用于聚脱氧核苷酸合成的经修饰的非模板依赖性酶制造技术

本发明专利技术包含用于鉴定如经修饰的末端核苷酸基转移酶(TdT)等能够在不使用模板的情况下将包括可移除的3'

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于聚脱氧核苷酸合成的经修饰的非模板依赖性酶
[0001]相关申请
[0002]本申请要求于2020年6月3日提交的美国申请序列第16/891,449号的优先权和权益，该美国申请的内容通过引用并入本文。


[0003]本专利技术涉及用于从头合成具有期望序列并且不使用模板的多核苷酸的经修饰的酶。因此，本专利技术提供了制备用于研究、基因工程和基因疗法的不同序列和不同长度的多核苷酸文库的能力。

技术介绍

[0004]大多数从头核酸序列是使用30多年前开发的固相亚磷酰胺技术合成的。该技术涉及对由对应于天然(或非天然)核酸碱基的亚磷酰胺试剂构建的序列进行顺序脱保护和合成。然而，亚磷酰胺核酸合成是长度受限的，因为长度大于200个碱基对(bp)的核酸经历高断裂速率和副反应。另外，亚磷酰胺合成产生有毒性副产物，并且这种废物的处置限制了核酸合成器的可用性，并且增加了合同低聚核苷酸生产的成本。(据估计，每年对寡核苷酸合成的需求造成了超过300,000加仑的危险化学废物，包含乙腈、三氯乙酸、甲苯、四氢呋喃和吡啶)。参见LeProust等人,《核酸研究(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种经修饰的末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)，其包括选自由以下组成的组的突变：E33K、E180L、E180K、M192E、M192K、M192W、W3O3H、L381K、L381Q、L381R、L381V、W450H、R454I、R454T、R454K、E457K、R461V、R461Q、R461V、N474R和N474K，所述经修饰的TdT能够在不存在核酸模板的情况下将核苷酸类似物添加到核酸引发剂的3'
‑
OH，所述核苷酸类似物在所述类似物的3'
‑
O处包括可移除的封闭部分。2.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括突变E457K。3.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括所述突变E180K、M192W、L381R和W450H。4.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括所述突变L381Q和W450H。5.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括所述突变E180L、M193E、L381K、R461Q和N457K。6.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括所述突变E180K、L381Q、W450H和R461V。7.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括所述突变L381Q和W450H。8.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括所述突变E180L、M192E、L381K、R461Q和N457K。9.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括所述突变E180K、M192E、L381K、R454T和N47K。10.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括所述突变E180K、M192K、L381K、R454T和N457R。11.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括所述突变E180K、M192K、L381K、R454K和N457K。12.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括所述突变M192E、L381V、R454I和R461V。13.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括所述突变E180K和L381R。14.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其包括所述突变E180K、M192K、L381K、R454K和N474R。15.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，其中与天然TdT相比，所述经修饰的TdT能够以增加的速率将包括所述可移除的3'
‑
O
‑
封闭部分的所述核苷酸类似物添加到所述核酸引发剂的所述3'
‑
OH。16.根据权利要求1所述的经修饰的TdT，相对于天然TdT，其包括N末端截短。17.根据权利要求15所述的经修饰的TdT，其中所述经修饰的TdT包括N末端t
‑
131鼠TdT和与N末端连接的蛋白质标签序列。18.根据权利要求15所述的经修饰的TdT，其中所述经修饰的TdT包括N末端t

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：分子组装公司，
类型：发明
国别省市：