高活性高稳定性甘油-3-磷酸氧化酶突变体的制备及其应用制造技术

本发明专利技术公开了高活性高稳定性甘油‑3‑磷酸氧化酶突变体的制备及其应用，属于基因工程及酶工程技术领域。本发明专利技术利用AI辅助的酶分子高效设计手段基于野生型甘油‑3‑磷酸氧化酶设计了15种单点突变体，依据单点突变体的测试结果设计了若干组合突变体，并进一步对酶活和稳定性进行评价，最终筛选到5组突变体组合较野生型酶活提升25％以上，热稳定性提升125％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及高活性高稳定性甘油-3-磷酸氧化酶突变体的制备及其应用，属于基因工程及酶工程。

技术介绍

1、甘油-3-磷酸氧化酶(glycerol-3-phosphate oxidase，简称g3po)是一种重要的代谢酶，广泛应用于科研和临床检测中。该酶主要催化甘油-3-磷酸(g3p)与氧气反应，生成二羟基丙酮磷酸(dhap)和过氧化氢(h2o2)，通过检测h2o2与4-氨基安替比林(4-aa)反应等生成的红色醌类化合物在510nm处的吸光值变化，可以确定g3po的活性。

2、g3po常与脂蛋白脂肪酶和甘油激酶联合使用，用于甘油三酯(tg)检测试剂盒(酶法)的开发，其检测原理为：血清中的甘油三酯经脂蛋白脂肪酶催化形成甘油和游离的脂肪酸，在甘油激酶的作用下，甘油转化为甘油-3-磷酸，甘油-3-磷酸经过g3po催化形成过氧化氢，过氧化氢、4-氨基安替比林、2羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠在过氧化物酶的催化下形成红色的醌亚胺，通过吸光度的变化来反映测试样本中的甘油三酯含量。

3、酶法检测甘油三酯的关键在酶，野生型g3po的热稳定性较差，在高温本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种性能提升的甘油-3-磷酸氧化酶突变体，其特征在于，所述甘油-3-磷酸氧化酶突变体是在SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的基础上，第6、24、57、86、90、120、125、141、157、170、354、380、387、389、393、396、422、464、479、499、516、531、547、580、586、604位的位置具有一个或者多个氨基酸突变。

2.根据权利要求1所述的甘油-3-磷酸氧化酶突变体，其特征在于，在SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的基础上，

3.编码权利要求1～2任一所述甘油-3-磷酸氧化酶突变体的多核苷酸。

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【技术特征摘要】

1.一种性能提升的甘油-3-磷酸氧化酶突变体，其特征在于，所述甘油-3-磷酸氧化酶突变体是在seq id no.1所示氨基酸序列的基础上，第6、24、57、86、90、120、125、141、157、170、354、380、387、389、393、396、422、464、479、499、516、531、547、580、586、604位的位置具有一个或者多个氨基酸突变。

2.根据权利要求1所述的甘油-3-磷酸氧化酶突变体，其特征在于，在seq id no.1所示氨基酸序列的基础上，

3.编码权利要求1～2任一所述甘油-3-磷酸氧化酶突变体的多核苷酸。

4.携带权利要求3所述多核苷酸的质粒载体。

5.根据权利要求4所述质粒载体，其特征在于，包括pet-28a、pet-30a、pgex-4t、pmal-c2x、pbad/hisa、pcold i、ptrchisa。

6.表达权利要求1～2任一所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨广宇，李瑞，洪伟，周桓，赵阳，施婧妮，罗漫杰，
申请(专利权)人：武汉瀚海新酶生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：