包含具有改善的TCRB组库多样性的人源化细胞免疫系统组分的基因修饰的小鼠技术方案

本文公开了非人动物(例如啮齿动物，例如小鼠或大鼠)，所述非人动物经基因工程改造以表达人源化T细胞辅助受体(例如，人源化CD4和/或CD8(例如，CD8α和/或CD8β))、包含由至少一个人T细胞受体(TCR)可变区基因区段编码的可变结构域的人或人源化TCR和/或结合所述人源化T细胞辅助受体的人或人源化主要组织相容性复合物(例如，分别为人或人源化MHC II(例如，MHC IIα链和/或MHC IIβ链)和/或MHC I(例如，MHC Iα)，以及任选地人或人源化β2微球蛋白)。还提供了表达它们的胚胎、组织和细胞。还提供了产生基因工程改造的动物的方法，所述基因工程改造的动物表达至少一种人源化T细胞辅助受体(例如，人源化CD4和/或CD8)、至少一种与所述人源化T细胞辅助受体缔合的人源化MHC(例如，分别为人源化MHC II和/或MHC I)和/或人源化TCR。还提供了使用所述基因工程改造的动物用于开发人类治疗剂的方法，所述基因工程改造的动物产生基本上人源化的T细胞免疫应答。的动物产生基本上人源化的T细胞免疫应答。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含具有改善的TCRB组库多样性的人源化细胞免疫系统组分的基因修饰的小鼠
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请根据35 U.S.C.
§
119(e)要求2021年3月31日提交的美国临时专利申请序列号63/168,774的优先权，该临时专利的公开内容通过引用整体并入。
[0003]序列表
[0004]序列表的正式副本作为ASCII格式的序列表经由EFS
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Web以电子方式提交，序列表的文件名为10948WO01_ST25.txt，创建于2022年3月29日且大小为59千字节，并与说明书同时提交。该ASCII格式的文件中所含的序列表是说明书的一部分并通过引用整体并入本文。


[0005]本专利技术涉及非人动物(例如啮齿动物，例如小鼠或大鼠)，所述非人动物能够产生基本上人(人源化)的T细胞介导的免疫应答并且能够表达(i)一种或多种人(人源化)T细胞辅助受体(例如，CD4和/或CD8(例如，CD8α和/或CD8β))，(ii)与所述一种或多种人(人源化)T细胞辅助受体缔合的一种或多种人(人源化)主要组织相容性复合物(例如，MHC II(例如，MHCα和/或MHC IIβ)和/或MHC I(例如，MHC Iα和/或β2微球蛋白))，和/或(iii)人(人源化)T细胞受体(TCR)(例如，TCRα和/或TCRβ)；本专利技术涉及从所述非人动物分离的胚胎、组织、细胞和/或核酸；产生所述非人动物的方法；和使用所述非人动物用于开发人类治疗剂的方法。

技术介绍
r/>[0006]在适应性免疫应答中，外来抗原被B淋巴细胞(例如免疫球蛋白)和T淋巴细胞(例如，T细胞受体，也称为TCR)上的受体分子识别。这些外来抗原被特化蛋白以肽片段的形式在细胞表面呈递，这些特化蛋白一般称为主要组织相容性复合物(MHC)分子并且在人类中特别地称为人白细胞抗原(HLA)。在T细胞介导的应答期间，MHC分子呈递的抗原被T细胞受体识别。然而，有效的免疫应答不仅仅需要T细胞受体识别MHC
‑
抗原复合物。还需要T细胞辅助受体分子(例如，CD4或CD8)与MHC的不变部分结合。
[0007]T细胞有几种类型，包括辅助性T细胞和细胞毒性T细胞。辅助性T细胞通常表达辅助受体CD4并识别与MHC II分子结合的抗原。CD4+T细胞激活免疫系统中的其他效应细胞，例如，激活表达MHC II的B细胞以产生抗体，激活表达MHC II的巨噬细胞以破坏病原体等。CD4和T细胞受体与相同的MHC II呈递的外来抗原的结合使得T细胞对该抗原显著更敏感。
[0008]相反，细胞毒性T细胞(CTL)通常表达辅助受体CD8并识别与MHC I分子结合的外来抗原。CTL经特化以杀伤任何带有被其自身膜结合的TCR识别的MHC I结合肽的细胞。当细胞展示源自通常不存在的细胞蛋白质(例如，病毒、肿瘤或其他非自身来源的细胞蛋白质)的肽时，此类肽被CTL识别，CTL被激活并杀伤展示该肽的细胞。与CD4类似，CD8的接合使CTL对MHC I呈递的抗原更敏感。
[0009]由于耐受机制，并非所有抗原都会引发T细胞激活。然而，在一些疾病(例如，癌症、
自身免疫疾病)中，源自自身蛋白的肽成为免疫系统细胞组分的靶标，这导致呈递此类肽的细胞的破坏。在识别临床上有意义的抗原(例如，与各种类型的癌症相关的抗原)和/或结合临床上有意义的抗原的TCR序列方面已经有了显著进展。然而，为了改进将在人T细胞中引发合适应答的临床上有意义的肽和/或能够结合临床上有意义的抗原的TCR的鉴定和选择(例如，用于癌症的过继免疫疗法、用于自身免疫的T细胞疫苗接种等)，仍然需要模拟人类免疫系统方面的体内和体外系统。因此，需要能够展示人类免疫系统组分，特别是T细胞免疫应答组分的生物系统(例如，基因修饰的非人动物和细胞)。

技术实现思路

[0010]如本文所公开的，包含基本上人源化的T细胞免疫系统的基因修饰的非人动物的胸腺具有与对照动物相似的胸腺细胞和CD3+T细胞绝对数目。另外，这些细胞显示出与对照动物相当的向单一阳性T细胞的发育，并且能够产生针对抗原(例如，病毒抗原)的稳健的人类细胞应答。非人动物的人类细胞应答通常包括表达人或人源化T细胞受体(TCR)可变结构域的活化非人T细胞，所述可变结构域识别由人白细胞抗原(HLA)胞外结构域形成的肽结合裂缝中呈递的抗原，所述肽结合裂缝可在非人抗原呈递细胞的表面上表达。在一些实施方案中，基本上人源化的T细胞免疫系统包含
[0011](A)非人T细胞，该非人T细胞表达
[0012](i)包含人T细胞辅助受体的一部分或整个胞外部分的T细胞辅助受体多肽，例如包含一个或多个人T细胞辅助受体胞外结构域的T细胞辅助受体多肽，使得T细胞辅助受体多肽能够缔合和/或缔合
[0013](a)人或人源化HLA分子的一个或多个胞外结构域(例如，作为T细胞辅助受体多肽的结合位点的第一人HLA胞外结构域和/或与第三人HLA胞外结构域形成肽结合裂缝的第二人HLA胞外结构域)，
[0014](b)人或人源化TCR可变结构域(例如，分别由至少一个人TCRα和/或TCRβ可变区基因区段编码的人或人源化TCRα可变结构域和/或人或人源化TCRβ可变结构域)的胞外结构域，和/或
[0015](c)人TCR恒定结构域的胞外结构域，以及
[0016](ii)至少包含人TCR可变结构域的T细胞受体(TCR)；并且任选地
[0017](B)在人HLA背景下呈递抗原的非人抗原呈递细胞，例如在其细胞表面表达至少一种MHC分子的非人抗原呈递细胞，该MHC分子包含由两个人HLA胞外结构域形成的肽结合裂缝，并且能够激活和/或激活非人T细胞。
[0018]在一个方面，非人T细胞和非人抗原呈递细胞发现于同一非人动物或分离自同一非人动物。
[0019]因此，本文提供了非人动物(例如啮齿动物，例如小鼠或大鼠)，这些非人动物经基因工程改造以表达：
[0020](A)人或人源化T细胞辅助受体(例如，人或人源化CD4和/或人或人源化CD8(例如，人或人源化CD8α和/或人或人源化CD8β))，
[0021](B)与人或人源化T细胞辅助受体缔合的人或人源化主要组织相容性复合物(例如，结合人或人源化CD4的人或人源化MHC II(例如，人或人源化MHC IIα和/或人或人源化
MHC IIβ)和/或结合人或人源化CD8的人或人源化MHC I(例如，人或人源化MHC Iα和任选地人或人源化β2微球蛋白))，和/或
[0022](C)人或人源化T细胞受体(TCR)；
[0023]以及本文提供了表达上述各项的胚胎、组织和细胞，及编码上述各项的核酸。还提供了产生和使用所公开的非人动物的方法。
[0024]在一个方面，提供了一种基因修饰的非人类动物，该基因修饰的非人类动物包括
[0025](A)人源化CD4辅助受体和/或包含人源化CD8α多肽和人源化CD8β多肽的人源化CD本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种小鼠或一种分离的小鼠细胞，所述小鼠或所述分离的小鼠细胞包含：(A)未重排的T细胞受体(TCR)α可变区序列，所述未重排的TCRα可变区序列包含至少一个未重排的人T细胞可变区Vα区段和至少一个未重排的人T细胞可变区Jα区段，所述未重排的TCRα可变区序列可操作地连接至小鼠TCRα恒定基因序列，任选地连接到内源小鼠TCRα可变基因的基因座处，其中所述未重排的TCRα可变区序列包含小鼠TCRA非编码序列，或(B)未重排的TCRβ可变区序列，所述未重排的TCRβ可变区序列包含至少一个未重排的人T细胞可变区Vβ区段、至少一个未重排的人T细胞可变区Dβ区段和至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ区段，所述未重排的TCRβ可变区序列可操作地连接至小鼠TCRβ恒定基因序列，任选地连接到内源小鼠TCRβ可变基因的基因座处，其中所述未重排的TCRβ可变区序列包含小鼠TCRB非编码序列，或(C)(i)未重排的T细胞受体(TCR)α可变区序列，所述未重排的TCRα可变区序列包含至少一个未重排的人T细胞可变区Vα区段和至少一个未重排的人T细胞可变区Jα区段，所述未重排的TCRα可变区序列可操作地连接至小鼠TCRα恒定基因序列，任选地连接到内源小鼠TCRα可变基因的基因座处，其中所述未重排的TCRα可变区序列包含小鼠TCRA非编码序列，以及(ii)未重排的TCRβ可变区序列，所述未重排的TCRβ可变区序列包含至少一个未重排的人T细胞可变区Vβ区段、至少一个未重排的人T细胞可变区Dβ区段和至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ区段，所述未重排的TCRβ可变区序列可操作地连接至小鼠TCRβ恒定基因序列，任选地连接到内源小鼠TCRβ可变基因的基因座处，其中所述未重排的TCRβ可变区序列包含小鼠TCRB非编码序列，其中所述未重排的人T细胞可变区区段能够在T细胞中重排以形成编码特异性结合目标抗原的人T细胞受体可变结构域的基因。2.如权利要求1所述的小鼠或分离的小鼠细胞，其中：(A)所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vα区段构成未重排的人T细胞可变区Vα区段组库，并且所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jα区段构成未重排的人T细胞可变区Jα基因区段组库，或(B)所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vβ区段构成未重排的人Vβ区段组库，所述至少一个未重排的人T细胞可变区Dβ区段构成未重排的人Dβ区段组库，并且所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ区段构成未重排的人Jβ基因区段组库，或(C)(i)所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vα区段构成未重排的人T细胞可变区Vα区段组库，所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jα区段构成未重排的人T细胞可变区Jα基因区段组库，(ii)所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vβ区段构成未重排的人Vβ区段组库，所述至少一个未重排的人T细胞可变区Dβ区段包括未重排的人T细胞可变区Dβ1区段和未重排的人T细胞可变区Dβ2区段，并且所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ区段包括至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ1区段和至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ2区段，其中所述小鼠TCRB非编码序列包含(i)介于所述至少一个未重排的人T细胞可变区Dβ1区段和所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ1区段之间的小鼠TCRBD1
‑
TCRBJ1非编码核酸序列，和(ii)介于所述至少一个未重排的人T细胞可变区Dβ2区段和所述至少一个未重排
的人T细胞可变区Jβ2区段之间的小鼠TCRBD2
‑
TCRBJ2非编码核酸序列。3.如权利要求1或权利要求2所述的小鼠或分离的小鼠细胞，其中：(I)所述内源小鼠TCRα可变基因的基因座包含选自由以下项组成的组的缺失：(a)所有内源TCR Vα基因区段的缺失，(b)所有内源TCR Jα基因区段的缺失，和(c)它们的组合，或(II)所述内源小鼠TCRβ可变基因的基因座包含选自由以下项组成的组的缺失：(a)所有内源TCR Vβ基因区段的缺失，(b)所有内源TCR Dβ基因区段的缺失，(c)所有内源TCR Jβ基因区段的缺失，和(d)它们的结合，或(III)所述内源小鼠TCRα可变基因的基因座包含选自由以下项组成的组的缺失：(a)所有内源TCR Vα基因区段的缺失，(b)所有内源TCR Jα基因区段的缺失，和(c)它们的组合，以及所述内源小鼠TCRβ可变基因的基因座包含选自由以下项组成的组的缺失：(a)所有内源TCR Vβ基因区段的缺失，(b)所有内源TCR Dβ基因区段的缺失，(c)所有内源TCR Jβ基因区段的缺失，和(d)它们的组合。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的小鼠或分离的小鼠细胞，其中(I)所述内源小鼠TCRα可变基因的基因座包含选自由以下项组成的组的置换：(a)至少一个内源T细胞可变区Vα基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vα基因区段置换，(b)至少一个内源T细胞可变区Jα基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jα区段置换，和(c)它们的组合，或(II)所述内源小鼠TCRβ可变基因的基因座包含选自由以下项组成的组的置换：(a)至少一个内源T细胞可变区Vβ基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vβ区段置换，(b)至少一个内源T细胞可变区Dβ基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Dβ区段置换，(c)至少一个内源T细胞可变区Jβ基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ区段置换，和(d)它们的结合，或(III)所述内源小鼠TCRα可变基因的基因座包含选自由以下项组成的组的置换：(a)至少一个内源T细胞可变区Vα基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vα基因区段置换，(b)至少一个内源T细胞可变区Jα基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jα
区段置换，和(c)它们的组合，以及所述内源小鼠TCRβ可变基因的基因座包含选自由以下项组成的组的置换：(a)至少一个内源T细胞可变区Vβ基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vβ区段置换，(b)至少一个内源T细胞可变区Dβ基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Dβ区段置换，(c)至少一个内源T细胞可变区Jβ基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ区段置换，和(d)它们的组合。5.如权利要求1
‑
4中任一项所述的小鼠或分离的小鼠细胞，其中(I)所述内源小鼠TCRα可变基因的基因座包含：(a)所有内源T细胞可变区Vα基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vα基因区段置换，任选地其中所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vα基因区段包括从TRAV1
‑
1至TRAV41的多个或所有未重排的人T细胞可变区Vα基因区段，(b)所有内源T细胞可变区Jα基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jα区段置换，任选地其中所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jα区段包括从TRAJ1至TRAJ61的多个或所有未重排的人T细胞可变区Jα基因区段，或(c)它们的组合，(II)所述内源小鼠TCRβ可变基因的基因座包含：(a)所有邻接内源T细胞可变区Vβ基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vβ区段置换，任选地其中所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vβ基因区段包括从TRBV1至TRBV29
‑
1的多个或所有未重排的人T细胞可变区Vβ基因区段，(b)所有内源T细胞可变区Dβ基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Dβ基因区段置换，任选地其中所述至少一个未重排的人T细胞可变区Dβ基因区段包含未重排的人T细胞可变区Dβ1基因区段和/或未重排的人T细胞可变区Dβ2基因区段，(c)所有内源T细胞可变区Jβ基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ区段置换，任选地其中所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ区段包括从TRBJ1
‑
1至TRBJ1
‑
6的多个或所有未重排的人Jβ区段，或从TRBJ2
‑
1至TRBJ2
‑
7的多个或所有未重排的人Jβ区段，或(d)它们的结合，或(III)所述内源小鼠TCRα可变基因的基因座包含：(a)所有内源T细胞可变区Vα基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vα基因区段置换，任选地其中所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vα基因区段包括从TRAV1
‑
1至TRAV41的多个或所有未重排的人T细胞可变区基因区段，(b)所有内源T细胞可变区Jα基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jα区段置换，任选地其中所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jα区段包括从TRAJ1至TRAJ61的多个或所有未重排的人T细胞可变区基因区段，或(c)它们的组合，以及
所述内源小鼠TCRβ可变基因的基因座包含：(a)所有邻接内源T细胞可变区Vβ基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vβ区段置换，任选地其中所述至少一个未重排的人T细胞可变区Vβ基因区段包括从TRBV1至TRBV29
‑
1的多个或所有未重排的人T细胞可变区基因区段，(b)所有内源T细胞可变区Dβ基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Dβ基因区段置换，任选地其中所述至少一个未重排的人T细胞可变区Dβ基因区段包含未重排的人T细胞可变区Dβ1基因区段和/或未重排的人T细胞可变区Dβ2基因区段，(c)所有内源T细胞可变区Jβ基因区段被所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ区段置换，任选地其中所述至少一个未重排的人T细胞可变区Jβ区段包括从TRBJ1
‑
1至TRBJ1
‑
6的多个或所有未重排的人Jβ区段，或从TRBJ2
‑
1至TRBJ2
‑
7的多个或所有未重排的人Jβ区段，或(d)它们的组合。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的小鼠或分离的小鼠细胞，其中(I)所述内源小鼠TCRα可变基因的基因座包含：(a)所有内源T细胞可变区Vα基因区段被TRAV1
‑
1至TRAV41的所有未重排的人T细胞可变区Vα基因区段置换，(b)所有内源T细胞可变区Jα基因区段被TRAJ1至TRAJ61的所有未重排的人T细胞可变区Jα基因区段置换，或(c)它们的组合，(II)所述内源小鼠TCRβ可变基因的基因座包含：(a)所有邻接内源T细胞可变区Vβ基因区段被TRBV1至TRBV29
‑
1的所有未重排的人T细胞可变区Vβ基因区段置换，(b)内源T细胞可变区Dβ1基因区段被未重排的人T细胞可变区Dβ1基因区段置换，并且内源T细胞可变区Dβ2基因区段被未重排的人T细胞可变区Dβ2基因区段置换，(c)以下置换：内源TRBJ1
‑
1基因区段被未重排的人TRBJ1
‑
1基因区段置换，内源TRBJ1
‑
2基因区段被未重排的人TRBJ1
‑
2基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ1
‑
1区段和小鼠TRBJ1
‑
2区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ1
‑
3基因区段被未重排的人TRBJ1
‑
3基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ1
‑
2区段和小鼠TRBJ1
‑
3区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ1
‑
4基因区段被未重排的人TRBJ1
‑
4基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ1
‑
3区段和小鼠TRBJ1
‑
4区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ1
‑
5基因区段被未重排的人TRBJ1
‑
5基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ1
‑
4区段和小鼠TRBJ1
‑
5区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ1
‑
6基因区段被未重排的人TRBJ1
‑
6基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ1
‑
5区段和小鼠TRBJ1
‑
6区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ2
‑
1基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
1基因区段置换，内源TRBJ2
‑
2基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
2基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ2
‑
1区段和小鼠TRBJ2
‑
2区段之间发现的小鼠非编码序列，
内源TRBJ2
‑
3基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
3基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ2
‑
2区段和小鼠TRBJ2
‑
3区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ2
‑
4基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
4基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ2
‑
3区段和小鼠TRBJ2
‑
4区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ2
‑
5基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
5基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ2
‑
4区段和小鼠TRBJ2
‑
5区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ2
‑
6基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
6基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ2
‑
5区段和小鼠TRBJ2
‑
6区段之间发现的小鼠非编码序列，以及内源TRBJ2
‑
7基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
7基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ2
‑
6区段和小鼠TRBJ2
‑
7区段之间发现的小鼠非编码序列，或(d)它们的结合，或(III)所述内源小鼠TCRα可变基因的基因座包含：(a)所有内源T细胞可变区Vα基因区段被TRAV1
‑
1至TRAV41的所有未重排的人T细胞可变区Vα基因区段置换，(b)所有内源T细胞可变区Jα基因区段被TRAJ1至TRAJ61的所有未重排的人T细胞可变区Jα基因区段置换，或(c)它们的组合，以及所述内源小鼠TCRβ可变基因的基因座包含：(a)所有邻接内源T细胞可变区Vβ基因区段被TRBV1至TRBV29
‑
1的所有未重排的人T细胞可变区Vβ基因区段置换，(b)内源T细胞可变区Dβ1基因区段被未重排的人T细胞可变区Dβ1基因区段置换，并且内源T细胞可变区Dβ2基因区段被未重排的人T细胞可变区Dβ2基因区段置换，(c)以下置换：内源TRBJ1
‑
1基因区段被未重排的人TRBJ1
‑
1基因区段置换，内源TRBJ1
‑
2基因区段被未重排的人TRBJ1
‑
2基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ1
‑
1区段和小鼠TRBJ1
‑
2区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ1
‑
3基因区段被未重排的人TRBJ1
‑
3基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ1
‑
2区段和小鼠TRBJ1
‑
3区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ1
‑
4基因区段被未重排的人TRBJ1
‑
4基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ1
‑
3区段和小鼠TRBJ1
‑
4区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ1
‑
5基因区段被未重排的人TRBJ1
‑
5基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ1
‑
4区段和小鼠TRBJ1
‑
5区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ1
‑
6基因区段被未重排的人TRBJ1
‑
6基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ1
‑
5区段和小鼠TRBJ1
‑
6区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ2
‑
1基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
1基因区段置换，内源TRBJ2
‑
2基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
2基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ2
‑
1区段和小鼠TRBJ2
‑
2区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ2
‑
3基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
3基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ2
‑
2区段和小鼠TRBJ2
‑
3区段之间发现的小鼠非编码序列，
内源TRBJ2
‑
4基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
4基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ2
‑
3区段和小鼠TRBJ2
‑
4区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ2
‑
5基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
5基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ2
‑
4区段和小鼠TRBJ2
‑
5区段之间发现的小鼠非编码序列，内源TRBJ2
‑
6基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
6基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ2
‑
5区段和小鼠TRBJ2
‑
6区段之间发现的小鼠非编码序列，以及内源TRBJ2
‑
7基因区段被未重排的人TRBJ2
‑
7基因区段置换，任选地其中所述小鼠TCRB非编码序列包含在小鼠TRBJ2
‑
6区段和小鼠TRBJ2
‑
7区段之间发现的小鼠非编码序列，或(d)它们的组合。7.根据前述权利要求中任一项所述的小鼠或分离的小鼠细胞，其中(I)所述内源小鼠TCRα可变基因的基因座包含：(a)所有内源T细胞可变区Vα基因区段被TRAV1
‑
1至TRAV41的所有未重排的人T细胞可变区Vα基因区段置换，以及(b)所有内源T细胞可变区Jα基因区段被TRAJ1至TRAJ61的所有未重排的人T细胞可变区Jα基因区段置换；并且(II)所述内源小鼠TCRβ可变基因的基因座包含：(a)所有邻接内源T细胞可变区Vβ基因区段被TRBV1至TRBV29
‑
1的所有未重排的人T细胞可变区Vβ基因区段置换，(b)(i)内源tcrbdj1簇被包含未重排的人TCRBD1区段的人源化TCRBDJ1簇置换，和(ii)未重排的人TCRBJ1
‑
1区段、未重排的人TCRBJ1
‑
2区段、未重排的人TCCRBJ1
‑
3区段、未重排的人TCRBJ1
‑
4区段、未重排的人TCRBJ1
‑
5区段和未重排的人TCRBJ1
‑
6区段中的每一个，其中所述人源化TCRBDJ1簇包含介于所述未重排的人TCRBD1区段和所述未重排的人TCRBJ1
‑
1区段之间的小鼠TCRBDJ1非编码序列，以及介于任何两个连续的未重排的人TCRBJ1基因区段之间的小鼠TCRBDJ1非编码序列，任选地其中所述未重排的人TCRBD1和TCRBJ1基因区段位于相同的小鼠TCRBDJ1非编码序列的侧翼，正如通常侧翼是相应的小鼠tcrbdj1基因区段，并且(c)(i)内源tcrbdj2簇被包含未重排的人TCRBD2区段的人源化TCRBDJ2簇置换，和(ii)未重排的人TRBJ2
‑
1区段、未重排的人TRBJ2
‑
2区段、未重排的人TCRBJ2
‑
3区段、未重排的人TCRBJ2
‑
4区段、未重排的人TCRBJ2
‑
5区段、未重排的人TCRBJ2
‑
6区段和未重排的人TCRBJ2
‑
7区段中的每一个，其中所述人源化TCRBDJ2簇包含介于所述未重排的人TCRBD2区段和任何未重排的人TCRBJ2区段之间的小鼠TCRBDJ2非编码序列，以及介于任何两个连续的未重排的人TCRBJ2基因区段之间的小鼠TCRBDJ2非编码序列，任选地其中所述未重排的人TCRBD2和TCRBJ2基因区段位于相同的小鼠TCRBDJ2非编码序列的侧翼，正如通常侧翼是相应的小鼠tcrbdj2基因区段。8.根据前述权利要求中任一项所述的小鼠，其中所述未重排的TCRα可变区序列处于种系基因组中，和/或所述未重排的TCRβ可变区序列处于所述种系基因组中。9.如前述权利要求中任一项所述的小鼠或如权利要求1
‑
7中任一项所述的小鼠细胞，其中所述TCRα可变区序列可操作地连接至内源TCRα调控元件，和/或所述TCRβ可变区序列
可操作地连接至内源TCRβ调控元件。10.根据前述权利要求中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠在T细胞表面表达T细胞受体，所述T细胞受体包含人源化TCRα链和人源化TCRβ链，其中所述人源化TCRα链由可操作地连接至所述小鼠TCRα恒定区序列的重排的人Vα/Jα序列编码，其中所述重排的人Vα/Jα序列通过所述至少一个人T细胞可变区Vα区段和至少一个人T细胞可变区Jα区段的重排形成，其中所述人源化TCRβ链由可操作地连接至所述小鼠TCRβ恒定区序列的重排的人Vβ/Dβ/Jβ序列编码，其中所述重排的人Vβ/Dβ/Jβ序列通过所述至少一个人T细胞可变区Vβ区段、至少一个T细胞可变区Dβ区段和至少一个人T细胞可变区Jβ区段的重排形成，任选地其中所述TCRβ链由重排的Vβ/Dβ2/Jβ2序列编码。11.根据前述权利要求中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠表达的所述TCR的至少10％源自所述TCRBDJ1簇的基因区段，并且所述小鼠表达的所述TCR的至少10％源自所述TCRBDJ2簇的基因区段。12.一种小鼠或分离的小鼠细胞，所述小鼠或分离的小鼠细胞在其基因组中包含：(a)编码嵌合人/小鼠CD4辅助受体的第一核苷酸序列，所述辅助受体包含人CD4多肽的D1、D2和D3结构域以及小鼠CD4多肽的跨膜结构域和胞质结构域；(b)编码嵌合人/小鼠CD8α多肽的第二核苷酸序列和编码嵌合人/小鼠CD8β多肽，的第三核苷酸序列，其中所述嵌合人/小鼠CD8α多肽包含人CD8α多肽的IgV样结构域和小鼠CD8α多肽的跨膜结构域和胞质结构域，其中所述嵌合人/小鼠CD8β多肽包含人CD8β多肽的IgV样结构域和小鼠CD8β多肽的跨膜结构域和胞质结构域；(c)编码嵌合人/小鼠MHC IIα多肽的第一核酸序列和编码嵌合人/小鼠MHC IIβ多肽的第二核酸序列，其中所述嵌合人/小鼠MHC IIα多肽包含人HLA II类α多肽的α1和α2结构域以及小鼠MHC IIα多肽的跨膜结构域和胞质结构域，其中所述嵌合人/小鼠MHC IIβ多肽包含人HLA II类β多肽的β1和β2结构域以及小鼠MHC IIβ多肽的跨膜结构域和胞质结构域；(d)编码嵌合人/小鼠MHC I多肽的第三核酸序列，其中所述嵌合MHC I多肽包含人HLA I类多肽的α1结构域、α2结构域和α3结构域以及小鼠MHC I多肽的跨膜结构域和胞质结构域；以及(e)未重排的人TCRα可变区序列，所述未重排的人TCR可变区序列包含至少一个人Vα区段和至少一个人Jα区段，所述未重排的人TCR可变区序列可操作地连接至小鼠TCRα恒定区序列；和未重排的TCRβ可变区序列，所述未重排的TCR可变区序列包含所述至少一个人Vβ区段、所述至少一个人Dβ区段和所述至少一个人Jβ区段，所述未重排的TCR可变区序列可操作地连接至小鼠TCRβ恒定区序列，其中所述未重排的TCRβ可变区序列包含小鼠TCRB非编码序列，任选地其中所述小鼠表达：(A)所述嵌合人/小鼠CD4辅助受体，
(B)包含所述嵌合人/小鼠CD8α多肽和所述嵌合人/小鼠CD8β多肽的嵌合CD8辅助受体，(C)嵌合MHC II复合物，所述嵌合MHC II复合物包含所述嵌合人/小鼠MHC IIα多肽和所述嵌合人/小鼠MHC IIβ多肽，其中所述嵌合MHC II复合物能够结合所述嵌合人/小鼠CD4辅助受体，和(D)所述嵌合人/小鼠MHC I多肽，其中所述嵌合MHC I多肽能够结合所述嵌合CD8辅助受体，和(E)T细胞表面上的T细胞受体，所述T细胞受体包含人源化TCRα链和人源化TCRβ链，其中所述人源化TCRα链由可操作地连接至所述小鼠TCRα恒定区序列的重排的人Vα/Jα序列编码，其中所述重排的人Vα/Jα序列通过包含至少一个人Vα区段和至少一个人Jα区段的所述未重排的人TCRα可变区序列的重排形成，其中所述人源化TCRβ链由可操作地连接至所述小鼠TCRβ恒定区序列的重排的人Vβ/Dβ/Jβ序列编码，其中所述重排的人Vβ/Dβ/Jβ序列通过包含至少一个人Vβ区段、至少一个Dβ区段和至少一个人Jβ区段的所述未重排的TCRβ可变区序列的重排形成。13.如权利要求12所述的小鼠，所述小鼠在其种系基因组中包含：(a)编码所述嵌合人/小鼠CD4辅助受体的所述第一核苷酸序列；(b)编码所述嵌合人/小鼠CD8α多肽的所述第二核苷酸序列和编码所述嵌合人/小鼠CD8β多肽的所述第三核苷酸序列；(c)编码所述嵌合人/小鼠MHC IIα多肽的所述第一核酸序列和编码所述嵌合人/小鼠MHC IIβ多肽的所述第二核酸序列；(d)编码所述嵌合人/小鼠MHC I多肽的所述第三核酸序列；以及(e)可操作地连接至小鼠TCRα恒定区序列的所述未重排的人TCRα可变区序列和可操作地连接至小鼠TCRβ恒定区序列的所述未重排的TCRβ可变区序列。14.如权利要求12或权利要求13所述的小鼠，或如权利要求12所述的小鼠细胞，其中(a)所述第一核苷酸序列存在于内源CD4 T细胞辅助受体基因座处；(b)所述第二核苷酸序列存在于内源CD8αT细胞辅助受体基因座处并且所述第三核苷酸序列存在于内源CD8βT细胞辅助受体基因座处；(c)所述第一核酸序列存在于内源MHC IIα基因座处并且所述第二核酸序列存在于内源MHC IIβ基因座处；(d)所述第三核酸序列存在于内源MHC I基因座处；或者(e)所述未重排的人TCRα可变区序列存在于内源TCRα可变区基因座处并且所述未重排的TCRβ可变区序列存在于内源TCRβ可变区基因座处，或(f)(a)
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(e)的任何组合。15.如权利要求12
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14中任一项所述的小鼠或如权利要求12或权利要求14所述的分离的小鼠细胞，其中(a)所述第一核苷酸序列存在于内源CD4 T细胞辅助受体基因座处并且可操作地连接至内源CD4辅助受体启动子和调控元件；(b)所述第二核苷酸序列存在于内源CD8αT细胞辅助受体基因座处并且可操作地连接至内源CD8α多肽启动子和调控元件，并且所述第三核苷酸序列存在于内源CD8βT细胞辅助受体基因座处并且可操作地连接至内源CD8β多肽启动子和调控元件；
(c)所述第一核酸序列存在于内源MHC IIα基因座处并且可操作地连接至内源MHC IIα启动子和调控元件，并且所述第二核酸序列存在于内源MHC IIβ基因座处并且可操作地连接至内源MHC IIβ启动子和调控元件；(d)所述第三核酸序列存在于内源MHC I基因座处并且可操作地连接至内源MHC I启动子和调控元件；(e)所述未重排的人TCRα可变区序列存在于内源TCRα可变区基因座处并且可操作地连接至内源TCRα调控元件，并且所述未重排的TCRβ可变区序列可操作地连接至内源TCRβ调控元件；或者(f)(a)
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(e)的任何组合。16.如权利要求12
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15中任一项所述的小鼠或如权利要求12、14
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15中任一项所述的分离的小鼠细胞，其中(a)所述嵌合人/小鼠CD4辅助受体包含所述人CD4多肽的D1、D2和D3结构域，可操作地连接至内源CD4多肽的D4结构域、跨膜结构域和胞质结构域，(b)所述嵌合人/小鼠CD8α多肽包含可操作地连接至内源CD8α多肽的跨膜结构域和胞质结构域的所述人CD8α多肽的所述IgV样结构域，并且所述嵌合CD8β多肽包含可操作地连接至内源CD8β多肽的跨膜结构域和胞质结构域的所述人CD8β多肽的所述IgV样结构域；(c)所述嵌合人/小鼠MHC IIα多肽包含可操作地连接至内源MHC IIα多肽的跨膜结构域和胞质结构域的人HLA II类α1和α2结构域，并且所述嵌合MHC IIβ多肽包含可操作地连接至内源MHC IIβ多肽的跨膜结构域和胞质结构域的人HLA II类β1和β2结构域；(d)所述嵌合人/小鼠MHC I多肽包含可操作地连接至内源MHC I多肽的跨膜结构域和胞质结构域的人HLA I类α1、α2和α3结构域，或(e)(a)
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(d)的任何组合。17.如权利要求12
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16中任一项所述的小鼠或如权利要求12和14
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16中任一项所述的分离的小鼠细胞，其中(a)所述人HLA II类α多肽的所述α1和α2结构域由选自由HLA
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DR、HLA
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DQ和HLA
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DP的任何α链基因组成的组的HLA II类基因编码；(b)所述人HLA II类β多肽的所述β1和β2结构域由选自由HLA
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DR、HLA
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DQ和HLA
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DP的任何...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭春光，涂纳新，A，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：