dsRNA的制备方法及其在制备dsRNA标准品中的应用技术

本发明专利技术提供了一种dsRNA的制备方法及其在制备dsRNA标准品中的应用，涉及生物技术领域。该dsRNA的制备方法包括先经体外转录合成ssRNA，再将反应产物中的体外转录模板降解为单个核苷酸；然后退火形成dsRNA，再使用S1核酸酶降解退火产物中的单链核酸，纯化反应产物得到dsRNA。该制备方法缓解了现有技术中缺少一种制备高纯度dsRNA方法的问题。种制备高纯度dsRNA方法的问题。种制备高纯度dsRNA方法的问题。

【技术实现步骤摘要】
dsRNA的制备方法及其在制备dsRNA标准品中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种dsRNA的制备方法及其在制备dsRNA标准品中的应用。

技术介绍

[0002]mRNA疫苗是一种利用信使RNA(mRNA)的分子副本来产生免疫反应的疫苗。此类疫苗将编码抗原的mRNA分子送入免疫细胞，免疫细胞使用设计好的mRNA作为模板来构建通常由病原体(如病毒)或癌细胞产生的外来蛋白质。这些蛋白质分子刺激适应性免疫反应，教导身体识别并摧毁相应的病原体或癌细胞。mRNA疫苗是由脂质纳米颗粒及封装在其中的RNA共同组成，保护RNA链并帮助其吸收进入细胞。因新冠疫情，在疗效、研发速度周期、成本价格、生产的可拓展性和安全性等方面有显著优势的mRNA疫苗技术路线开始备受关注。
[0003]mRNA原液的制备和转录是疫苗生产的关键步骤，mRNA的质量直接决定了疫苗的临床表现。dsRNA的全称是double
‑
stranded RNA，译为双链核糖核酸。在IVT(mRNA体外合成)的过程中，T7 RNA聚合酶可能以RNA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种dsRNA的制备方法，其特征在于，包括：先经体外转录合成ssRNA，再将反应产物中的体外转录模板降解为单个核苷酸；然后退火形成dsRNA，再使用S1核酸酶降解退火产物中的单链核酸，纯化反应产物得到dsRNA。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述体外转录产物由T7 RNA聚合酶催化反应得到；优选地，所述体外转录产物的转录模板两端含有T7 RNA聚合酶启动子序列。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，使用至少一种核酸酶将所述转录模板降解为单个核酸；优选地，所述至少一种核酸酶包括Baseline
‑
ZERO
TM DNase；优选地，所述至少一种核酸酶包括DNase I和第二互补DNase，所述第二互补DNase包含单链特异性3
’
至5
’
外脱氧核糖核酸酶；优选地，所述第二互补DNase包括核酸外切酶I。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，Baseline
‑
ZERO
TM
DNase降解转录模板的反应条件为36～38℃反应15～60min；优选地，Baseline
‑
ZERO
TM DNase降解转录模板的反应条件为37℃反应30min...

【专利技术属性】
技术研发人员：耿玉杰，
申请(专利权)人：武汉瀚海新酶生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：