从环境样品中检测李斯特菌的方法技术

本文描述了从环境样品中检测李斯特菌。特别地，所述检测可以在当天或同一工作班次，例如在约12小时或更短或约6至10小时内可得到结果的情况下完成。所述当天检测利用短的孵育时间和/或浓缩步骤，结合快速检测测定来产生当天的结果。天的结果。天的结果。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】从环境样品中检测李斯特菌的方法
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2020年10月22日提交的美国临时专利申请号63/094,945的权益，将其全部内容通过引用并入本文。


[0002]本专利技术涉及从环境样品中检测李斯特菌(Listeria)。特别是，从环境样品的检测可以在单一天或单一工作班次内完成。

技术介绍

[0003]李斯特菌属物种(Listeria species)非常常见并且可以在环境中的几乎任何地方找到。作为指示生物体，李斯特菌属物种(Listeria spp.)可用于评估食品加工厂环境中致病性单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)的潜在存在。单核细胞增多性李斯特菌是一种有害病原体，所述有害病原体由于它与人类食源性李斯特菌病有关，因此在食品工业中尤其成问题。需要快速检测和鉴定环境样品(包括用于食品安全测试的环境样品)中李斯特菌的方法和诊断工具。本专利技术的装置、方法和试剂盒满足了这种需求和其他需求。

技术实现思路

[0004]本专利技术为用户提供了测定来自食品生产、食品加工或食品服务场所的环境样品中李斯特菌的存在的手段，其中在当天或同一工作班次，例如在约12小时或更短或约6至10小时内获得结果。用于测定来自环境样品的李斯特菌的常规方法需要16至24小时或更长的孵育时间，并且因此结果不可在当天得到或至少不可在同一个工作班次得到。如本文所述，当天结果为食品工业提供了优势，例如，通过允许在食品产品离开设施之前检测李斯特菌。
[0005]在一方面，本文提供了一种检测环境样品中李斯特菌的方法。在一些实施方案中，所述样品来自低浓度环境。所述方法包括以下步骤：使用收集装置收集包含细胞的环境样品；将所述样品转移到含有约50ml或更少富集培养基的孵育容器中；将所述孵育容器中的细胞孵育约12小时或更短；裂解所述细胞以从所述细胞中释放核酸；以及进行靶向核酸序列的检测测定，用于扩增和检测从所述细胞中释放的李斯特菌核酸。
[0006]此方面的实施方案可以包括以下任选特征中的一个或多个：在一些实施方案中，所述方法进一步包括在裂解细胞之前浓缩所述细胞；在一些实施方案中，所述孵育容器含有约1ml至约50ml富集培养基(例如，肉汤，诸如中和缓冲液)；在一些实施方案中，所述富集培养基对李斯特菌的生长是选择性的；在一些实施方案中，所述富集培养基对李斯特菌的生长是非选择性的；在一些实施方案中，所述方法包括将所述孵育容器中的细胞孵育约4至约12小时；在一些实施方案中，所述收集装置是拭子、棉签(q
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tip)或海绵；在一些实施方案中，所述收集装置是海绵；在一些实施方案中，从收集所述样品到检测李斯特菌核酸的时间是12小时或更短；在一些实施方案中，从收集所述样品到检测李斯特菌核酸的时间是8小时
或更短；在一些实施方案中，所述检测测定是等温切口酶扩增反应(NEAR)测定；在一些实施方案中，所述检测测定是热稳定解旋酶依赖性等温扩增(tHDA)测定；在一些实施方案中，所述检测测定是分子方法，诸如实时聚合酶链式反应(qPCR)；在一些实施方案中，所述方法进一步包括通过离心或过滤浓缩所孵育的细胞；在一些实施方案中，所述检测测定靶向的核酸序列来自从所述细胞中释放的RNA；在一些实施方案中，所述环境样品是从包含约2至约50个李斯特菌细胞或约5至约50个李斯特菌细胞的低浓度环境中收集的；在一些实施方案中，在孵育之前，所述环境样品包含约2至约50个李斯特菌细胞或约5至约50个李斯特菌细胞；在一些实施方案中，所述方法具有足够的灵敏度来检测具有少至7个李斯特菌细胞或少至3个李斯特菌细胞的环境样品中李斯特菌的存在；在一些实施方案中，所述收集装置是海绵，并且所述孵育容器含有约5ml至约50ml富集培养基(例如，肉汤)；在一些实施方案中，所述收集装置是拭子，并且所述孵育容器含有约1ml至约10ml富集培养基(例如，肉汤)。
[0007]在另一方面，本文提供了一种用于检测环境样品中李斯特菌的存在的试剂盒。所述试剂盒包括用于收集包含细胞的环境样品的收集装置；含有约50ml或更少富集培养基的孵育容器；以及任选地用于扩增和检测所述样品中的李斯特菌核酸的测定。
[0008]此方面的实施方案可以包括以下任选特征中的一个或多个：在一些实施方案中，所述试剂盒能够在从收集所述样品到检测所扩增的核酸的12小时或更短的时间内检测来自低浓度环境的李斯特菌；在一些实施方案中，所述孵育容器含有约1ml至约50ml富集培养基；在一些实施方案中，所述富集培养基对李斯特菌的富集是选择性的；在一些实施方案中，所述富集培养基是LESS Plus富集培养基；在一些实施方案中，所述收集装置是拭子、棉签或海绵；在一些实施方案中，所述测定是热稳定解旋酶依赖性等温扩增(tHDA)测定；在一些实施方案中，所述测定是等温切口酶扩增反应(NEAR)测定。
附图说明
[0009]当参考附图阅读以下详细描述时，可以更好地理解本专利技术的这些和其他特征、方面和优点。
[0010]图1示出了从环境样品中检测李斯特菌的方法的示例性工作流程图。
具体实施方式
[0011]在以下描述中，给予许多具体细节以提供对实施方案的透彻理解。可以在没有一个或多个具体细节的情况下或者用其他方法、组分、材料等来实践所述实施方案。在其他情况下，没有详细示出或描述众所周知的结构、材料或操作，以避免模糊实施方案的各个方面。
[0012]在整个本说明书中对“一个实施方案(one embodiment)”、“一种实施方案(an embodiment)”或“实施方案(embodiments)”的提及意指结合实施方案描述的特定特征、结构或特性包括在至少一种实施方案中。因此，在整个本说明书中各处短语“在一个实施方案中(in one embodiment)”或“在一个实施方案中(in an embodiment)”的出现不一定都指代相同的实施方案。此外，特定的特征、结构或特性可以在一个或多个实施方案中以任何合适的方式组合。
[0013]除非另有指示，否则当公开或要求保护任何类型的范围时，旨在单独公开或要求
保护此类范围可能合理涵盖的每个可能数字，包括其中涵盖的任何子范围。此外，当公开或要求保护一个数值范围，申请人旨在单独反映此类范围可能合理涵盖的每个可能数字时，申请人还旨在公开一个范围来反映其中涵盖的任何和所有子范围和子范围的组合并且可以与之互换。
[0014]在术语“包括”及其变体在说明书和权利要求书中出现的情况下，这些术语不具有限制意义。
[0015]如本文所用，“一个/种(a)”、“一个/种(an)”、“所述(the)”、“至少一个/种(a)”和“一个/种或多个/种”可互换使用。因此，例如，一种微生物可以解释为意指“一种或多种”微生物。
[0016]术语“和/或”意指一个或所有列出的要素或者任何两个或更多个列出的要素的组合。
[0017]如本文所用，术语“李斯特菌”是指革兰氏阳性杆状细菌，包括历史上本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种检测环境样品中李斯特菌(Listeria)的方法，所述方法包括以下步骤：使用收集装置收集包含细胞的环境样品；将所述样品转移到含有约50ml或更少富集培养基的孵育容器中；将所述孵育容器中的细胞孵育约12小时或更短；裂解所述细胞以从所述细胞中释放核酸；以及进行靶向核酸序列的检测测定，用于扩增和检测从所述细胞中释放的李斯特菌核酸。2.根据权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括在裂解所述细胞之前浓缩所述细胞。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述孵育容器含有约1ml至约50ml富集培养基。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述富集培养基对李斯特菌的生长是选择性的。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述富集培养基对李斯特菌的生长是非选择性的。5.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括将所述孵育容器中的细胞孵育约4至约12小时。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述收集装置是拭子、棉签或海绵。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述收集装置是海绵。8.根据权利要求1所述的方法，其中从收集所述样品到检测所扩增的核酸的时间是12小时或更短。9.根据权利要求8所述的方法，其中从收集所述样品到检测所扩增的核酸的时间是8小时或更短。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述检测测定是热稳定解旋酶依赖性等温扩增(tHDA)测定。11.根据权利要求1所述的方法，其中所述检测测定是等温切口酶扩增反应(NEAR)测定。12.根据权利要求2所述的方法，其中所孵育的细胞的浓缩包括离心或过滤。13.根据权利要求1所述的方法，其中所述环境样品是从包含约2至约50个李斯特菌细胞的低浓度环境中收集的，并且其中所述检测测定检测所述样品中的李斯特菌。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述低浓度环境包含约5至约5...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：纽勤有限公司，
类型：发明
国别省市：