酮还原酶突变体、其组合物、生物材料及应用制造技术

本发明专利技术涉及生物工程技术领域，具体涉及酮还原酶突变体、其组合物、生物材料及应用。本发明专利技术将以筛选得到的源于Saccharomyces cerevisiae S288C的野生型酮还原酶进行突变，获得酮还原酶突变体，第一次将其应用于达芦那韦中间体的合成，与野生型酮还原酶相比，本发明专利技术所述酮还原酶突变体对底物（酮化合物II）的反应具有更高的酶活力和立体选择性，酶用量明显减少，反应产物I的异构体纯度大幅度提高，能够更好的满足工业化生产需求。够更好的满足工业化生产需求。够更好的满足工业化生产需求。

【技术实现步骤摘要】
酮还原酶突变体、其组合物、生物材料及应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体涉及酮还原酶突变体、其组合物、生物材料及应用。

技术介绍

[0002]达芦那韦(darunavir)是FDA批准用于抗人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的新药，是第二代HIV蛋白酶抑制剂，可以阻断HIV病毒复制的蛋白酶，当与其他抗HIV药物联用时，可以降低病毒载量，提高免疫能力。达芦那韦是由强生公司的子公司爱尔兰的泰博特克药品公司(Tibotec)开发，于2006年7月首次在美国上市，其商品名为：Prezista，化学名为：[(1R， 5S，6R)
‑
2，8
‑
二氧双环[3．3．0]‑
癸烷
‑6‑
基]‑
N
‑
[(2S，3R)
‑4‑
[(4
‑
氨基苯基)磺酰基
‑
(2
‑
甲基丙基)氨基]‑3‑
羟基
‑1‑
苯基
‑
丁烷
‑2‑r/>基]氨基甲酸酯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.酮还原酶突变体，其特征在于，包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有如下突变中的至少一种：第235位色氨酸突变为酪氨酸；或第249位甲硫氨酸突变为苯丙氨酸或异亮氨酸；或第250位谷氨酸突变为天冬氨酸或丝氨酸；或第257位谷氨酸突变为天冬氨酸或丝氨酸；或第259位亮氨酸突变为丙氨酸、苯丙氨酸或甲硫氨酸；或第272位谷氨酸突变为丝氨酸；或第319位赖氨酸突变为精氨酸或组氨酸。2.根据权利要求1所述的酮还原酶突变体，其特征在于，包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第235位色氨酸突变为酪氨酸和如下所示突变中的至少一种：第257位谷氨酸突变为天冬氨酸；或第259位亮氨酸突变为丙氨酸；或第272位谷氨酸突变为丝氨酸；或第319位赖氨酸突变为组氨酸。3.根据权利要求1或2所述的酮还原酶突变体，其特征在于，所述酮还原酶突变体包括：如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第235位色氨酸突变为酪氨酸，第259位亮氨酸突变为丙氨酸和第272位谷氨酸突变为丝氨酸；或如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第235位色氨酸突变为酪氨酸，第257位谷氨酸突变为天冬氨酸和第259位亮氨酸突变为丙氨酸；或如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第235位色氨酸突变为酪氨酸，第257位谷氨酸突变为天冬氨酸，第259位亮氨酸突变为丙氨酸和第272位谷氨酸突变为丝氨酸；或如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第235位色氨酸突变为酪氨酸，第257位谷氨酸突变为天冬氨酸，第259位亮氨酸突变为丙氨酸，第272位谷氨酸突变为丝氨酸和第319位赖氨酸突变为组氨酸。4.组合物，其特征在于，包括组合物1或组合物2中的任意一种，所述组合物1包括：辅酶再生酶和酮还原酶；所述组合物2包括：辅酶再生酶和权利要求1~3任一项所述的酮还原酶突变体；所述辅酶再生酶包括葡萄糖脱氢酶、异丙醇脱氢酶或甲酸脱氢酶中的任意一种；所述葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；所述异丙醇脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；所述甲酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；所述酮还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。5.生物材料，其特征在于，包括如下A）~D）所示中的至少一种：A）、编码权利要求1~3任一项所述的酮还原酶突变体或权利要求4所述的组合物的核酸；B）、含有A）所述核酸的重组载体；C）、转化或转染如B）所述重组载体的...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗积杏，壮晓健，童杰，王红艳，李原强，
申请(专利权)人：浙江九洲药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：