使用热稳定酶的受控且不依赖于模板的核酸合成制造技术

本发明专利技术涉及不依赖于模板的核酸合成方法，所述方法包括在存在古细菌DNA引物酶或其功能活性片段和/或变体的情况下，使包含具有游离3

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用热稳定酶的受控且不依赖于模板的核酸合成


[0001]本专利技术涉及核酸合成或测序领域，更具体地涉及不依赖于模板的核酸合成的方法，所述方法包括在古细菌DNA引物酶或其功能活性片段和/或变体存在的情况下，使包含具有游离3
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羟基的3
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末端核苷酸的起始序列与至少一种核苷三磷酸或核苷三磷酸的组合反复接触，从而使所述核苷三磷酸共价结合至所述3
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末端核苷酸的游离3
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羟基。
[0002]本专利技术还涉及古细菌DNA引物酶的分离的功能活性片段，这些片段能够具有不依赖于模板的末端核苷酸转移酶活性，但不具备从头开始(ab
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initio)的单链核酸合成活性。
[0003]专利技术背景
[0004]不依赖于模板的序列受控的核酸合成是一个重大的行业挑战。
[0005]许多生产者都能够通过化学方法合成DNA或RNA链，然而他们很快就遭遇了这些生产方法的局限性。今天，核酸化学合成的黄金方法是亚磷酰胺法，它开发于20世纪80年代，后来通过固相支持和自动本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种不依赖于模板的核酸合成方法，所述方法包括在存在属于引物酶
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聚合酶家族的古细菌DNA引物酶的引物酶结构域或其功能活性变体的情况下，使包含具有游离3
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羟基的3
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末端核苷酸的起始序列与至少一种核苷三磷酸或核苷三磷酸的组合反复接触，从而使所述核苷三磷酸共价结合到所述3
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末端核苷酸的游离3
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羟基，其中所述功能活性变体能够具有模板非依赖性末端核苷酸转移酶活性但不具备从头开始的单链核酸合成活性。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述古细菌DNA引物酶或其功能活性变体来自火球菌属(Pyrococcus)的古细菌。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述古细菌DNA引物酶或其功能活性变体是火球菌属种(Pyrococcus sp.)12
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1DNA引物酶。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中所述属于引物酶
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聚合酶家族的古细菌DNA引物酶或其功能活性变体为具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的火球菌属种12
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1DNA引物酶。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中属于引物酶
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聚合酶家族的古细菌DNA引物酶的所述引物酶结构域是具有SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列的火球菌属种12
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1DNA引物酶的引物酶结构域，或其功能活性片段和/或变体，所述功能活性片段和/或变体：
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与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性；并且
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能够具有不依赖于模板的末端核苷酸转移酶活性；并且
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不具备从头开始的单链核酸合成活性。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中属于引物酶
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聚合酶家族的古细菌DNA引物酶的所述引物酶结构域是具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的火球菌属种12
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1DNA引物酶的引物酶结构域，或其功能活性片段和/或变体，所述功能活性片段和/或变体：
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与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性；并且
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能够具有不依赖于模板的末端核苷酸转移酶活性；并且
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不具备从头开始的单链核酸合成活性。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述起始序列被固定在支持物上。8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述起始序列为单链核酸引物。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述不依赖于模板的核酸合成在约60℃至约95℃的温度范围内进行。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述方法用于不依赖于模板的具有随机核苷酸序列的核酸的合成，并且所述至少一种核苷三磷酸或核苷三磷酸的组合不包括终止核苷三磷酸。11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述方法用于不依赖于模板的序列受控的核酸合成，并且所述至少一种核苷三磷酸为包含可逆3
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阻断基团的终止核苷三磷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：I，
申请(专利权)人：辛希克斯，
类型：发明
国别省市：