自极化免疫细胞制造技术

本公开涉及包含融合蛋白的经修饰的免疫细胞以及使用和制备包含融合蛋白的免疫细胞的方法。本公开还涉及包含外源细胞因子和嵌合抗原受体的经修饰的免疫细胞以及使用和制备所述免疫细胞的方法。所述免疫细胞的方法。所述免疫细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】自极化免疫细胞
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2021年2月2日提交的美国临时专利申请号63/144,860的优先权和权益，该美国临时专利申请的全部内容以引用方式并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请包含以ASCII格式电子提交并且特此以引用方式整体并入的序列表。所述ASCII副本创建于2022年1月27日，被命名为2012851
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0124_SL.txt，并且大小为569,792字节。

技术介绍

[0005]巨噬细胞是免疫响应的强大调节剂，并且一般可以采用促炎(M1)或抗炎(M2)表型。M1/M2巨噬细胞的精确平衡对于解析身体对疾病和损伤的响应非常重要，并且各种疾病都包括M1/M2表型失调。例如，肿瘤微环境(TME)中的巨噬细胞通常偏向于保护肿瘤的M2表型，而动脉粥样硬化组织中的M1巨噬细胞促进斑块进展。
[0006]因此，需要建立一种方法来遗传控制和/或维持用于细胞疗法的工程化免疫细胞的M1/M2极化。

技术实现思路

[0007]本公开尤其涵盖包含含有外源细胞因子的经修饰的免疫细胞(例如，干细胞、巨噬细胞、单核细胞和/或树突细胞)的组合物及其产生方法。本公开尤其还涵盖包含含有融合蛋白的经修饰的免疫细胞(例如，干细胞、巨噬细胞、单核细胞和/或树突细胞)的组合物及其产生方法。
[0008]本公开提供了一种使用基于细胞因子的信号传导建立对免疫细胞(例如，干细胞、巨噬细胞、单核细胞和/或树突细胞)表型的遗传控制的系统。本公开尤其提供了促炎(M1)或抗炎(M2)促进外源细胞因子与嵌合抗原受体(CAR)在免疫细胞(例如，干细胞、巨噬细胞、单核细胞和/或树突细胞)中的共表达，这使得免疫细胞能够产生大量表达的外源细胞因子。另外，促炎(M1)促进外源细胞因子和CAR在免疫细胞(例如，干细胞、巨噬细胞、单核细胞和/或树突细胞)中的共表达使得免疫细胞能够“自极化”成M1表型。类似地，抗炎(M2)促进外源细胞因子和CAR在免疫细胞(例如，干细胞、巨噬细胞、单核细胞和/或树突细胞)中的共表达使得免疫细胞能够“自极化”成M2表型。
[0009]本公开尤其还提供了融合蛋白，其中促炎(M1)或抗炎(M2)促进细胞因子直接与其对应受体亚基中的一个融合，使得细胞因子可以分子内结合其栓系受体并诱导下游信号传导。与天然存在的可溶性细胞因子不同，本公开的栓系细胞因子被设计成仅刺激经修饰的免疫细胞(例如，干细胞、巨噬细胞、单核细胞和/或树突细胞)；直接与受体融合可以防止细胞因子从细胞膜扩散，并且由于局部浓度高而可以促进快速结合动力学。因此，这种栓系细胞因子
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细胞因子受体融合蛋白设计可向经修饰的免疫细胞(例如，干细胞、巨噬细胞、单核细胞和/或树突细胞)提供组成型促炎(M1)或抗炎(M2)促进信号，其中对周围细胞产生细胞
毒性作用的风险降至最低。
[0010]在一方面，本公开提供了一种包含融合蛋白的经修饰的免疫细胞，所述融合蛋白包含细胞因子、接头和细胞因子受体，其中所述经修饰的免疫细胞是干细胞、巨噬细胞、单核细胞或树突细胞，并且所述细胞因子结合所述细胞因子受体。在一些实施方案中，融合蛋白是膜结合的。在一些实施方案中，接头是柔性接头。在一些实施方案中，接头是可裂解接头。
[0011]在一些实施方案中，经修饰的免疫细胞还包含嵌合抗原受体(CAR)。
[0012]在一些实施方案中，融合蛋白还包含信号肽。在一些实施方案中，融合蛋白从N末端到C末端包含：信号肽、细胞因子、接头和细胞因子受体。在一些实施方案中，融合蛋白包含与选自表2a、表2b、表3a、表3b、表6、表8或表9的序列至少80％同一的氨基酸序列。
[0013]在另一方面，本公开提供了一种包含一种或多种编码融合蛋白的核酸的经修饰的免疫细胞，所述融合蛋白包含细胞因子、接头和细胞因子受体，其中所述经修饰的免疫细胞是干细胞、巨噬细胞、单核细胞或树突细胞，并且所述细胞因子结合所述细胞因子受体。在一些实施方案中，融合蛋白是膜结合的。在一些实施方案中，接头是柔性接头。在一些实施方案中，接头是可裂解接头。
[0014]在一些实施方案中，经修饰的免疫细胞还包含嵌合抗原受体(CAR)。
[0015]在一些实施方案中，融合蛋白还包含信号肽。在一些实施方案中，融合蛋白从N末端到C末端包含：信号肽、细胞因子、接头和细胞因子受体。在一些实施方案中，一种或多种编码融合蛋白的核酸包含与选自表10的序列至少80％同一的序列。在一些实施方案中，一种或多种编码融合蛋白的核酸包含与选自表11a或11b的序列至少80％同一的序列。在一些实施方案中，一种或多种核酸包含与选自表4a、表4b或表7的序列至少80％同一的序列。在一些实施方案中，一种或多种核酸包含与选自表5a或表5b的序列至少80％同一的序列。在一些实施方案中，一种或多种核酸包含与选自表8的信号肽序列至少80％同一的序列。在一些实施方案中，一种或多种核酸包含与选自表8的接头序列至少80％同一的序列。
[0016]在一些实施方案中，信号肽是或包括CD8a、IgGκ、PDGFR
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β、I型干扰素(IFN
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α1、IFN
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α2、IFN
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α4、IFN
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α5、IFN
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α6、IFN
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α7、IFN
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α8、IFN
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α10、IFN
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α13、IFN
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α14、IFN
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α16、IFN
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α17、IFN
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α21、IFN
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β、IFN
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ω、IFN
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ε或IFN
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κ)、II型干扰素(IFN
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γ)、III型干扰素(IFN
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λ1、IFN
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λ2、IFN
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λ3或IFN
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λ4)、TNF
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α、IL
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1β、IL
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6、IL
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12、IL
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17、IL
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23、GM
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CSF、IL
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4、IL
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10、IL
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13、IL
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18、M
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CSF、TGF
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β、IFNAR1、IFNAR2、IFNGR1、IFNGR2、IFNLR1、TNFR1、TNFR2、IL
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1R1、IL
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1R3、IL
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6Rα、gp130、IL
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12Rβ1、IL
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12Rβ2、IL
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17RA、IL
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17RB、IL...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种经修饰的免疫细胞，所述经修饰的免疫细胞包含融合蛋白，所述融合蛋白包含细胞因子、接头和细胞因子受体，其中所述经修饰的免疫细胞是干细胞、巨噬细胞、单核细胞或树突细胞，并且所述细胞因子结合所述细胞因子受体。2.如权利要求1所述的经修饰的免疫细胞，其中所述融合蛋白是膜结合的。3.如权利要求1或2所述的经修饰的免疫细胞，其中所述接头是柔性接头。4.如权利要求1
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3中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述接头是可裂解接头。5.如权利要求1
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4中任一项所述的经修饰的免疫细胞，所述经修饰的免疫细胞还包含嵌合抗原受体(CAR)。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述融合蛋白还包含信号肽。7.如权利要求6所述的经修饰的免疫细胞，其中所述融合蛋白从N末端到C末端包含：所述信号肽、所述细胞因子、所述接头和所述细胞因子受体。8.如权利要求1
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7中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述融合蛋白包含与选自表2a、表2b、表3a、表3b、表6、表8或表9的序列至少80％同一的氨基酸序列。9.一种经修饰的免疫细胞，所述经修饰的免疫细胞包含一种或多种编码融合蛋白的核酸，所述融合蛋白包含细胞因子、接头和细胞因子受体，其中所述经修饰的免疫细胞是干细胞、巨噬细胞、单核细胞或树突细胞，并且所述细胞因子结合所述细胞因子受体。10.如权利要求9所述的经修饰的免疫细胞，其中所述融合蛋白是膜结合的。11.如权利要求9或10所述的经修饰的免疫细胞，其中所述接头是柔性接头。12.如权利要求9
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11中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述接头是可裂解接头。13.如权利要求9
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12中任一项所述的经修饰的免疫细胞，所述经修饰的免疫细胞还包含嵌合抗原受体(CAR)。14.如权利要求13所述的经修饰的免疫细胞，其中所述融合蛋白还包含信号肽。15.如权利要求14所述的经修饰的免疫细胞，其中所述融合蛋白从N末端到C末端包含：所述信号肽、所述细胞因子、所述接头和所述细胞因子受体。16.如权利要求9
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15中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述一种或多种核酸包含与选自表10的序列至少80％同一的序列。17.如权利要求9
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15中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述一种或多种核酸包含与选自表11b的序列至少80％同一的序列。18.如权利要求9
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15中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述一种或多种核酸包含与选自表4a、表4b或表7的序列至少80％同一的序列。19.如权利要求9
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15中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述一种或多种核酸包含与选自表5a或表5b的序列至少80％同一的序列。20.如权利要求9
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15中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述一种或多种核酸包含与选自表8的信号肽序列至少80％同一的序列。21.如权利要求9
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15中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述一种或多种核酸包含与选自表8的接头序列至少80％同一的序列。
22.如权利要求1
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21中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述信号肽是或包括CD8a、IgGκ、PDGFR
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β、I型干扰素(IFN
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α1、IFN
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α2、IFN
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α4、IFN
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α5、IFN
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α6、IFN
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α7、IFN
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α8、IFN
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α10、IFN
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α13、IFN
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α14、IFN
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α16、IFN
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α17、IFN
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α21、IFN
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β、IFN
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ω、IFN
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ε或IFN
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κ)、II型干扰素(IFN
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γ)、III型干扰素(IFN
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λ1、IFN
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λ2、IFN
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λ3或IFN
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λ4)、TNF
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α、IL
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1β、IL
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6、IL
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12、IL
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17、IL
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23、GM
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CSF、IL
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4、IL
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10、IL
‑
13、IL
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18、M
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CSF、TGF
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β、IFNAR1、IFNAR2、IFNGR1、IFNGR2、IFNLR1、TNFR1、TNFR2、IL
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1R1、IL
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1R3、IL
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6Rα、gp130、IL
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12Rβ1、IL
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12Rβ2、IL
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17RA、IL
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17RB、IL
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17RC、IL
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23R、CSF2
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Rα、CSF2
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Rβ、IL
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4Rα、IL
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4Rα1、IL
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2Rγc、IL
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10R1、IL
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10R2、IL
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13Rα1、IL
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18Rα、IL
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18Rβ、CSF1
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R、TGF
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βR1或TGF
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βR2信号肽。23.如权利要求1
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22中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述细胞因子是或包括促炎细胞因子。24.如权利要求1
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22中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述细胞因子是或包括抗炎细胞因子。25.如权利要求23所述的经修饰的免疫细胞，其中所述细胞因子是或包括I型干扰素(IFN
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α1、IFN
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α2、IFN
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α4、IFN
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α5、IFN
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α6、IFN
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α7、IFN
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α8、IFN
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α10、IFN
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α13、IFN
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α14、IFN
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α16、IFN
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α17、IFN
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α21、IFN
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β、IFN
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ω、IFN
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ε或IFN
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κ)、II型干扰素(IFN
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γ)、III型干扰素(IFN
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λ1、IFN
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λ2、IFN
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λ3或IFN
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λ4)、TNF
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α、IL
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1β、IL
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6、IL
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12、IL
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17、IL
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23或GM
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CSF。26.如权利要求24所述的经修饰的免疫细胞，其中所述细胞因子是或包括IL
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4、IL
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10、IL
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13、IL
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18、M
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CSF或TGF
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β。27.如权利要求1
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22中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述细胞因子是或包括I型干扰素(IFN
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α1、IFN
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α2、IFN
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α4、IFN
‑
α5、IFN
‑
α6、IFN
‑
α7、IFN
‑
α8、IFN
‑
α10、IFN
‑
α13、IFN
‑
α14、IFN
‑
α16、IFN
‑
α17、IFN
‑
α21、IFN
‑
β、IFN
‑
ω、IFN
‑
ε或IFN
‑
κ)、II型干扰素(IFN
‑
γ)、III型干扰素(IFN
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λ1、IFN
‑
λ2、IFN
‑
λ3或IFN
‑
λ4)、TNF
‑
α、IL
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1β、IL
‑
6、IL
‑
12、IL
‑
17、IL
‑
23、GM
‑
CSF、IL
‑
4、IL
‑
10、IL
‑
13、IL
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18、M
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CSF或TGF
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β。28.如权利要求1
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22中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述细胞因子受体是或包括促炎细胞因子受体。29.如权利要求1
‑
22中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述细胞因子受体是或包括抗炎细胞因子受体。30.如权利要求28所述的经修饰的免疫细胞，其中所述细胞因子受体是或包括IFNAR1、IFNAR2、IFNGR1、IFNGR2、IFNLR1、TNFR1、TNFR2、IL
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1R1、IL
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1R3、IL
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6Rα、gp130、IL
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12Rβ1、IL
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12Rβ2、IL
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17RA、IL
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17RB、IL
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17RC、IL
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23R、CSF2
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Rα或CSF2
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Rβ。31.如权利要求29所述的经修饰的免疫细胞，其中所述细胞因子受体是或包括IL
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4Rα、IL
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4Rα1、IL
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2Rγc、IL
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10R1、IL
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10R2、IL
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13Rα1、IL
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18Rα、IL
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18Rβ、CSF1
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R、TGF
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βR1或TGF
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βR2。32.如权利要求1
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3a中任一项所述的经修饰的免疫细胞，其中所述细胞因子受体是或包括IFNAR1、IFNAR2、IFNGR1、IFNGR2、IFNLR1、TNFR1、TNFR2、IL
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1R1、IL
‑
1R3、IL
‑
6...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：凯瑞斯马治疗公司，
类型：发明
国别省市：