一种小分子抑制剂药物增强NK细胞抗肿瘤作用的用途及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗肿瘤制剂，所述制剂包括经Venetoclax处理的NK细胞。本发明专利技术还涉及提高NK细胞肿瘤杀伤活性的培养基或试剂盒、Venetoclax在制备具有提高的肿瘤杀伤活性的NK细胞中的用途和制备具有提高的肿瘤杀伤活性的NK细胞的方法。使用Venetoclax培养的NK细胞在保持原有NK细胞高活率的同时表现出杀伤性能卓越，并且在肿瘤微环境中能够维持其数量和活性，从而保持强大的肿瘤杀伤活性。从而保持强大的肿瘤杀伤活性。

【技术实现步骤摘要】
一种小分子抑制剂药物增强NK细胞抗肿瘤作用的用途及其应用


[0001]本专利技术涉及细胞免疫治疗领域，具体地，本专利技术涉及一种小分子抑制剂药物增强NK细胞抗肿瘤作用的用途及其应用，所述小分子抑制剂药物为Venetoclax，其直接激活NK细胞，并显著促进NK细胞抗肿瘤免疫治疗的效果。

技术介绍

[0002]过继性免疫细胞治疗是一种治疗临床选择有限的血液肿瘤以及实体恶性肿瘤的有前途的新方法，也是当前肿瘤治疗领域的热点之一。近年来，嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T细胞)在治疗血液恶性肿瘤方面取得了显著的成效。然而，CAR
‑
T细胞在临床应用中存在细胞因子风暴、神经毒性、移植物抗宿主病等不良反应，同时对实体瘤的治疗效果尚不理想，这使得CAR
‑
T细胞的临床应用仍面临挑战。自然杀伤(NK)细胞是一种独特的先天性淋巴细胞群，具有识别和消除病毒感染细胞和肿瘤细胞的内在能力。NK细胞相较于T细胞，具有更好的安全性，不会引起细胞因子风暴和移植物抗宿主病等副作用。此外，NK细胞不需要抗原递呈和不受MHC限制，可直接杀伤肿瘤细胞。NK细胞可通过多种识别机制识别和杀伤肿瘤，抗瘤谱广泛，因此在抗肿瘤治疗中有广泛的应用前景，成为细胞免疫治疗研发领域的热点。然而，基于NK细胞的免疫治疗在研发过程中面临的挑战之一是NK细胞在体内抗肿瘤活性较弱，影响其在体内的效果。因此，增强NK细胞抗肿瘤活性对NK细胞免疫疗效至关重要。
[0003]BCL
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2蛋白由BCL
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2基因编码翻译表达，是BCL
‑
2家族中一个十分重要的抗凋亡蛋白。研究表明BCL
‑
2蛋白在多种肿瘤细胞中高表达且与化疗药物耐药密切相关。Venetoclax，作为一种BCL
‑
2的特异性小分子抑制剂药物，其与去甲基化药物阿扎胞苷联用可在不适合接受化疗的老年急性髓性白血病患者中产生快速和持久的应答，因而被FDA批准用于治疗急性髓系白血病的患者。但Venetoclax在NK细胞功能及其免疫治疗方面的研究并不深入。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在解决现有技术的缺陷，提供一种增强NK细胞对于肿瘤细胞杀伤活性的小分子抑制剂及其应用。
[0005]为了解决上述的技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：
[0006]一方面，本专利技术提供抗肿瘤制剂，其特征在于，所述制剂包括经Venetoclax处理的NK细胞。
[0007]在一些实施方案中，所述NK细胞来源于脐带血、急性髓系白血病患者骨髓、外周血例如正常供者外周血、永生化NK细胞系NK92、iPSC衍生的NK细胞或脐带血来源的CD34
+
HSPC诱导分化而来的NK细胞。
[0008]另一方面，本专利技术提供提高NK细胞肿瘤杀伤活性的培养基或试剂盒，其特征在于，所述培养基或试剂盒包括基础培养基和Venetoclax，所述基础培养基选自RPIM1640培养
基、SCGM培养基、IMDM培养基和DMEM培养基。
[0009]在一些实施方案中，所述培养基或试剂盒还包括选自IL
‑
12、IL
‑
15、IL
‑
2和IL
‑
18的两种或更多种细胞因子。
[0010]在一些实施方案中，所述Venetoclax的含量为200
‑
1000nM，优选200
‑
500nM、200
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600nM、200
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700nM、200
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800nM、200
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900nM、200
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1000nM、200
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1100nM、200
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1200nM、200
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1300nM、200
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1400nM、200
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1500nM、200
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1600nM、200
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1700nM、200
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1800nM、200
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1900nM，更优选400nM。
[0011]在一些实施方案中，所述细胞因子为IL
‑
12和IL
‑
15，所述IL
‑
12的浓度为5
‑
20ng/mL，优选10ng/mL，所述IL
‑
15的浓度为5
‑
100ng/mL，优选50ng/mL。
[0012]另一方面，本专利技术提供Venetoclax在制备具有提高的肿瘤杀伤活性的NK细胞中的用途。
[0013]另一方面，本专利技术提供Venetoclax在制备提高NK细胞肿瘤杀伤活性的试剂中的用途，任选地，所述试剂还包括选自IL
‑
12、IL
‑
15、IL
‑
2和IL
‑
18的两种或更多种细胞因子。
[0014]另一方面，本专利技术提供治疗受试者的肿瘤的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的经Venetoclax处理的NK细胞。
[0015]另一方面，本专利技术提供制备具有提高的肿瘤杀伤活性的NK细胞的方法，所述方法包括用上述的培养基培养所述NK细胞，并分离出经培养的细胞。
[0016]另一方面，本专利技术提供提高NK细胞肿瘤杀伤活性的方法，其特征在于，所述方法包括用上述培养基培养所述NK细胞。
[0017]在一些实施方案中，所述NK细胞来自于受试者。
[0018]在一些实施方案中，所述肿瘤选自急性髓系白血病、B细胞淋巴瘤、三阴性乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌和肝癌。
[0019]定义
[0020]Venetoclax，一种BCL
‑
2的特异性抑制剂，其化学式为C
45
H
50
ClN7O7S。
[0021]其结构式为
[0022][0023]KG1a细胞：KG1a是一种人类急性髓系白血病细胞系，KG1a细胞系是一种较为原始的细胞系，有干细胞特性，可以诱导分化成不同的细胞类型，如髓样、粒细胞、单核细胞和红细胞系。几乎所有KG1a细胞都表达CD34和CD38，这两种表面标记物是髓系细胞和干细胞的标记物之一。可以用于研究急性髓系白血病和其他白血病相关的基础和临床问题。
[0024]THP1细胞：THP1是一种人类单核细胞白血病细胞系，THP1细胞系是一种较为原始的细胞系，可以诱导分化成巨噬细胞或者树突状细胞。THP1细胞系表面高表达一些单核细胞和/或巨噬细胞分化与激活相关的标记分子，如CD11b，CD64，CD14等。
[0025]效靶比：本专利技术涉及效靶比为0.5:1、1:1、2.5:1、5:1。进行多个效靶比可以评估NK细胞对不同靶细胞的杀伤效果，从而确定NK细胞的杀伤能力和特异性。这有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗肿瘤制剂，其特征在于，所述制剂包括经Venetoclax处理的NK细胞。2.根据权利要求1所述的抗肿瘤制剂，其特征在于，所述NK细胞来源于脐带血、急性髓系白血病患者骨髓、外周血例如正常供者外周血、永生化NK细胞系NK92、iPSC衍生的NK细胞或脐带血来源的CD34
+
HSPC诱导分化而来的NK细胞。3.提高NK细胞肿瘤杀伤活性的培养基或试剂盒，其特征在于，所述培养基或试剂盒包括基础培养基和Venetoclax，所述基础培养基选自RPIM1640培养基、SCGM培养基、IMDM培养基和DMEM培养基。4.根据权利要求3所述的培养基或试剂盒，其特征在于，所述培养基或试剂盒还包括选自IL
‑
12、IL
‑
15、IL
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2和IL
‑
18的两种或更多种细胞因子。5.根据权利要求3或4所述的培养基或试剂盒，其特征在于，所述Venetoclax的含量为200
‑
1000nM，优选200
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500nM、200
‑
600nM、200
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700nM、200
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800nM、200
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900nM、200
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1000nM、200
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1100nM、200
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1200nM、200...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪芳，郑昌成，汪焱，
申请(专利权)人：中国科学技术大学，
类型：发明
国别省市：