经修饰的B细胞及其使用方法技术

本发明专利技术涉及经基因修饰的B细胞以及其用途，例如，用于治疗各种疾病和病症，包含癌症、心脏病、炎性疾病、肌肉萎缩疾病、神经疾病等。在某些实施例中，本发明专利技术涉及一种分离的经修饰的B细胞(“CAR

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的B细胞及其使用方法

技术介绍

[0001]迄今为止，大多数细胞免疫疗法都集中在T细胞中。例如，癌症免疫疗法主要集中于T细胞的修饰和施用，从而增强杀伤T细胞对肿瘤的应答。然而，尽管B细胞在免疫应答中起着关键作用，但修饰B细胞用于治疗各种疾病是一项尚未得到广泛研究的技术。
[0002]B细胞(也称为B淋巴细胞)是一种白细胞，除了别的之外，其负责身体抵抗感染和疾病。B细胞是适应性免疫系统的一部分，并且能够产生各种免疫应答，例如，响应于经识别的抗原而分泌抗体。另外，B细胞能够呈递抗原，并且还可以分泌细胞因子。
[0003]许多B细胞成熟为产生能够抵抗感染的抗体(蛋白质)的浆细胞。其它B细胞成熟为记忆B细胞。从单个B细胞传代的所有浆细胞产生针对刺激其成熟的抗原的相同抗体。相同的原理适用于记忆B细胞。因此，所有浆细胞和记忆细胞“记住”引起其形成的刺激。B细胞或B淋巴细胞不是胸腺依赖性的，具有较短寿命，并且负责免疫球蛋白的产生。参见例如，https://www.medicinenet.com/script/main/art.asp？articlekey＝2413。B细胞因此是免疫学上重要的细胞。
[0004]B细胞似乎与癌症治疗中的患者结果相关。例如，三级淋巴结构(TLS)的存在与更好的患者结果相关。参见例如，Helmink,B.A.等人,《自然(Nature)》,2020,577(7791),549
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555；Petitprez F等人,《自然》,2020,577(7791),556
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560。TLS是响应于免疫刺激而出现的免疫细胞(主要是T细胞和B细胞)的聚集体。虽然围绕肿瘤细胞的TLS包含B细胞，但B细胞在抗肿瘤应答中的作用尚不清楚。肿瘤中发现的B细胞可以产生阻碍免疫细胞功能的抑制因子。参见例如，Kessel,A.等人,《自身免疫评论(Autoimmun Rev.)》,2012,11(9),670
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677；Khan,A.R.等人,《自然通讯(Nature Commun.)》,2015,6,5997。另外，目前的证据表明，在大多数癌症小鼠模型中，B细胞阻碍抗肿瘤应答。Affara,N.I.等人《癌细胞(Cancer Cell)》,2014,25(6),809
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821；Shalapour,S.等人,《自然》,2017,551,340
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345；Ammirante,M.等人,《自然》,2010,464,302
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305。然而，TLS结构中B细胞的存在与癌症免疫疗法的阳性临床结果相关。Petitprez 2020。LPS激活的脾细胞(包含B细胞)与检查点抑制剂的组合的瘤内注射已经显示出产生抗肿瘤应答。Soldevilla等人,《肿瘤免疫学(Oncoimmunology)》,2018,7:8,e1450711。
[0005]鉴于B细胞具有呈递抗原和分泌蛋白质的天然能力，作为用于靶向某些患病细胞类型并分泌治疗性有效载荷的细胞疗法具有很大的潜力。因此，除了T细胞疗法之外，还需要替代性治疗，如经工程化的B细胞，所述替代性治疗用于治疗各种疾病和病症，包含癌症、心脏病、炎性疾病、肌肉萎缩疾病、神经疾病等。

技术实现思路

[0006]现在已经发现，经工程化的B细胞在治疗如本文所叙述的各种疾病和病症中可以是有效的。本专利技术因此涉及经修饰的B细胞。
[0007]在某些实施例中，本专利技术涉及一种分离的经修饰的B细胞(“CAR
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B细胞”)，所述CAR
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B细胞能够表达嵌合受体(“CAR
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B受体”)，其中所述嵌合受体包括：(a)胞外结构域；(b)
跨膜结构域；以及(c)胞质结构域，所述胞质结构域包括至少一个信号传导结构域。在各个实施例中，所述胞外结构域包括胞外结合结构域和铰链结构域。在各个实施例中，所述胞外结合结构域识别在靶细胞的表面上表达的至少一种抗原或蛋白质。在各个实施例中，所述靶细胞选自由以下组成的组：肿瘤细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、骨细胞、血细胞、神经细胞、脂肪细胞、皮肤细胞和内皮细胞。在各个实施例中，所述B细胞表达多于一种CAR
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B受体构建体。在各个实施例中，所述CAR
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B受体包括多于一个胞外结合结构域。在各个实施例中，所述胞外结合结构域是单链可变片段(scFv)、或全长抗体、或受体或配体的胞外结构域。在各个实施例中，所述胞外结合结构域能够与选自由以下组成的组的抗原或蛋白质结合：PSMA、GPC3、ASGR1、ASGR2、肌聚糖蛋白、Corin和Her2。在各个实施例中，所述铰链结构域源自由以下组成的组：IgG、CD28和CD8。在各个实施例中，所述铰链结构域包含选自由SEQ ID No.27、29、31组成的组的核酸序列。在各个实施例中，所述胞质结构域包括对于B细胞受体而言天然的至少一个信号传导结构域。在各个实施例中，所述胞质结构域包括选自由以下组成的组的结构域：CD79a(免疫球蛋白α)、CD79b(免疫球蛋白β)、CD40、CD19、CD137、Fcγr2a、MyD88、CD21、Syk、FYN、LYN、PI3K、BTK、PLCγ2和BLNK。在各个实施例中，所述胞质结构域进一步包括共刺激结构域。
[0008]在各个实施例中，本专利技术包括一种分离的经修饰的B细胞，其中所述B细胞能够表达和分泌有效载荷，其中所述有效载荷不在B细胞中天然表达或者以比在B细胞中天然表达的水平高的水平表达。在各个实施例中，所述有效载荷是抗体或其片段。在各个实施例中，所述抗体是分泌抗体，并且可以包含阻断抗体(例如，抗PD
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1)或激动剂抗体(抗CD137、GITR、OX40)，所述阻断抗体或激动剂抗体被工程化以含有天然或经工程化的Fc区。在各个实施例中，所述抗体是膜结合的。在各个实施例中，所述有效载荷选自由以下组成的组：IL
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1、IL
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7、IL
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8、IL
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10、IL
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12、IL
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13、IL
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17、IL18、IL
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21、干扰素α、干扰素β、干扰素γ、TSLP、CCL21、FLT3L、XCL1、LIGHT(TNFSF14)、OX40L、CD137L、CD40L、ICOSL、抗CD3抗体、CD47、TIM4
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FC、CXCL13、CCL21、CD80、CD40L、IFNαA2、LIGHT、4
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1BBL、MDGF(C19orf10)、FGF10、PDGF、集聚蛋白、TNF
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α、GM
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CSF、抗FAP抗体、抗TGF
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β抗体；TGF
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β陷阱、诱饵或其它抑制分子；抗BMP抗体；BMP陷阱、诱饵或其它抑制分子。在各个实施例中，所述B细胞能够表达多于一个有效载荷。在各个实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的经修饰的B细胞，其能够表达整联蛋白、归巢抗体、蛋白质、受体或其组合，其中所述整联蛋白、归巢抗体、蛋白质或受体不在B细胞中天然表达或者以比在B细胞中天然表达的水平高的水平表达；并且其中所述整联蛋白、归巢抗体、蛋白质、受体或其组合被吸引到所关注位点或靶标。2.根据权利要求82所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述整联蛋白、归巢抗体、蛋白质和受体选自CLA(PSGL
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1糖型)、CLA(PSGL
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1糖型)、CCR10、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR9、CD43E、CD44、c
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Met、CXCR3、CXCR4、LFA
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1、LFA
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1(αLβ2)、选择蛋白配体、VLA
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4、VLA
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4(α4β1)和α4β7或其组合。3.根据权利要求83所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述所关注位点是归巢组织或靶组织、特定位置或组织中的炎性位点、或肿瘤或肿瘤微环境，其中有效载荷的递送是令人期望的。4.根据权利要求84所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述归巢组织或靶组织选自皮肤、肠道(肠、结肠、肠系膜淋巴结(mLN)、派伊尔结(Peyer's Patch，PP)、小肠)、肝脏、肺、骨髓、心脏、外周淋巴结(LN)、CNS、胸腺和骨髓。5.根据权利要求85所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述所关注靶标选自CXCL16、CCL17、CCL17(22)、CCL20(MIP
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3α)、CCL21、CCL25、CCL27、CCL28、CCL4、CCL5、CD62E、CD62P、CXCL10、CXCL12、CXCL13、CXCL16、CXCL9/CXCL10、CXCR3、E/P选择蛋白、E选择蛋白、GPR15L、HGF、透明质酸盐、ICAM
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1、CCR1、2、5的配体、MAdCAM、MAdCAM
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1、PNAd、VAP
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1、VCAM和VCAM
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1或其组合。6.一种治疗患者的方法，所述方法包括施用根据权利要求82所述的分离的经修饰的B细胞。7.根据权利要求87所述的方法，其进一步包括施用化合物或其衍生物，其中所述化合物或其衍生物能够增加整联蛋白、归巢抗体、蛋白质和受体或其组合的表达。8.根据权利要求88所述的方法，其中所述化合物或其衍生物能够改变B细胞到所述患者体内的所关注位点或靶标的转运。9.根据权利要求89所述的方法，其中所述化合物是全反式视黄酸(ATRA)或其衍生物。10.一种分离的经修饰的B细胞，其能够表达免疫抑制分子，其中所述免疫抑制分子不在B细胞中天然表达或者以比在B细胞中天然表达的水平高的水平表达。11.根据权利要求91所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述免疫抑制分子选自IL
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10、TGF
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β、PD
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L1、PD
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L2、LAG
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3和TIM
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3或其组合。12.根据权利要求92所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述免疫抑制分子能够减少B细胞在患者体内的所关注位点或靶标处的炎症和自身免疫活性。13.一种治疗患者的方法，所述方法包括施用根据权利要求91所述的分离的经修饰的B细胞。14.根据权利要求94所述的方法，其中所述免疫抑制分子选自IL
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10、TGF
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β、PD
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L1、PD
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L2、LAG
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3和TIM
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3或其组合。15.根据权利要求95所述的方法，其中所述免疫抑制分子能够减少B细胞在所述患者体内的所关注位点或靶标处的炎症和自身免疫活性。16.根据权利要求96所述的方法，其进一步包括施用化合物或其衍生物，所述化合物或
其衍生物能够增加整联蛋白、归巢抗体、蛋白质、受体或其组合在所述B细胞中的表达。17.根据权利要求97所述的方法，其中所述化合物或其衍生物能够改变B细胞到所述患者体内的所关注位点或靶标的转运。18.根据权利要求98所述的方法，其中所述化合物是全反式视黄酸(ATRA)或其衍生物。19.一种分离的经修饰的B细胞，其中所述分离的经修饰的B细胞用化合物或其衍生物处理，其中所述化合物或其衍生物能够增加整联蛋白、归巢抗体、蛋白质、受体或其组合在B细胞中的表达。20.根据权利要求100所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述化合物或其衍生物能够改变B细胞到所述患者体内的所关注位点或靶标的转运。21.根据权利要求101所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述化合物是全反式视黄酸(ATRA)或其衍生物。22.一种治疗患者的方法，所述方法包括施用根据权利要求100所述的分离的经修饰的B细胞，其中所述化合物或其衍生物能够(i)增加整联蛋白、归巢抗体、蛋白质、受体或其组合在B细胞中的表达并且(ii)改变B细胞到所述患者体内的所关注位点或靶标的转运。23.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：步行鱼治疗学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：