基于免疫肽组学高通量筛选病毒CTL表位的方法、限制性表位肽、核酸分子和应用技术

本发明专利技术属于生物领域，公开了一种基于免疫肽组学高通量筛选病毒CTL表位的方法，采用串联有MHC I分子的α链与β2m链的真核表达质粒转染哺乳动物细胞，建立表达动物MHC I分子的哺乳动物细胞系；利用病毒感染表达MHC I分子的哺乳动物细胞系制备MHC I‑肽复合体；获取MHC I‑肽复合体中所存在的抗原肽。该方法以鸡MHC I等位基因BF2*1901分子为研究对象、H9N2亚型禽流感病毒为模式病毒，全面表征鸡MHC I限制性H9N2抗原肽组，并鉴定免疫优势的CTL表位免疫，适用于不同鸡MHC I分子、不同亚型禽流感病毒的CTL表位筛选，为研究鸡MHC I分子与抗原肽的特异性结合提供快速、高效、经济技术手段，为重大动物病原的T细胞表位筛选提供了有利参考，为家禽抗病育种、新型疫苗开发及免疫评价策略提供科学依据。同时，本发明专利技术还公开了限制性表位肽、核酸分子和应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，更具体而言，涉及一种基于免疫肽组学高通量筛选病毒ctl表位的方法、限制性表位肽、核酸分子和应用。

技术介绍

1、mhc i分子是适应性免疫应答的核心，在病毒感染时病毒蛋白被宿主的蛋白酶体系统通过内源性途径识别、降解，进而生成短肽段。这些肽段随后由tap蛋白转运至内质网，与与新组装的mhc i分子结合。装载病毒肽段的mhc类i分子随后被运输到细胞表面，形成肽-mhc i复合体。通过mhc i分子与抗原肽结合形成的phla复合物被tcr识别，高度特异性激活cd8+t淋巴细胞(ctl细胞)响应，从而精确地识别和清除体内被病原感染细胞，而不损害正常细胞。传统灭活疫苗介导的体液免疫在面对禽流感病毒(aiv)等具有快速突变、重组特性的病原时疫苗株不匹配当前流行毒株，很难为宿主提供足够的保护。由mhc i分子递呈病毒蛋白衍生的抗原表位能有效激活t细胞免疫反应并诱导交叉保护，提高细胞免疫水平可以有效地控制病原感染，改善灭活疫苗的有效性。因此靶向能诱导细胞免疫的新型疫苗成为研究热点，研究mhc i分子与病毒抗原肽的相互作用关系以及鉴定具有免疫活性的t细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于免疫肽组学高通量筛选病毒CTL表位的方法，其特征在于，采用串联有MHCI分子的α链与β2m链的真核表达质粒转染哺乳动物细胞，建立表达动物MHC I分子的哺乳动物细胞系；利用病毒感染表达MHC I分子的哺乳动物细胞系制备MHC I-肽复合体；获取MHCI-肽复合体中所存在的抗原肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述串联有MHC I分子的α链与β2m链的真核表达质粒的制备方法为：在MHC I分子的α链与β2m链串联表达质粒时将α链胞外区以柔性Linker(G4S)4连接β2m链形成MHC I分子二聚体，并在β2m链的3’端插入Twin-Strep标签。<...

【技术特征摘要】

1.一种基于免疫肽组学高通量筛选病毒ctl表位的方法，其特征在于，采用串联有mhci分子的α链与β2m链的真核表达质粒转染哺乳动物细胞，建立表达动物mhc i分子的哺乳动物细胞系；利用病毒感染表达mhc i分子的哺乳动物细胞系制备mhc i-肽复合体；获取mhci-肽复合体中所存在的抗原肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述串联有mhc i分子的α链与β2m链的真核表达质粒的制备方法为：在mhc i分子的α链与β2m链串联表达质粒时将α链胞外区以柔性linker(g4s)4连接β2m链形成mhc i分子二聚体，并在β2m链的3’端插入twin-strep标签。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞为293f细胞系。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述病毒为h9n2病毒。...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙怡朋，张念之，黄诗悦，郭廷婷，王贞，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：