抗原的T细胞受体工程化T细胞，属于生物技术领域。本发明专利技术提供了一种T细胞受体工程化T细胞，其携带HBs

【技术实现步骤摘要】
chronic hepatitis B infection: current knowledge andclinical significance. CELL DEATH DIS 2015, 6(3): e1694.）。而慢性乙型肝炎病毒感染时，广泛存在乙型肝炎病毒特异性T细胞的失能、耗竭或功能失调，进而导致乙型肝炎病毒持续感染（参见文献：Jiang D, Chen C, Yan D, Zhang X, Liu X, Yan D, Cui D, Yang S. Exhausted phenotype of circulating CD8(+) T cell subsets in hepatitis B virus carriers. BMC IMMUNOL 2022, 23(1): 18.）。可见，恢复乙型肝炎病毒特异性T细胞对于持续有效的控制乙型肝炎病毒病毒复制，进而预防和/或治疗乙肝和乙型肝炎病毒相关肝癌至关重要。但是，目前尚未有基于T细胞抗原受体的能够持续有效的抑制乙型肝炎病毒复制的药物上市。因此，亟需找到基于乙型肝炎病毒特异性T细胞抗原受体的能够持续有效的治疗乙型肝炎病毒感染的药物。

技术实现思路

[0006]为解决上述问题，本专利技术提供了一种特异性识别HBsAg
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肽段（HBsAg
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肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示）的HLA
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A02限制性T细胞抗原受体（HBs
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TCR），所述T细胞抗原受体的α链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的CDR2和氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的CDR3，β链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的CDR2和氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的CDR3。
[0007]T细胞抗原受体是T细胞识别靶细胞表面特异性抗原的蛋白分子，由α链和β链（分别由TRA和TRB编码）或者γ链和δ链（分别由TRG和TRD编码）构成的异二聚体，主要是以α链和β链构成的异二聚体为主，α链和β链或者γ链和δ链之间由二硫键连接，α链由V区（可变区）、J区和C区3个基因片段重组的基因进行编码，β链由V区（可变区）、D区、J区和C区4个基因片段重组的基因进行编码。T细胞抗原受体α链和β链的V区（可变区）包含互补决定区（complement
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determiningregions, CDRs）和抗体骨架区（Framework region, FR），其中，CDRs的氨基酸序列决定了该抗体结合抗原的特异性，FR的主要作用是稳定CDRs的空间构型，以利于CDRs与抗原决定簇间的结合。
[0008]在本专利技术的一种实施方式中，所述T细胞抗原受体的α链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示的FR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示的FR3和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示的FR4，β链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示的FR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示的FR3和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示的FR4。
[0009]在本专利技术的一种实施方式中，所述T细胞抗原受体的α链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示的FR2和氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示的FR3和氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示的FR4，β链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示的FR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示的FR3和氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示的FR4。
[0010]在本专利技术的一种实施方式中，所述T细胞抗原受体的α链的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示，β链的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示。
[0011]本专利技术还提供了一种基因，所述基因编码上述HLA
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A02限制性T细胞抗原受体。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，编码所述T细胞抗原受体的α链的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示，编码所述T细胞抗原受体的β链的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示。
[0013]本专利技术还提供了一种重组质粒，所述重组质粒携带上述基因。
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，所述重组质粒的载体为慢病毒表达载体、逆转录病毒表达载体或腺病毒表达载体。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，所述重组质粒的载体为pCDH
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EF1α慢病毒表达载体。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，所述重组质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示。
[0017]本专利技术还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞转染有上述重组质粒；或者，所述宿主细胞的基因组整合有上述基因。
[0018]在本专利技术的一种实施方式中，所述宿主细胞共转染有上述重组质粒以及慢病毒包装质粒。
[0019]在本专利技术的一种实施方式中，所述宿主细胞为HEK
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293T细胞、Jurkat细胞、NK细胞或原代人T细胞。
[0020]本专利技术还提供了一种重组病毒，所述重组病毒的基因组携带上述基因。
[0021]在本专利技术的一种实施方式中，所述重组病毒以慢病毒为载体表达上述基因。
[0022]在本专利技术的一种实施方式中，所述重组病毒的制备方法包括：将共转染有上述重组质粒以及慢病毒包装质粒的宿主细胞进行培养，得到培养液；从培养液中分离得到上述重组病毒。
[0023]本专利技术还提供了一种靶向乙肝表面抗原的T细胞受体工程化T细胞（HBs
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TCR
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T细胞），所述T细胞受体工程化T细胞携带上述基因，或者，所述T细胞受体工程化T细胞携带上述T细胞抗原受体。
[0024]在本专利技术的一种实施方式中，所述T细胞受体工程化T细胞的制备方法包括：使用上述重组病毒感染T细胞，得到T细胞受体工程化T细胞。
[0025]本专利技术还提供了上述HLA
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A02限制性T细胞抗原受体或上述基因或上述重组质粒或上述宿主细胞或上述重组病毒或上述T细胞受体工程化T细胞在制备TCR药物，制备抑制乙型肝炎病毒复制的药物，制备预防和/或治疗乙肝的药物，或者，制备预防和/或治疗乙型肝炎病毒（HBV）相关肝癌的药物中的应用。
[0026]在本专利技术的一种实施方式中，所述TCR药物包括TCR
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T细胞、TCR
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NK细胞和/或可溶性TCR蛋白。
[0027]本专利技术技术方案，具有如下优点本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HLA
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A02限制性T细胞抗原受体，其特征在于，所述T细胞抗原受体的α链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的CDR2和氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的CDR3，β链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的CDR2和氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的CDR3。2.如权利要求1所述的HLA
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A02限制性T细胞抗原受体，其特征在于，所述T细胞抗原受体的α链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示的FR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示的FR3和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示的FR4，β链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示的FR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示的FR3和/或氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示的FR4。3.如权利要求1或2所述的HLA
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A02限制性T细胞抗原受体，其特征在于，所述T细胞抗原受体的α链的氨基酸序列如SEQ ID NO.16...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯金林，朱伟，吴砂，卢欣瑜，黄磊，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：